البحوث المناعية في المسالك البولية

إن تعيين منحنى immunogram لمريض المسالك البولية يعني أن الطبيب المعالج يفترض وجود اضطرابات في جهاز المناعة. مكررة، الفيروسية، والالتهابات الفطرية البكتيرية، وأمراض الحساسية، ويمكن أن يكون أمراض جهازية أعراض هذه الاضطرابات، والتي تتميز بعدد من متلازمات (العدوى والسرطان والحساسية، وأمراض المناعة الذاتية، تكاثري لمفي). قد يكون مريض واحد عدة متلازمات. على سبيل المثال، يمكن للأمراض المعدية المزمنة (متلازمة المعدية) يسبب نقص المناعة ونقص المناعة يمكن أن تتجلى نزعة للأمراض المعدية والسرطان (سرطان متلازمة). يمكن أن يحدث التهيؤ للعدوى على خلفية من نقص المناعة الثانوي ، الذي نشأ نتيجة لمرض التكاثر اللمفي ، على سبيل المثال ، سرطان الدم. هناك ثلاث مجموعات رئيسية من التغيرات المرضية في جهاز المناعة:

• القصور الكمي أو الوظيفي لواحد أو آخر من رابط المناعة ، مما يؤدي إلى تطور حالة نقص المناعة ؛
• انتهاك في التعرف على المستضد من قبل الجهاز المناعي ، مما يؤدي إلى تطوير عمليات المناعة الذاتية.
• استجابة مناعية مفرطة السرعة أو "منحرفة" ، تتجلى من خلال تطوير أمراض الحساسية.

هناك فحص (اختبارات المستوى 1) وتأهيل (اختبارات المستوى 2) أساليب immunodiagnostics. السابق موجود لإصلاح الانتهاكات في الجهاز المناعي ، وهذا الأخير - لإنشاء الآليات المشاركة في تنفيذها لغرض مزيد من التصحيح المناعي.

ب الخلوية صلة الحصانة

طرق الفحص

• تحديد العدد النسبي والمطلق للB-الخلايا الليمفاوية عن طريق المناعي أو التدفق الخلوي باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة لمستضدات B-الخلية (CD19، CD20، حيث CD - مجموعة من التمايز). محتوى B-lymphocyte طبيعي عند البالغين: 8-19٪ من العدد الكلي ل leukocytes أو 190-380 خلية / ميكرولتر. زيادة محتوى الخلايا الليمفاوية B يحدث في الالتهابات البكتيرية والفطرية الحادة والمزمنة، والأمراض المزمنة في الكبد، وأمراض النسيج الضام الجهازية، وسرطان الدم الليمفاوي المزمن، المايلوما المتعددة.
• تحديد تركيز المناعية nespespetsificheskih (F، M، G، E) من خلال المناعي واحد شعاعي، أو nephelometry turbometrii، المقايسة المناعية أو المناعي انزيم (EIA). معايير للبالغين: الغلوبولين المناعي (Ig) A 0.9-4.5 غم / لتر. IgM 03-3.7 g / l. IgG 8.0-17 جم / لتر. تحدث زيادة في تركيز الجلوبيولينات المناعية مع نفس الظروف المرضية التي تحدث فيها زيادة في محتوى الخلايا الليمفاوية البائية. الحد من تركيز المناعية في نقص غاماغلوبولين الدم الخلقية، أورام الجهاز المناعي، وإزالة الطحال، وفقدان البروتين، في أمراض الكلى أو الأمعاء، والمعاملة مع التخلاء وimmunodepreesantami.

تحديد الطرق

• تحديد المجمعات المناعية المتداولة في الدم عن طريق الترسيب الانتقائي في polysilene glycol متبوعة باختبار الكثافة الطيفية (الطبيعي 80-20 UE). زيادة التعقيدات المناعية المتداولة مميزة للعدوى البكتيرية ، والفطرية ، والفيروسية الحادة ، وأمراض المناعة الذاتية ، وأمراض نقص المناعة ، ومرض المصل ، والتفاعلات التحسسية من النوع 3 ؛
• تحديد المناعية محددة في الدم بالنسبة لمستضدات البكتيرية والفيروسية، وحمض النووي الريبي منقوص الأكسجين (DNA) في أمراض المناعة الذاتية، والتعرف على الحيوانات المنوية (العقم المناعة الذاتية) والأجسام المضادة protivopochechnyh (التهاب الحويضة والكلية والتهاب كبيبات الكلى) بواسطة المناعي الشعاعي أو ELISA.
• تحديد الأجسام المضادة antisperm في الحيوانات المنوية [مار-اختبار (رد فعل مضادات الغلوبولين المختلطة)] ، والقاعدة سالبة.
• تحديد تركيز الغلوبولينات المناعية في البول لغرض التشخيص التفريقي بين التهاب الحويضة والكلية والتهاب الكبيبات (انتقائية من بروتينية).
• تحديد IgE في عصير البروستات لتشخيص التهاب البروستات التحسسي عن طريق المناعية الشعاعية أو ELISA. 
• بحث في استجابة blasttransformation رد فعل من الخلايا الليمفاوية B على mitogen B-الخلية (الفتلاق mitogen لتحفيز رد فعل blasttransformation من B-لمفاوية في وجود الخلايا اللمفاوية التائية)، حيث القيمة القياسية من 95-100٪.

خلية T-link من الحصانة

طرق الفحص

• تحديد العدد النسبي والمطلق ناضجة CD3 T رد فعل لمفاوية المناعي أو تدفق cytofluorometry استخدام الألغام المضادة SDZ الاجسام المضادة. المعيار للبالغين هو 58-76 ٪ أو 1100-1700 خلايا / ميكرولتر. انخفاض عدد الخلايا اللمفاوية التائية هو مؤشر لعدم كفاية الارتباط الخلوي للحصانة. هذا هو سمة من عدة نقص المناعة الثانوية والابتدائية (الالتهابات البكتيرية والفيروسية المزمنة: مرض السل، ومتلازمة نقص المناعة والسرطان والفشل الكلوي المزمن، والصدمات النفسية، والإجهاد، والشيخوخة، وسوء التغذية، والعلاج بالأدوية السامة للخلايا، والإشعاع المؤين). زيادة عدد الخلايا اللمفاوية التائية هو على خلفية فرط النشاط المناعي أو أمراض التكاثرية اللمفية. مع الالتهاب ، يزيد عدد الخلايا اللمفاوية التائية أولاً ، ثم ينقص. يقترح غياب انخفاض في الخلايا اللمفاوية التائية تأخر عملية الالتهاب.
• تقييم subpopulations من الخلايا الليمفاوية.
  • تحديد عدد المساعدين T (الأجسام المضادة لـ CD4). عادة ، 36-55 ٪ أو 400-1100 خلايا / ميكرولتر. زيادة عدد هذه الخلايا يحدث في أمراض المناعة الذاتية والأمراض فالدنستريم، في مأمن تفعيل antitransplantatsionnogo. يحدث انخفاض في عدد الخلايا T-المساعد في، الفيروسية والتهابات المزمنة البكتيرية الطفيلية، والسل، ومتلازمة نقص المناعة، والأورام الخبيثة، والحروق، والصدمات النفسية، وسوء التغذية، والشيخوخة، والعلاج التخلاء، الإشعاعات المؤينة.
  • تحديد عدد مثبطات T (الأجسام المضادة لـ CD4). عادة ، 17-37 ٪ أو 300-700 خلية / ميكرولتر. تحدث زيادة في عدد مثبطات T مع نفس الظروف التي ينخفض فيها عدد المساعدين T ، وانخفاضها في نفس الظروف ، عندما يرتفع محتوى T-assisters.
  • مؤشر Immunoregulatory CD4 / CD8 ، في القاعدة 1،5-2،5. فرط النشاط عند معدلات أكثر من 2.5 (أمراض الحساسية وأمراض المناعة الذاتية) ؛ نقص النشاط - أقل من 1.0 (الاستعداد للالتهابات مزمنة). في بداية العملية الالتهابية ، يرتفع المؤشر المناعي ، وعندما ينحسر ، يتم تطبيعه.

تحديد الطرق

• تحديد عدد القتلة الطبيعية (الخلايا القاتلة الطبيعية) - الأجسام المضادة CD16 ومكافحة CD56-. المعيار ل 16 اللمفاويات CD 6-26 ٪ ، CD56 - 9-19 ٪. زيادة عدد NK الخلايا يحدث في رفض الكسب غير المشروع، وانخفاض - في الالتهابات الفيروسية والسرطان ونقص المناعة الأولية والثانوية، والحروق، والصدمات النفسية والإجهاد، والمعاملة مع التخلاء والإشعاع المؤين. 
• تحديد عدد الخلايا اللمفاوية التائية مع مستقبل الإنترلوكين -2 (علامة التنشيط) - الأجسام المضادة لـ CD25. القاعدة هي 10-15 ٪. وقد لوحظ زيادة في عددهم في أمراض الحساسية، رفض الزرع، استجابة لمستضدات التي تعتمد على الغدة الصعترية خلال العدوى الأولية الحادة، والحد - وفقا لنفس الأمراض التي تنطوي على خفض عدد NK-الخلايا.
• فحص التعبير عن علامة التنشيط - جزيء التوافق النسيجي من الدرجة الثانية HLA-DR. يحدث التعبير الزائد في العمليات الالتهابية ، في المرضى الذين يعانون من التهاب الكبد الوبائي سي ، والمرض الزلاقي ، والزهري ، والتهابات الجهاز التنفسي الحادة.
• تقييم موت الخلايا المبرمج من الخلايا الليمفاوية. مؤشرا على استعداد الخلايا اللمفاوية يمكن تحديدها من خلال التعبير عنها من سطح فاس مستقبلات (CD95) في الميتوكوندريا و BD-2 protooncogene. تم تقييم موت الخلايا المبرمج عن طريق تجهيز اللمفاويات اثنين من الأصباغ الفلورية: يوديد propidium، الذي يربط شظايا الحمض النووي وannexin Y، ملزمة لفسفاتيديل في غشاء الخلية التي تظهر في موت الخلايا المبرمج في وقت مبكر. يتم تقييم النتائج على تدفق cytofluorimeter. يعتمد احتساب النتائج على نسبة الخلايا الملطخة بالأصباغ المختلفة. خلايا غير ملوثين هي خلايا قابلة للحياة، ويرتبط فقط مع annexin وY، - العلامات المبكرة لموت الخلايا المبرمج، مع يوديد propidium وannexin I - مظاهر متأخرة من موت الخلايا المبرمج، تلطيخ فقط يوديد propidium يشير النخر.
• تقييم انتشار الخلايا اللمفاوية التائية في المختبر.
  • التغيير في استحداث الخلايا هو رد فعل لتحويل اللمفاويات إلى الانفجار. يتم تحضين الكريات البيض مع أي ميتوجن من أصل نباتي (lectins). أكثر استخداما phytohemagglutinin لمدة 72 ساعة ، ثم جعل لطخة ، وصمة عار وعد عدد من الانفجارات! مؤشر التحفيز هو نسبة النسبة المئوية للخلايا المتحولة في التجربة (الثقافة مع فيتويماجلوتينين) إلى النسبة المئوية للخلايا المتحولة في السيطرة (ثقافة بدون فيتو إيماغلوتينين). ويمكن تقييم رد فعل التحول اللمفاوي من الخلايا الليمفاوية عن طريق إدراج تسمية مشعة (ZN-thymdin) في الخلايا المستزرعة ، حيث يزيد توليف الحمض النووي عند تقسيم الخلايا. تحدث الاضطرابات في الاستجابة التكاثري في كل من أمراض المناعة الأولية والثانوية المرتبطة بالعدوى ، وأمراض الأورام ، والفشل الكلوي ، والتدخلات الجراحية.
  • تقييم هذه الدراسات، والتعبير عن علامات تنشيط (CD25، ترانسفيرين المستقبلة ل- CD71) جزيئات وMHC من الدرجة الثانية HLA-DR، والتي هي غائبة إلى حد كبير على يستريح الخلايا اللمفاوية التائية. T الليمفاوية حفز مع راصة دموية نباتية بعد حللت 3 أيام التعبير علامات التنشيط المناعي المباشر أو غير المباشر، التدفق الخلوي باستخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة تفرز مستقبلات.
  • قياس كمية وسطاء توليفها من قبل الخلايا الليمفاوية T تنشيط [انترلوكين (IL) 2، IL-4، IL-5، IL-6، جاما انترفيرون، إلخ]، بواسطة المقايسة المناعية أو ELISA. من المهم بشكل خاص تقييم تركيز y-interferon و IL-4 كعلامات لل TH و Th2 في طاف الثقافات النشطة وداخل الخلية. إذا كان ذلك ممكنا، فمن المفيد لتحديد التعبير عن الجينات لخلوى ذات الصلة من مستوى حمض النووي الريبي رسول في إنتاج الخلايا والتعبير مستقبلات شدة لالسيتوكينات منها وثريونين.
    
• رد فعل تثبيط هجرة الخلايا الليمفاوية. توعية الخلايا اللمفاوية التائية في التفاعل مع lymphokines إطلاق مستضد ، بما في ذلك العوامل. تثبيط هجرة الخلايا الليمفاوية. لوحظت ظاهرة تثبيط عندما يتم إدخال mitogens في ثقافة الخلايا. تقييم درجة التثبيط يجعل من الممكن الحكم على قدرة الخلايا الليمفاوية على إطلاق السيتوكينات. عادةً ، يكون معدل الترحيل ، استنادًا إلى معدل الإنجاز الفائق ، 20-80٪.
• تقييم السمية الخلوية لخلايا ناغورني كاراباخ. تحديد قدرة الخلايا القاتلة الطبيعية لقتل الخلايا المستهدفة من خط إريثروميلويد K-562. إذا تم تقييم السمية الخلوية التي تعتمد على الأجسام المضادة ، يتم استخدام الخلايا المستهدفة المغلفة بأجسام مضادة IgG. يتم تسمية الخلايا المستهدفة مع 3H-uridine وتحضن مع الخلايا المستجيب. يتم تقدير موت الخلايا المستهدفة من خلال إطلاق التسمية المشعة في المحلول. الحد من السمية الخلوية يحدث مع الأورام الخبيثة. في بعض الحالات ، عندما تكون هناك حاجة إلى تشخيص فعالية العلاج مع الإنترلوكينات ، يتم تقييم السمية الخلوية لخلايا NK عند احتضانها مع بعض السيتوكينات.

التحقيق في وظيفة البالعات

طرق الفحص

امتصاص البالعات كثافة دراسة الخلايا الميكروبية (البلعمة جزيئات المطاط، واختبار ثقافة العنقودية الذهبية، كولاي، أو الكائنات الدقيقة المعزولة من الصابرين). عن طريق الطرد المركزي للدم heparinized ، يتم عزل خلايا الكريات البيض المعلق ، يضاف مصل الدم لمجموعة IV للتوسع (opsonins هي بروتينات تعزز البلعمة). يتم تخفيف التعليق الميكروبي ، مختلطة مع الكريات البيض وحضنت لمدة 120 دقيقة ، وأخذ العينات للتحليل بعد الدقيقة 30.90.120 بعد بدء الحضانة. من المحدد تعليق leukocyte جعل مسحات. تحديد المؤشرات التالية للبلعمة:

• مؤشر phagocytic - النسبة المئوية للخلايا التي دخلت البلعمة في حضانة 30 دقيقة و 120 دقيقة ؛ القيمة المعيارية لمؤشر phagocytic (30) 94٪ من المؤشر phagocytic (120) - 92٪ ؛
• عدد بلعمية - متوسط عدد البكتيريا داخل الخلايا ؛ القيمة المعيارية لعدد phagocytic (30) 11٪ ، عدد بلعمية (120) - 9.8٪ ؛  
• معامل عدد phagocytic - نسبة عدد phagocytic (30) إلى عدد بلعمية (120)؛ طبيعي 1.16 ؛
• مؤشر الجراثيم للعدلات هو نسبة عدد الميكروبات التي تقتل داخل البالعات إلى العدد الكلي للميكروبات المأخوذة ؛ في معيار 66 ٪.

تحديد الطرق

• التحقيق في نشاط مبيد للجراثيم من البالعات في الاختبار مع netrosine tetrazolium (NST) هو اختبار NST. لالكريات البيض ، يضاف صبغة من النيتروز الصفراء. عندما يتم امتصاص الصبغة من قبل العدلات ، تحدث عملية الخفض تحت تأثير الجذور الحرة للأكسجين ، مما يؤدي إلى تلطيخ أزرق. يتم التفاعل في لوح مسطح ذو قاع 96 بئر. في الآبار الثلاثة الأولى بمزيج من HCT و leukocytes ، يضاف حل هانكس (HCT) تلقائياً في جسيمات اللاتكس الأخيرة. احتضان عند 37 درجة مئوية لمدة 25 دقيقة. يتم قراءة النتائج في 540 نانومتر على القارئ ويتم التعبير عنها في الوحدات التقليدية. احسب عامل التحفيز (K _st ) ، مساوٍ لنسبة الكثافة البصرية في الآبار المحفزة إلى متوسط الكثافة البصرية في الآبار بدون تحفيز. في الأشخاص الأصحاء ، _{HCT spont} = 90 ± 45 UE ، NST _Stim = 140 ± 60 UE. K _st = 1.78 ± 0.36.
• التحقيق في جزيئات الالتصاق. بمساعدة تدفق cytofluorimetry ، يتم تحديد التعبير عن المستضدات السطحية CD11a / CD18 ، CD11b / CD18 ، CD11c / CD18. يتجلى نقص المناعة مع انتهاك الالتصاق من العدوى الانتكاس ، وبطء التئام الجروح وغياب القيح في بؤرة العدوى.

التحقيق في نظام المكمل

طرق الفحص

تحديد النشاط الانحلالي للتكملة - دراسة المسار الكلاسيكي لتفعيل تكملة. تضاف التخفيفات المختلفة من مصل المريض والشخص السليم إلى كريات الدم الحمراء من الكبش المغطى بالأجسام المضادة. تؤخذ وحدة من النشاط الانحلالي كعكس لتخفيف المصل ، حيث يتم تدمير 50 ٪ من كريات الدم الحمراء. يتم تقييم درجة انحلال الدم عن طريق قياس الهيموجلوبين في المحلول. لوحظ انخفاض النشاط الانحلالي للتكملة في الذئبة الحمامية الجهازية مع تورط كلوي ، التهاب كبيبات الكلى الحاد. عوز المناعي مجتمعة ، الوهن العضلي الوبيل ، التهاب الكبد الفيروسي ، الأورام اللمفاوية ، زيادة - مع اليرقان الانسدادي ، التهاب الغدة الدرقية هاشيموتو. الروماتيزم والتهاب المفاصل الروماتويدي والتقرحي العقدي. التهاب الجلد والعضلات ، واحتشاء عضلة القلب ، والتهاب القولون التقرحي ، متلازمة رايتر ، والنقرس.

تحديد الطرق

• تحديد المكونات التكميلية. يتم التحديد الكمي من خلال طريقة مناعية نقص المناعة و nephelometry.
  الدراسة ليست مفيدة ، إلا إذا تغيرت خصائص المستضدات من المكونات التكميلية.
• تم العثور على أن مكون Clq من مكملة يعزز phagocytosis ويتوسط السمية الخلوية. انخفاضه يحدث في أمراض المجمعات المناعية ، الذئبة الحمامية الجهازية ، التهابات قيحية والأورام.
• يشارك مكون C3 في تنشيط المسار التكميلي الكلاسيكي والبديل. يرتبط الحد من تركيزه مع الالتهابات البكتيرية والفطرية المزمنة ، وجود مجمعات مناعية تعميم أو الأنسجة.
• يشارك مكون C4 في تنشيط المسار الكلاسيكي. يرتبط انخفاض تركيزه بتفعيل مكمل لفترات طويلة من قبل المجمعات المناعية وانخفاض في تركيز مثبط C1 ، الذي يتحكم في تنشيط مسار المكمل الكلاسيكي. يحدث نقص C4 مع الذئبة الحمامية الجهازية ، تحدث زيادة في C4 مع مرض الكلى ، ورفض الزرع ، والتهاب حاد ، وأمراض الجهاز الهضمي.
• C5a عبارة عن جزء صغير من جزيء C5 ، مقسومًا منه نتيجة لتنشيط النظام المكمل. زيادة تركيزه يحدث مع الالتهاب ، الإنتان ، الأمراض التأتية والحساسية.
• Cl-inhibitor هو عامل متعدد الوظائف. ويتحكم في تنشيط المكون C1 من المكمل ، ويثبط نشاط kallikrein ، plasmin والعامل المنشط Hageman ، proteases Cls و Or. نقص C1-inhibitor يؤدي إلى وذمة وعائية.
• دراسات تكميلية. إلى المصل القياسي الذي يفتقر إلى أي مكوِّن مكمل ، يضاف مصل الاختبار ويحدد النشاط الانحلالي للمكملة. إذا لم يتم استعادة النشاط الانحلالي إلى الطبيعي ، فمن المعتقد أن نشاط هذا المكون المتمم في مصل الاختبار ينخفض.

[1], [2], [3], [4], [5], [6]