اختبار NST التلقائي

اختبار NBT (نيتروبلو تترازوليوم) هو اختبار خلوي تقليدي لوظيفة العدلات: أثناء اندفاع الأكسجين النشط، يتحول NBT عديم اللون إلى فورمازان أزرق داخل الخلايا. يعكس عدد العدلات "الزرقاء" ودرجة تلونها بشكل غير مباشر قدرة الخلايا البلعمية على إنتاج الأكسجين الفائق (نشاط مركب أوكسيديز NADPH). يُعرّف اختبار NBT "التلقائي" بأنه اختبار يُجرى بدون محفز خارجي (على سبيل المثال، بدون إستر فوربول)، أي تقييم جاهزية العدلات الأساسية لاندفاع أكسدة. تاريخيًا، استُخدم الاختبار كاختبار فحص لمرض الحبيبات المزمن (CGD). medlineplus.gov

اليوم، استُبدل دور اختبار قياس التدفق الخلوي باستخدام ثنائي هيدرورودامين-123 (اختبار DHR) تقريبًا بدور اختبار NBT في تشخيص حالات نقص المناعة الأولية. يُسجل اختبار DHR أكسدة المسبار في كل خلية كميًا، ويُميز بشكل أفضل بين نقص المايلوبروكسيديز المرتبط بالكروموسوم X، ويسمح بتمييز نقص المايلوبروكسيديز الكامل عن نقص المايلوبروكسيديز الكامل بناءً على أنماط الفلورسنت. تُعتبر المراجعات المُحدثة ووصف الخدمات من المختبرات المرجعية الرئيسية اختبار DHR هو المعيار، بينما يُعد اختبار NBT قديمًا وغير موضوعي وأقل حساسية. testdirectory.questdiagnostics.com

مع ذلك، لا يزال اختبار NST (بما في ذلك المتغير "العفوي") يُستخدم في عدد من المراكز والمنشورات كاختبار وظيفي بسيط، خاصةً في الحالات محدودة الموارد أو لأغراض بحثية لتقييم "تحضير" العدلات أثناء الالتهاب. في مثل هذه الحالات، يُفسَّر بحذر ويُربط دائمًا بالبيانات السريرية والطرق البديلة. PMC

ماذا يقيس اختبار NST "العفوي" وكيف يختلف عن اختبار NST "المحفز"؟

معدل NBT "التلقائي" هو نسبة العدلات التي استعادت معدل NBT دون إضافة منشطات (مثل ببتيد فولميميت أو فوربول 12-ميريستات 13-أسيتات). تُفسر القيم "التلقائية" المرتفعة كعلامة على تنشيط/تحضير مسبق للخلايا البلعمية على خلفية الالتهاب الجهازي، أو تجرثم الدم، أو العدوى الفيروسية، أو تفاعلات المتمم، أو الإجهاد. أظهرت الملاحظات التجريبية والسريرية وجود صلة بين زيادة معدل NBT "التلقائي" وتنشيط مسار المتمم البديل والعدوى الجهازية؛ ومع ذلك، يختلف حجم التأثير اختلافًا كبيرًا ويعتمد على المنهجية المستخدمة. PubMed

يُجرى اختبار العدلات المحفز (NBT) بإضافة مُنشِّط انفجار تنفسي؛ وعادةً ما تزداد نسبة العدلات الموجبة لـ NBT بشكل حاد. في حالة نقص أكسيداز NADPH (CGD)، لا توجد استجابة حتى للمحفز: لا تُعيد الخلايا إنتاج NBT. كان هذا أساس التشخيص المبكر لـ CGD، ولكن اليوم استُبدل بتحليل DHR، الذي يُوفر صورةً كميّةً لكل خلية و"أنماطًا" نموذجيةً للمتغيرات الجينية المختلفة ونقص المايلوبروكسيداز. ncbi.nlm.nih.gov

هام: لا يُستخدم اختبار NST "التلقائي" لتشخيص خلل التنسج النقوي المزمن (CGD)، ولا يمكنه التمييز بشكل موثوق بين وجود خلل جزئي في CGD أو وجوده عن القيم الطبيعية. يشير ارتفاع اختبار NST "التلقائي" فقط إلى نشاط العدلات الحالي، وليس إلى السبب أو التشخيص. لذلك، في القرارات السريرية (وصف العلاج المضاد للبكتيريا، البحث عن مصدر العدوى، استبعاد نقص المناعة الأولي)، لا يُستخدم هذا المؤشر إلا كإشارة غير مباشرة تتطلب مزيدًا من التوضيح. PMC

متى كان التحليل ضروريًا وكيف تم استبداله (التوصيات الحديثة)

تاريخيًا، استُخدم اختبار NBT كعلامة سهلة المنال لعيوب انفجار الأكسجين في حالات CGD المشتبه بها لدى الأطفال المصابين بعدوى بكتيرية وفطرية متكررة شديدة. اعتُبر تلطيخ الخلايا المتعادلة باللون الأزرق شبه الكامل بعد التحفيز، بينما أشار غياب التلطيخ إلى CGD. إلا أن هذه الطريقة اعتمدت على فني المجهر، والتلوين، والعد، وعدم تحديد حاملي المرض بشكل صحيح، وأعطت نتائج خاطئة بسبب أخطاء ما قبل التحليل. PMC

لذلك، تحولت الممارسة الدولية إلى قياس التدفق الخلوي DHR كمعيار: تُميز هذه الطريقة بوضوح بين نقص أكسيداز NADPH الطبيعي والكامل والجزئي، وتساعد في تشخيص نقص البيروكسيديز الكامل (CGD) (الأشكال المرتبطة بالكروموسوم X مقابل الأشكال المتنحية الجسدية)، بل وتُميزه أيضًا عن نقص الميلوبيروكسيديز الكامل بناءً على نمط الفلورسنت. في المراجعات الحالية من عام 2022 إلى عام 2024، تم تحديد DHR كاختبار أولي رئيسي للاشتباه في الإصابة بنقص البيروكسيديز الكامل، والذي يتم تأكيده جزيئيًا. ncbi.nlm.nih.gov

ألغت مختبرات الأطفال المرجعية الكبيرة اختبار NBT تمامًا من استخدامها الروتيني: تشير كتالوجات الاختبارات إلى أن اختبار NBT لم يعد متاحًا، وأنه يُستخدم بدلاً منه اختبار "الانفجار التأكسدي للعدلات (DHR)". تؤكد الإرشادات التجارية والأكاديمية على أنه لضمان دقة التفسير، فإنها تأخذ في الاعتبار نسبة الخلايا الإيجابية لـ DHR بعد التحفيز، ومتوسط شدة الفلورسنت، ونمط الهيستوغرام نفسه. seattlechildrenslab.testcatalog.org

خلاصة القول: إذا كان الهدف هو استبعاد/تأكيد CGD (أو حالة حامل المرض)، فيُطلب إجراء اختبار DHR والاختبارات الجينية؛ أما إذا كان الهدف هو مراقبة "النشاط المناعي" أثناء العدوى، فإن اختبار NST "التلقائي" لن يُضيف معلومات سريرية موثوقة مقارنةً بالفحص السريري والاختبارات القياسية. PMC

كيف يتم ذلك، وما الذي يؤثر على النتائج ولماذا هناك الكثير من التفسيرات المثيرة للجدل

تقنية اختبار الخلايا المتعادلة (NST) بسيطة: يُحضَّن الدم الكامل مع كاشف (مع أو بدون مُحفِّز)، ثم تُحسب نسبة العدلات المُلوَّنة في اللطاخة. تتأثر النتيجة بعمر عينة الدم (فتقدم العمر يُقلِّل من تفاعلها)، ودرجة الحرارة، وتركيب الوسط، ووجود مضادات البكتيريا والجلوكوكورتيكويدات، بالإضافة إلى تقنية التلوين، وذاتية العد المجهري. تُفسِّر هذه العوامل جزئيًا التباين بين المختبرات وداخلها. testdirectory.questdiagnostics.com

يصاحب "التلقائي" NBT تباين بيولوجي: يتذبذب "تحضير" العدلات القاعدي مع الالتهاب الجهازي، وتنشيط المتمم، والالتهابات الفيروسية، وعوامل الضغط. وقد سُجِّلت قيم "تلقائية" أعلى في مجموعات معينة (مثل فيروس نقص المناعة البشرية من النوع 1 HTLV) وفي الالتهابات البكتيرية الحادة، ولكن دون التحديد المطلوب. لا يمكن استخدام "التلقائي العالي" المعزول كعلامة تشخيصية مستقلة. SciELO

هناك مصدر آخر للخطأ يتمثل في محاولة العلاج بناءً على اختبار عدم التطابق (NST). أظهرت الدراسات المبكرة أن المضادات الحيوية والستيرويدات يمكن أن تُعادل اختبار عدم التطابق بعد بدء العلاج؛ في المقابل، يُؤدي الإجهاد والتنشيط المسبق إلى قيم تلقائية "مرتفعة بشكل خاطئ". لذلك، ينبغي أن تستند القرارات السريرية إلى معايير موحدة (الفحص السريري، تعداد الدم الكامل، علامات الالتهاب، علم الأحياء الدقيقة، التصوير) والاختبارات الوظيفية/الجينية المُستهدفة حيثما تُعتبر معيارية. journals.co.za

إذا أجرى مختبر اختبار عدم تحمل الجلوكوز (NST) (كاختبار احتياطي أو بحثي مثلاً)، فيجب أن يكون لديه مراجع محددة، ومراقبة جودة، وأن ينص بوضوح على أن الاختبار لا يحل محل اختبار DHR في حال الاشتباه في وجود CGD. تنشر العديد من المختبرات هذا الإخلاء من المسؤولية مباشرةً على بطاقة الخدمة. seattlechildrenslab.testcatalog.org

كيفية تفسير النتائج (سيناريوهات عملية)

يُشتبه في الإصابة بمرض حبيبي مزمن. وقد دعمت الاستجابة المنخفضة/المنعدمة لاختبار NST المُحفَّز الإصابة بمرض حبيبي مزمن، ولكن المعيار الحالي هو DHR متبوعًا بالعوامل الوراثية (التشخيص، نوع العيب، حالة حامل المرض). اختبار NST غير موثوق به لفحص حاملي المرض والأشكال الجزئية، ويمكن الخلط أيضًا بينه وبين نقص المايلوبروكسيديز الكامل. ncbi.nlm.nih.gov

ارتفاع مستوى NBT "التلقائي" أثناء العدوى/الالتهاب. يعكس هذا النشاط المسبق للعدلات، ولكنه لا يشير إلى السبب: يمكن أن تُسفر العمليات الالتهابية البكتيرية والفيروسية والمناعية عن نتائج مماثلة. تستند قرارات العلاج إلى النتائج السريرية والميكروبيولوجية؛ ولا تُعدّ ديناميكيات NBT معيارًا معتمدًا لفعالية العلاج. diva-portal.org

اختبار NST طبيعي في ظل وجود سمات سريرية لنقص المناعة الشديد. لا يستبعد هذا العيوب التي لا يكتشفها اختبار NST، أو الحالات التي تكون فيها حساسية الطريقة غير كافية. يلزم إجراء تشخيص DHR والتشخيص الجزيئي لنقص المناعة الأولي .

قيود المختبر. في حال تأخر تسليم العينة، أو تخزينها بشكل غير صحيح، أو احتوائها على أدوية مصاحبة (مثل الستيرويدات)، فقد تكون نتيجة اختبار عدم تحمل الجلوكوز غير موثوقة. يُعدّ اختبار عدم تحمل الجلوكوز (DHR) حساسًا أيضًا للجوانب اللوجستية، ولكنه يوفر تحققًا كميًا وأنماطًا نموذجية. testdirectory.questdiagnostics.com

بماذا يمكنني استبدال NST وماذا يجب أن أكتب في الإحالة؟

الخط الأول لتقييم انفجار أكسدة العدلات هو قياس التدفق الخلوي DHR، مع تحديد المُحفِّز وتحليل كلٍّ من نسبة الخلايا الإيجابية لـ DHR، ومتوسط شدة الفلورسنت، وشكل الهيستوغرام. في حال الاشتباه في وجود CGD، يجب أن تتضمن الإحالة السؤال السريري صراحةً ("استبعاد حالة CGD/حالة حامل CGD")، متبوعًا باختبارات وظيفية وتأكيد وراثي. mayocliniclabs.com

إذا كان الهدف هو التشخيص العام للعدوى، فلا حاجة لاختبار وظائف العدلات المناعية (NST): يعتمد العلاج على النتائج السريرية، وتعداد الدم الكامل، وبروتين سي التفاعلي/بروكالسيتونين، وعلم الأحياء الدقيقة، والتصوير. لا تُدرج اختبارات وظائف العدلات المناعية ضمن معايير PMC، إلا في حالة الاشتباه في وجود خلل أولي.

إذا كان المختبر لا يزال يقدم اختبار NST، فمن المستحسن تفضيل اختبار DHR. أوقفت العديد من المؤسسات رسميًا اختبار NST، واستبدلته باختبار انفجار تأكسد العدلات (DHR). بالنسبة للمرضى، هذا يعني تشخيصًا أكثر دقة واحتمالًا أقل للنتائج الإيجابية الخاطئة. seattlechildrenslab.testcatalog.org

الأسئلة الشائعة

• هل هناك حاجة إلى اختبار NST "العفوي" لفهم "مدى قوة المناعة"؟

لا. يشير ارتفاع مستوى اختبار NST "التلقائي" فقط إلى أن العدلات نشطة حاليًا، وليس إلى قوة الجهاز المناعي. لا يُستخدم هذا الاختبار لتقييم مقاومة الجسم، ولا يؤثر على قرارات علاج العدوى الشائعة. diva-portal.org

• إذا كانت نتيجة اختبار NST طبيعية، هل يمكن استبعاد CGD؟

لا. لاستبعاد خلل التنسج النقوي المزمن (CGD) لدى الأطفال أو البالغين، يُستخدم اختبار قياس التدفق الخلوي (DHR) والتشخيصات الجزيئية. قد يكون اختبار قياس التدفق الخلوي طبيعيًا بشكل زائف في حالات العيوب الجزئية، ولا يكشف بشكل موثوق عن حالة حامل الجين. ncbi.nlm.nih.gov

• لماذا وصف لي طبيبي DHR وليس NST؟

لأن DHR معيار حديث: فهو أكثر دقةً وكميةً وغنيًا بالمعلومات، مما يساعد على التمييز بين متغيرات الخلل ونقص المايلوبروكسيديز. لم تعد العديد من المختبرات تُجري اختبار NST. mayocliniclabs.com

• هل من الممكن مراقبة ديناميكية العلاج باستخدام NST؟

بشكل روتيني - لا. تُستخدم الديناميكيات السريرية والعلامات المُعتمدة لمراقبة فعالية علاج العدوى؛ ولا يُعدّ اختبار عدم التطابق (NST) لهذا الغرض معياريًا، وهو متغير بدرجة كبيرة. journals.co.za

اختبار مُفعّل باستخدام NST

في العادة، في البالغين، يكون عدد الخلايا المتعادلة الإيجابية لـ HCT 40-80%.

يُقيّم اختبار NBT المُنشَّط الاحتياطي الوظيفي لآلية البلعمة المُبيدة للبكتيريا المعتمدة على الأكسجين. ويُستخدم هذا الاختبار لتحديد سعة الاحتياطي للأنظمة داخل الخلايا البلعمية. مع بقاء النشاط المضاد للبكتيريا داخل الخلايا البلعمية مُحافظًا، تحدث زيادة حادة في عدد العدلات المُوجبة للفورمازان بعد التحفيز باللاتكس. يشير انخفاض نسبة العدلات في اختبار NBT المُنشَّط إلى أقل من 40% وللوحيدات إلى أقل من 87% إلى ضعف البلعمة.

[ 1 ]