الخلايا الجذعية الوسيطة

من بين الخلايا الجذعية الإقليمية ، تحتل الخلايا الجذعية الوسيطة (MSCs) مكانًا خاصًا ، وتشكل مشتقاتها المصفوفة السداسية لجميع أعضاء وأنسجة الجسم البشري. تنتمي أولوية البحث في MSC لممثلي العلوم البيولوجية الروسية.

في منتصف القرن الماضي ، تم عزل ثقافة متجانسة من الخلايا الجذعية لنخاع العظم المتعدد الخلايا في مختبر A. Friedenshtein. الخلايا الجذعية الوسيطة تعلق على الركيزة لفترة طويلة الإبقاء على معدل انتشار عالية، والثقافات في مناطق ذات كثافة البذر منخفضة بعد تثبيت على ركيزة شكلت من الحيوانات المستنسخة خلية الليفية وجود أي نشاط البلعمة. تم إيقاف توقف انتشار MSC عن طريق التفريق العفوي في المختبر في العظام ، والدهون ، والغضاريف ، والعضلات أو الخلايا النسيج الضام. جعلت دراسات أخرى من الممكن إنشاء القدرة العظمية المحتملة للخلايا الشبيهة بالخلايا الليفية من سدى نخاع العظام من مختلف أنواع الثدييات ، فضلا عن نشاط تكوين مستعمراتها. في التجارب المجراة تبين أن كل من زرع التجانس ومثلي من مستعمرة الخلايا الليفية خلية تشكيل اكتمال تشكيل العظام والغضاريف، والأنسجة الدهنية ليفية. بما أن الخلايا الجذعية للنخاع العظمي لديها قدرة عالية على التجديد الذاتي ومجموعة متنوعة من التمايز ضمن خط خلية واحدة ، فقد تم وصفها بأنها خلايا متعددة الوسيطة متوسطة السمية.

وتجدر الإشارة إلى أنه لمدة 45 عاما من البحوث الأساسية للخلايا الجذعية الوسيطة ، تم إنشاء ظروف حقيقية لاستخدام مشتقاتها في الممارسة السريرية.

اليوم ، ليس هناك شك في أن جميع أنسجة الجسم البشري تتشكل من الخلايا الجذعية لخطوط الخلايا المختلفة نتيجة لعمليات الانتشار ، والهجرة ، والتمايز والنضج. ومع ذلك ، في الآونة الأخيرة ، كان يعتقد أن الخلايا الجذعية في جسم الكبار هي خاصة بالنسيج ، أي أنها قادرة على إنتاج خطوط الخلايا المتخصصة فقط من الأنسجة التي توجد فيها. وقد دحض هذا الوضع المفاهيمي حقائق تحول الخلايا الجذعية المكونة للدم ليس فقط في العناصر الخلوية من الدم المحيطي ، ولكن أيضًا في خلايا الكبد البيضوية. بالإضافة إلى ذلك ، كانت الخلايا الجذعية العصبية قادرة على توليد كل من الخلايا العصبية والعناصر الدبقية ، وكذلك الخلايا الملتزمة في وقت مبكر من الخلايا السلي المكونة للدم. وفي المقابل ، فإن الخلايا الجذعية الوسيطة ، التي تنتج عادة عناصر خلوية من العظام والغضاريف والأنسجة الدهنية ، قادرة على التحول إلى خلايا جذعية عصبية. ومن المفترض أنه في عملية النمو ، وتجديد الأنسجة الفسيولوجية والتعويضية ، يتم إنشاء الخلايا السلفية غير الملتزم بها من احتياطيات الجذع محددة الأنسجة. على سبيل المثال ، يمكن أن يتحقق إصلاح النسيج العضلي عن طريق الخلايا الجذعية الوسيطة التي تهاجر من نخاع العظام إلى العضلات الهيكلية.

على الرغم من أن مثل هذه الخلايا الجذعية عبر التبادلية تعترف ليس كل الباحثين إمكانية استخدام السريري من الخلايا الجذعية الوسيطة كمصدر لزرع الخلايا وناقلات خلية من المعلومات الوراثية لم المتنازع عليها الخلايا الجذعية اللحمية متعددة القدرات نخاع العظام، والتي يمكن أن يكون من السهل نسبيا لعزل ونشر في الثقافة في المختبر. في نفس الوقت في الكتابات العلمية لا تزال تظهر تقارير حول إمكانية الخلايا الجذعية المحفزة للسدى نخاع العظام. كما الأدلة المقدمة بروتوكولات الأبحاث، والتي يتم تحويلها تحت تأثير محرضات محددة من transdifferentiation من اللجان الدائمة في الخلايا العصبية، والعضلية وخلايا الكبد. ومع ذلك، فإن بعض العلماء فرصة لإعادة تنشيط والتعبير الجيني خلال مرحلة التطور الجنيني المبكر في الشك. في نفس الوقت، والجميع يفهم أنه إذا وجدت الظروف لتوسيع الخلايا الجذعية الوسيطة متعددة القدرات لتعدد القدرات من المجالس الاقتصادية والاجتماعية في مجال الطب التجديدي والبلاستيك حل العديد من المشاكل ذات الطبيعة الأخلاقية والأدبية والدينية والقانونية تلقائيا. وعلاوة على ذلك، لأنه في هذه الحالة مصدر الجذعية القدرة على التجدد للمريض خلايا اللحمية ذاتي يتم حلها ومشكلة الرفض المناعي للزرع الخلايا. ما مدى واقعية هذه الاحتمالات ، سوف تظهر في المستقبل القريب.

[1], [2], [3], [4]

مؤشرات لهذا الإجراء

استخدام الخلايا الجذعية الوسيطة في الطب

ويرتبط استخدام عيادة للمشتقات الخلايا الجذعية الوسيطة في المقام الأول مع الحد من العيوب الأنسجة التي تسببها الآفات الحرارية واسعة وعميقة من الجلد. وأجري تقييم تجريبي قبل السريرية لمدى ملاءمة الخلايا الجذعية الوسيطة مثل الخلايا الليفية الصنعية لعلاج الحروق العميقة. وتبين أن خلايا نخاع العظام الجذعية الوسيطة مثل الخلايا الليفية شكل أحادي الطبقة في الثقافة، مما يجعل من الممكن لزرع لهم لتحسين تجديد حروق عميقة. يلاحظ المؤلف أن خصائص مماثلة لها الليفية الجنينية، ولكن التطبيق السريري لهذا الأخير يقتصر على المشاكل الأخلاقية والقانونية القائمة. تم تشكيل حروق حرارية عميقة مع تلف في جميع طبقات الجلد على فئران ويستار. كانت مساحة الحرق 18-20 ٪ من إجمالي سطح الجلد. في المجموعة التجريبية الأولى تتألف من الفئران مع الإصابة الحرارية عميقة وزرع الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من الخلايا الليفية خيفي. تألفت المجموعة الثانية من الحيوانات ذات الحروق الحرارية العميقة والزراعات العابرة للخلايا الليفية الجنينية المتخلفة. وكانت المجموعة الثالثة ممثلة بفئران السيطرة بحرق حراري عميق ، لم ينفذ العلاج الخلوي. تم تطبيق تعليق الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من الخلايا الليفية والخلايا الليفية الجنينية على سطح حرق الجرح pipetted بمبلغ 2 × 10 ⁴ الخلايا على 2nd اليوم بعد استئصال النمذجة حرق وندبة نخرية تشكيلها. بعد زرع الخلايا حرق سطح مغطى بشاش غارقة في محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر مع الجنتاميسين. سياج خلايا نخاع العظام للحصول على اللجان الدائمة مع تحريض لاحق من خط الخلايا الليفية في الخلايا الجذعية الوسيطة المنتجة في فئران ويستار البالغة من عظام الفخذ. تم الحصول على الخلايا الليفية الجنينية من رئتي الأجنة البالغة من العمر 14-17 يومًا. الليفية الجنينية وخلايا نخاع العظام للحصول كانت ما قبل اللجان الدائمة مثقف في أطباق بتري عند 37 درجة مئوية في iikubatore C02، في جو مع 5٪ CO2 بنسبة 95٪ الرطوبة. الليفية الجنينية يتم تربيتها لمدة 4-6 أيام، في حين لتشكيل أحادي الطبقة MSC المطلوبة من 14 إلى 17 يوما. اللجان الدائمة في وقت لاحق من قبل الحفظ بالتبريد حافظت كمادة أولية للخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من الخلايا الليفية التي كتبها الذوبان واللجان الدائمة زراعة أعدت لمدة 4 أيام. عدد الخلايا الجذعية الوسيطة ولدت الليفية أكثر من 3 أضعاف عدد الخلايا الليفية الجنينية الناشئة خلال الفترة الثقافة نفسها. لتحديد الخلايا في transtslantirovannyh حرق الجروح في الخطوة زراعة الجينوم المسمى باستخدام ناقلات المكوك الفيروسي على أساس المؤتلف اتش V نوع الناقل 1as-2 ترميز الجين ß غالاكتوزيداز E. القولونية. الخلايا الحية في أوقات مختلفة بعد زرع الكشف عن immunohistochemically في cryosections مع الركيزة أضاف X-غال، وإعطاء مميزة الأخضر والأزرق اللون. ونتيجة لديناميكية البصرية، بلانيمتري وحالة تقييم النسيجية من حروق، تبين أنه حتى في 3rd يوم بعد زرع الخلايا في مجموعات منعزلة تظهر اختلافات كبيرة خلال الجرح عملية الشفاء. أصبح هذا الاختلاف متميزًا بشكل خاص في اليوم السابع بعد زراعة الخلايا. حيوانات المجموعة الأولى، التي تم زرع الخلايا الجذعية الوسيطة مثل الخلايا الليفية، الجرح اكتسبت لون مكثفة وردية بشكل موحد، نمت النسيج الحبيبي على المنطقة برمتها إلى مستوى البشرة، وحرق السطح هو انخفاض كبير في حجم. كان فيلم الكولاجين الذي تم تكوينه على سطح الجرح رقيقًا إلى حدٍ ما ، لكنه استمر في تغطية منطقة الحرق بالكامل. حيوانات المجموعة الثانية، التي تم زرع الخلايا الليفية الجنينية، ورفع النسيج الحبيبي إلى مستوى البشرة من حواف الجرح، ولكن فقط في بعض الأماكن، في الوقت نفسه plazmoreya الوقت من الجرح كان أكثر كثافة مما كان عليه في مجموعة 1، واختفى في البداية شكلت فيلم الكولاجين تقريبا. في الحيوانات التي لم تتلق العلاج بالخلايا الجذعية، على 7TH الجرح حرق يوم كان شاحب، وحرض، والأنسجة الميتة، المغلفة مع الفيبرين. لوحظ وجود البلازما في جميع أنحاء سطح الحرق. تشريحيا، أظهرت الحيوانات من 1 و2ND المجموعات انخفاضا من تسلل الخلوية وتطوير الأوعية الدموية، وكانت هذه العلامات من عملية إعادة توليد بدايته أكثر شدة في الفئران في المجموعة 1. في السيطرة على المجموعة أظهر دلائل على خلية الجرح تسلل، ونمط نسيجية من الأوعية الدموية التي شكلت حديثا غائبة. وكانت 15-30 يوم التاسع من مراقبة الحيوانات من مساحة السطح مجموعة حرق 1ST أصغر بكثير مما كانت عليه في الفئران من مجموعات أخرى، وكان سطح التحبيب أكثر تطورا. في الحيوانات من المساحة حرق مجموعة 2ND كما انخفضت مقارنة مع حجم حروق في المجموعة الضابطة من الفئران التي كان من المقرر أن الاندمال بتشكل النسيج الظهاري هامشية. في السيطرة ظلت مواقع سطح حرق مجموعة التحبيب شاحب مع نادر، والتي تظهر في هذا الشأن عروق العنكبوت، وكانت الجزر استمرت وحة الفبريني plazmoreya معتدلة عبر سطح الحرق، وهو أمر جرب انفصال الصعب بقي. بشكل عام ، قللت حيوانات المجموعة الثالثة أيضًا حجم الجرح ، لكن حواف الجرح ظلت منخفضة.

وهكذا، خلال دراسة مقارنة لمعدلات شفاء الجروح باستخدام الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من الخلايا الليفية والخلايا الليفية الجنين، ودون استخدام العلاج بالخلايا ملحوظ تسريع الشفاء من سطح حرق نتيجة لزرع الخلايا الجذعية الوسيطة المشتقة من الخلايا الليفية والخلايا الليفية الجنينية. ومع ذلك، في حالة استخدام الخلايا الجذعية الوسيطة خيفي الجرح الليفية معدل الشفاء كان أعلى مما كانت عليه في زرع الخلايا الليفية الجنينية. وقد تجلى هذا في تسريع التغيير من مراحل تجديد عملية - للحد من فترات تسلل الخلوية، ويزيد من معدل انتشار شبكات الأوعية الدموية، فضلا عن تشكيل النسيج الحبيبي.

تشير نتائج قياس المسافة الديناميكية إلى أن معدل الشفاء العفوي لجرح الحروق (بدون استخدام العلاج بالخلايا) كان أقل معدل. على 15 ويوم ال30 بعد زرع الخلايا الجذعية الوسيطة خيفي الجرح الليفية معدل الشفاء كان أعلى مما كانت عليه في زرع الخلايا الليفية الجنينية. أظهر طريقة النسيجية للكشف عن بيتا غالاكتوزيداز أنه بعد زرع الخلايا الجذعية الوسيطة مثل الخلايا الليفية والخلايا الليفية الجنينية طيلة فترة المراقبة على سطح وعمق الجروح تجديد الخلايا المزروعة تبقى قابلة للحياة. ويقترح المؤلفان أن ارتفاع معدل حرق الجروح تجديد باستخدام الخلايا الجذعية الوسيطة من الخلايا الليفية الإفراج المشروط هذه الخلايا أثناء نضوج rostostimuliruyushih العوامل النشطة بيولوجيا.

كما تم استخدام زرع الخلايا الكيراتينية الذاتية أو المتجانسة والخلايا الليفية المتجانسة لعلاج جروح الحروق في العيادة. وتجدر الإشارة إلى أن العلاج الجراحي للأطفال المصابين بحروق عميقة واسعة هي مهمة معقدة نظرا لتعدد كبير من التدخلات الجراحية والصدمة، وفقدان الدم كبيرة، على ردود الفعل المختلفة المستخدمة وسائل الاعلام الحقن في الوريد. الصعوبات الرئيسية في تنفيذ الجلد والجراحة التجميلية مع حروق عميقة واسعة، ومنطقة تتجاوز 40٪ من سطح الجسم، ونظرا لخطورة حالتها وعدم وجود موارد الجلد المانحة. استخدام الطعوم يتناغم مع نسبة انثقاب كبيرة لا يحل المشكلة، لأن الصورة بعد انثقاب خلية epiteliziruyutsya بطيئة جدا، وكثيرا ما تفعل وهي lysed ترقيع الجلد أو جافة. هذه الطلاءات حرق الجروح كما ksenokozha، ال allografts جثي، والطلاء فيلم الاصطناعية ليست دائما فعالة بما فيه الكفاية، لذلك تطوير أساليب جديدة لإغلاق الطبقات السطحية حرق الخلايا الكيراتينية مثقف والخلايا الليفية. على وجه الخصوص، وسيلة لإغلاق الأسطح حرق باستخدام allofibroblastov مثقف توفير خلال زرع ضوحا تأثير تنشيطية على epidermotsitov انتشار في الحفاظ على الحدود الجرح في الحروق، وفي القرنية ترقيع شبكة الشبكات. في أعمال L. Budkevich والمؤلفين المشاركين (2000) يتم تقديم نتائج تطبيق هذه الطريقة لعلاج الحروق عند الأطفال. كان 31 طفلًا يعانون من صدمة حرارية تتراوح أعمارهم بين سنة واحدة و 14 عامًا تحت الملاحظة. في ثلاثة أطفال ، كانت المساحة الإجمالية للجروح الحارقة IIIA-B - IV درجة 40 ٪ ، 25 - 50-70 ٪ ، وفي ثلاثة - 71-85 ٪ من سطح الجسم. تم الجمع بين استئصال نخر جراحي في وقت مبكر مع زرع الأرومة الليفية مثقف واجتماع ذاتي. في علاج المرحلة الأولى تم إجراء الختان النسيج الميت، والثاني - على زرع مثقف فيلم allofibroblastov الناقل، والثالثة (48 ساعة بعد زرع allofibroblastov مثقف) - إزالة المصفوفة والجلد اللوحات مع نسبة انثقاب autodermoplasty من 1: 4. ثلاثة من المرضى الذين تم إدخالهم إلى العيادة يعانون من مرض حروق شديد ، تم زرعها في الأرانب الليفية المزروعة في الجروح التحبيب. أجريت زراعة الأرومة الليفية مثقف مرة واحدة في 18 طفلا ، مرتين في 11 ، وثلاث مرات في اثنين من المرضى. كانت مساحة سطح الجرح المغطى بثقافة الخلية تتراوح من 30 إلى 3500 سم 2. فعالية allofibroblastov مثقف تقييمها من قبل نسبة إجمالية قدرها engraftment من اللوحات الجلد، ووقت الشفاء من الحروق وعدد الوفيات الناجمة عن الإصابات الحرارية الشديدة. تم إكمال عملية زرع الخلايا في 86٪ من المرضى. لوحظ عدم ظهور جزئي للجلد في 14٪ من الحالات. على الرغم من العلاج المستمر ، مات ستة (19.3 ٪) من الأطفال. كانت منطقة الآفة الجلدية الكلية فيها من 40 إلى 70٪ من سطح الجسم. لم يكن زرع الأوروم الليفية المزروعة مرتبطًا بالنتيجة المميتة لإصابة الحروق في أي مريض.

تحليل نتائج العلاج، لاحظ الباحثون أن الحروق السابقة تتعارض مع الحياة، لعلاج الضرر الحراري العميق للمنطقة الجلد من 35-40٪ من سطح الجسم (للأطفال الصغار - ما يصل إلى 3 سنوات - هي حروق عميقة الحرجة وتبلغ مساحتها 30٪، وبالنسبة للأطفال الأكبر سنا العمر - أكثر من 40 ٪ من سطح الجسم). عندما زرع الجراحي للمثقف autodermaplasty necrectomy allofibroblastov ولاحق الجلد الطعوم بحروق كبيرة، انثقاب عامل IIIB - درجة IV تظل حرجة، ولكن في الوقت الحالي هناك احتمالات في كثير من الحالات لإنقاذ حياة حتى هؤلاء الضحايا. أثبتت necrectomy الجراحية بالتزامن مع زرع allofibroblastov مثقف وautodermaplasty في الأطفال الذين يعانون من حروق عميقة أن تكون فعالة بشكل خاص في المرضى الذين يعانون من آفات متقدمة من الجلد مع وجود عجز المواقع المانحة. تكتيك العمليات الجراحية نشط وزرع allofibroblastov مثقف تعزيز الاستقرار السريع للحالة العامة مثل هؤلاء المرضى، والحد من عدد من المضاعفات المعدية من أمراض الحروق، وخلق الظروف المواتية لengraftment، والحد من الوقت لاستعادة الجلد فقدت ومدة العلاج في المستشفى، والحد من حدوث الوفيات في المرضى الذين يعانون من حروق شديدة. وهكذا، زرع allofibroblastov مثقف يتبع اللوحات الجلد autodermaplasty تحقق الانتعاش في الأطفال الذين يعانون من حروق شديدة، والتي كانت تعتبر في السابق مصيرها.

من المعترف به على نطاق واسع أن الهدف الأساسي من علاج مرض الحروق هو تعظيم الانتعاش الكامل والسريع للبشرة المتضررة لمنع التأثيرات السامة الناتجة والمضاعفات المعدية والجفاف في الجسم. نتائج تطبيق الخلايا المستزرعة تعتمد إلى حد كبير على الاستعداد لزرع الجروح نفسها. في حالات زرع القرنية المزروعة على سطح الجرح بعد necrectomy الجراحية prizhivlyaetsya ما معدله 55٪ (حسب المنطقة) من الخلايا المزروعة، بينما في الجروح تحبيب يتم تخفيض معدل engraftment إلى 15٪. لذلك ، يتطلب العلاج الناجح لحروق الجلد العميقة الواسعة ، في المقام الأول ، تكتيكات جراحية نشطة. في وجود جروح الحروق IIIB-IV ، يتم إطلاق سطح الحرق فوراً من الأنسجة الميتة من أجل الحد من آثار التسمم وتقليل عدد مضاعفات مرض الحروق. استخدام مثل هذه الأساليب هو المفتاح لتقليل الوقت من لحظة الحصول على حرق لإغلاق الجروح وطول فترة بقاء المرضى الذين يعانون من حروق واسعة في المستشفى ، وكذلك الحد بشكل كبير من عدد الوفيات.

ظهرت التقارير الأولى عن الاستخدام الناجح للخلايا الكيراتينية المستزرعة لتغطية سطح الحرق في أوائل الثمانينيات من القرن الماضي. في وقت لاحق ، تم تنفيذ هذا التلاعب بها بمساعدة طبقات من الخلايا الكيراتينية المستزرعة ، التي تم الحصول عليها في معظم الأحيان من autocells ، أقل بكثير من allokeratinocytes. ومع ذلك ، فإن تقنية autokeratinocytoplasty لا تسمح بإنشاء بنك الخلايا ، في حين أن الوقت اللازم لإنتاج طعم كاف من الخلايا الكيراتينية هو كبير ويبلغ 3-4 أسابيع. خلال هذه الفترة ، يزداد خطر الإصابة بمضاعفات الأمراض الحادة والمضاعفات الأخرى بشكل حاد ، مما يطيل بشكل كبير طول فترة بقاء المرضى في المستشفى. بالإضافة إلى ذلك ، لا تنجح الكائنات الكهربية الذاتية أثناء الزرع في جروح الحروق ، كما أن التكلفة العالية للوسائط الخاصة للنمو ومحفزات نمو الخلايا الكيراتينية النشطة بيولوجيا تحد بشكل كبير من تطبيقها السريري. الأساليب التكنولوجية الحيوية الأخرى ، مثل جراحة الكولاجين ، وزرع xinoids المحفوظة بالبرودة ، واستخدام العديد من طلاءات البوليمر الحيوي ، تزيد من فعالية معالجة الحروق السطحية الواسعة ولكن ليس الحروق العميقة. تختلف طريقة طلاء سطح الجرح مع الخلايا الليفية المستزرعة اختلافاً جوهرياً في أن المكون الرئيسي لمجموع الخلايا المستزرعة ليس الخلايا الكيراتينية ولكن الخلايا الليفية.

ومن الشروط الأساسية لتطوير طريقة بمثابة دليل على أن pericytes التي تحيط الأوعية الصغيرة الموالية خلايا genitornymi الوسيطة قادرة على التحول إلى الخلايا الليفية، والتي تنتج العديد من عوامل النمو وتوفير التئام الجروح بسبب تأثير تحفيز قوي على انتشار والتصاق الخلايا الكيراتينية. استخدام الخلايا الليفية مثقف لإغلاق الجرح الأسطح تعرف هويته على الفور عدد من المزايا الهامة لهذه الطريقة على استخدام الخلايا الكيراتينية مثقف. على وجه الخصوص، وإعداد الخلايا الليفية في ثقافة لا تتطلب استخدام المروجين سائل الإعلام والثقافة والنمو خاص، مما يقلل من تكلفة زرع أكثر من 10 أضعاف تكلفة الحصول على الخلايا الكيراتينية. تتعرض الخلايا الليفية بسهولة إلى الركض، حيث أنها تفقد جزئيا مستضدات التوافق النسيجي سطحها، وهذا بدوره يجعل من الممكن استخدام لتصنيع زرع خيفي الخلايا وإنشاء بنوكها. يقصر تلقي زرع، وعلى استعداد لاستخدامها في العيادة، من 3 أسابيع (القرنية) 1-2 أيام (لالليفية). ويمكن الحصول على الثقافات الأولية من الخلايا الليفية عن طريق زراعة خلايا من الجلد شظايا التي اتخذت في autodermoplasty وبذر خلية كثافة على ثقافات فرعية استلام الخلايا الليفية الإنسان ليست سوى 20 × 10 ³ في 1 سم ².

لدراسة تأثير الخلايا الليفية والبروتينات التنظيمية في انتشار والتفريق بين الخلايا الكيراتينية، تحليلا مقارنا لخصائص والتشكل من انتشار الخلايا الكيراتينية على ركائز من أنواع الكولاجين الأول والثالث وفبرونيكتين بالتعاون مع ثقافة الخلايا الليفية الإنسان. تم عزل الخلايا الكيراتينية البشرية من شظايا جلد المرضى الذين يعانون من حروق تم أخذها خلال عملية تجميل الجلد. كانت كثافة الخلايا الكيراتينية 50 x 103 خلية لكل سنتيمتر مربع 2. تم تقييم فعالية السريرية لزرع الخلايا الليفية مثقف في 517 مريضا. تم تقسيم جميع المرضى إلى مجموعتين: الأول - البالغين المتضررين من الحروق IIA، B - IV درجة؛ 2 - الأطفال الذين يعانون من حروق عميقة من IIIB - IV درجة. تقييم ديناميات التنظيم الهيكلي والوظيفي للثقافة أحادي الطبقة من الخلايا الليفية فيما يتعلق دورا في عملية تجديد الجليكوسامينوجليكان، فبرونيكتين، والكولاجين، والسماح للمؤلفين لتحديد اليوم الثالث كما بأفضل الشروط من استخدام الثقافات الليفية لإنتاج زراعة. وأظهر التحقيق من تأثير على انتشار الخلايا الليفية وتمايز الخلايا الكيراتينية التي تحت في المختبر الليفية يكون لها تأثير تحفيز وضوحا، في المقام الأول على عمليات التصاق الخلايا الكيراتينية، وزيادة عدد الخلايا الملتصقة ومعدل تحديد أكثر من 2 مرات. ويرافق تحفيز عمليات الالتصاق زيادة في كثافة تخليق الحمض النووي ومستوى انتشار الخلايا الكيراتينية. وعلاوة على ذلك، فقد وجد أن وجود الخلايا الليفية والمصفوفة خارج الخلية التي شكلتها لهم هو شرط أساسي لتشكيل tonofibrillyarnogo جهاز القرنية الاتصالات بين الخلايا، وفي نهاية المطاف، للتمايز الخلايا الكيراتينية وتشكيل الغشاء القاعدي. في علاج الأطفال الذين يعانون من حروق عميقة أنشئت الفعالية السريرية للثقافة زرع allofibroblastov، وخاصة في المرضى المصابين بآفات واسعة من المواقع المانحة الجلد في العجز. أظهرت دراسة morfofunktcionalnoe المعقدة التي الكسب غير المشروع تتميز الخلايا الليفية تخليق DNA النشط، وكذلك الكولاجين، فبرونيكتين والجليكوسامينوجليكان، التي يتم إنشاؤها في خلايا المصفوفة خارج الخلية. ويقترح المؤلفان على نسبة عالية من engraftment من الخلايا الليفية المزروعة (96٪)، وانخفاض حاد من حيث إعدادها (خلال 2-3 ساعات بدلا من 24-48 أسبوعا في حالة من الخلايا الكيراتينية)، تسارع كبير من الاندمال بتشكل النسيج الظهاري من سطح حرق، وانخفاض كبير في الأسعار (في 10 مرات) من تكنولوجيا زراعة الكسب غير المشروع من الخلايا الليفية مقارنة مع زرع الخلايا الكيراتينية. استخدام زرع allofibroblastov مثقف يجعل من الممكن لإنقاذ حياة الأطفال الذين يعانون من حروق خطيرة - إصابة الحرارية أكثر من 50٪ من سطح الجسم، والتي كان يعتقد في السابق غير متوافقة مع الحياة. ومن الجدير بالذكر أن زرع خيفي الخلايا الليفية الجنينية كما أثبتت بشكل مقنع ليس فقط تجديد أكثر السريع من الجروح ومرضى النقاهة مع مختلف حرق من الدرجة والمنطقة، ولكن أيضا انخفاض كبير في وفيات.

تستخدم أيضا الخلايا الليفية الذاتية في منطقة معقدة من الجراحة التجميلية مثل التصحيح التصالحي لإصابات الحبل الصوتي. عادة ، لهذا الغرض ، يتم استخدام الكولاجين البقري ، ومدة محدودة بسبب الاستمناع. كونه بروتين الأجانب، والكولاجين البقري، كولاجيناز حساسة إلى المتلقي، ويمكن أن تسبب ردود فعل مناعية، للحد من المخاطر التي وضعت التكنولوجيا الاستعدادات الكولاجين، عبر ربط مع غلوتارالدهيد. صالحها هي قدر أكبر من الاستقرار وانخفاض المناعية، التي وجدت التطبيق العملي في إزالة العيوب وضمور الحبال الصوتية. تم استخدام حقن الكولاجين الذاتي لأول مرة في عام 1995. قدمت وسائل الحفاظ على الهيكل الأساسي للألياف الكولاجين ذاتي، بما في ذلك crosslinks ضمجزيئي عامل ضمن الجزيئ تحفيز إنزيمي. حقيقة أن ألياف الكولاجين الطبيعية هي أكثر مقاومة للتحلل من البروتياز من telopeptides الكولاجين تشكيلها حيث قطع. سلامة telopeptides مهمة على هيكل رباعي من ألياف الكولاجين ويشابك بين جزيئات الكولاجين المجاورة. على عكس الاستعدادات من الكولاجين البقري، والكولاجين الذاتي لا يسبب الاستجابات المناعية في المتلقي، لكنها ليست فعالة بما فيه الكفاية يملأ الوكيل. التصحيح المستمر يمكن أن يتحقق بسبب الإنتاج المحلي من الزرع الذاتي من مادة الكولاجين الليفية. ومع ذلك ، كشفت الدراسات على فعالية زرع الخلايا الليفية الذاتية في العيادة بعض الصعوبات. في الفترة الأولى بعد زرع الخلايا الليفية الاثر السريري كان أضعف بالمقارنة مع أنه بعد إدارة الكولاجين البقري. عندما الخلايا الليفية ذاتي مثقف لا يمكن استبعاد إمكانية تحويل الخلايا الليفية الطبيعية في غير طبيعي، ما يسمى myofibroblasts، والمسؤولة عن تطوير تليف وتندب، كما يتضح من انخفاض في جل الكولاجين، نظرا لتفاعل معين من الخلايا الليفية والألياف الكولاجين. وعلاوة على ذلك، وبعد الركض المسلسل الليفية في المختبر تفقد قدرتها على تجميع البروتينات المصفوفة خارج الخلية.

زراعة ومع ذلك، حاليا تقنية تجريبية اتقن الخلايا الليفية ذاتي الإنسان، والذي يقضي على السلبيات المذكورة أعلاه، ويؤدي إلى التحول أنكجنيك من الخلايا الليفية الطبيعية. يتم استخدام الخلايا الليفية الذاتية التي تم الحصول عليها بهذه الطريقة لملء عيوب الأنسجة الرخوة في الوجه. في دراسة قام بها هـ. كيلر والمؤلفون المشاركون (2000) ، تلقى 20 مريضًا تتراوح أعمارهم بين 37 إلى 61 عامًا يعانون من التجاعيد والندوب الضمورية العلاج. خزعات الجلد (4 مم) منطقة BTE نحن نقلها إلى المختبر في أنابيب معقمة تحتوي على 10 مل من مستنبت (Dulbecco mikoseptikom المضادات الحيوية، والبيروفات والجنين المصل البقري). تم وضع المادة داخل أطباق 3-5 زراعة مع قطر 60 ملم وحضنت في ترموستات مع جو يحتوي على 5 ٪ CO2. بعد أسبوع واحد ، تمت إزالة الخلايا من الأطباق عن طريق التريبسنة ووضعها في قارورة 25 سم 2. تدار الخلايا لمرضى بمبلغ 4 × 107. وقد لوحظ تأثير سريري مهم وطويل الأمد في المرضى الذين يعانون من تصحيح الطيات الأنفية، وفي المرضى الذين يعانون من ندوب بعد 7 أشهر و 12 شهرا بعد زرع الخلايا الليفية الثالث من ذاتي. وفقا لقياس التدفق الخلوي ، أنتجت الأرومة الليفية مثقف كمية كبيرة من الكولاجين من النوع الأول. في الدراسات المختبرية ، يظهر انقباض طبيعي من الأرومات الليفية عن طريق الحقن. بعد شهرين من تعاطي الخلايا الليفية المزروعة تحت الجلد بجرعة 4 × 107 خلية ، لم يتم اكتشاف فئران عارية. الخلايا الليفية القابلة للحقن لم تتسبب في تكوين ندبة وليف منتشر في المرضى. وفقا للمؤلف ، فإن الخلايا الليفية الذاتية المزروعة قادرة على إنتاج الكولاجين بشكل مستمر ، والذي سيعطي تأثير تجديد تجميلي. في هذه الحالة ، بما أن عمر الخلايا المتمايزة محدود ، فإن الخلايا الليفية المأخوذة من مريض شاب أكثر فاعلية من تلك التي يتم الحصول عليها في كبار السن. في المستقبل ، يُفترض أن تكون إمكانية الحفظ بالتبريد للثقافة الليفية المأخوذة من متبرع شابة في وقت لاحق لعملية زرع لمريض مسن خلاياه الخاصة. وفي الختام، فإنه ليس الاستنتاج الصحيح تماما أن الخلايا الليفية ذاتي، بشرط السلامة الوظيفية هي مثالية لتصحيح عيوب الوجه الأنسجة اللينة. في الوقت نفسه ، يشير الكاتب نفسه أنه في عملية البحث نشأت بعض الحالات الإشكالية المرتبطة باستخدام نظام الأرومة الليفية الكولاجين أيضا. كان التأثير السريري في كثير من الأحيان أضعف من استخدام الكولاجين البقري ، مما تسبب في خيبة الأمل في المرضى.

بشكل عام ، فإن بيانات الأدبيات حول آفاق الاستخدام السريري للخلايا الجذعية الوسيطة تبدو متفائلة. يتم إجراء محاولات لاستخدام الخلايا السلالية النخاعية العظمية الذاتية متعددة الخلايا لعلاج الآفات المفصلية التنكسية. تجري التجارب السريرية الأولى من الخلايا السليفة المتوسطة اللحمية في علاج الكسور المعقدة من العظام. ذاتي والخلايا الوسيطة خيفي انسجة العظام نخاع استخدامها لتوليد أنسجة الغضروف للزرع في تصحيح عيوب الغضروف المفصلي بسبب الصدمة، أو آفات المناعة الذاتية. طرق تمارس من التطبيق السريري من خلايا اللحمة المتوسطة السلف متعددة القدرات لتصحيح عيوب العظام في الأطفال الذين يعانون من التقدم تكون العظم الحاد التي تسببها طفرات من النوع الأول الجينات الكولاجين. بعد mieloabelyatsii الأطفال المستفيدين من نخاع العظام المزروعة من متبرع سليم HLA-متوافق كما نخاع العظم غير المجزأ قد تحتوي على كمية كافية من الخلايا الجذعية الوسيطة لتجديد عيب العظام الشديد. بعد زرع نخاع العظم الخيفي ، كان لدى هؤلاء الأطفال تغيرات نسيجية إيجابية في العظام التربيقية ، زيادة في معدل النمو وانخفاض في حدوث كسور العظام. في بعض الحالات ، يتم تحقيق نتيجة سريرية إيجابية عن طريق زرع نخاع عظمي و بانيات عظمية مرتبطة بشكل وثيق. لعلاج هشاشة العظام الخلقية بسبب خلل في بانيات العظم و osteoclasts في الأنسجة العظمية ، كما يستخدم زرع MSK. استعادة تكوين العظام في هذه الحالة يتم تحقيقه بسبب تبلور تجمع الخلايا الجذعية والخلايا السلفية في الأنسجة العظمية للمرضى.

يتم تحسين طرق التعديل الوراثي للخلايا الجذعية الوسيطة المانحة لتصحيح العيوب الوراثية للأنسجة اللحمية. ومن المفترض أن الخلايا الاصلية الوسيطة قريبا أن تستخدم في علم الأعصاب لخلايا الدماغ chimerization الاتجاه، وخلق مجموعة من الخلايا السليمة، قادرة على توليد انزيم نقص أو العامل المسؤول عن المظاهر السريرية للمرض. ويمكن استخدام زرع الخلايا الجذعية الوسيطة لاستعادة سدى نخاع العظم في مرضى السرطان بعد العلاج الإشعاعي والكيميائي ، وفي تركيبة مع خلايا نخاع العظام - لاستعادة تكوين الدم. تطوير العلاج البديل تهدف إلى القضاء على عيوب الجهاز العضلي الهيكلي باستخدام اللجان الدائمة تشجيع الهندسة الحيوية في تصميم مصفوفة أو biomimics تشكيل الهياكل العظمية التي تسكن ذرية الخلايا الجذعية الوسيطة.

تجهيز

مصادر الخلايا الجذعية الوسيطة

المصدر الرئيسي للخلايا الجذعية الوسيطة هو نخاع العظم الخلايا الجذعية المكونة للدم الذي في الثدييات والتفريق باستمرار إلى خلايا الدم والجهاز المناعي، في حين قدمت الخلايا الجذعية الوسيطة المجموعات الصغيرة من خلايا انسجة نخاع العظام تشبه الخلايا الليفية وتساعد على الحفاظ على حالة غير متمايزة من الخلايا الجذعية المكونة للدم. في ظل ظروف معينة ، تمايز الخلايا الجذعية الوسيطة إلى خلايا من النسيج الغضروفي والعظمي. عندما مطلي على مستنبت في زراعة كثافة خلايا نخاع العظام وحيدات النوى انسجة منخفضة تشكيل مستعمرات الخلايا الملتصقة، والتي، في الواقع، هي الخلايا الليفية متعددة القدرات خلايا السلائف الوسيطة. وقد اقترح بعض الكتاب أن نخاع العظام إيداع الخلايا الجذعية الوسيطة غير ملتزم بها، والتي، وذلك بفضل القدرة على تجديد الذات وإمكانات عالية التمايز، وتوفير جميع أنسجة الجسم أسلافه خلايا اللحمة المتوسطة اللحمية في جميع مراحل الحياة كائن الثدييات.

في نخاع العظام ، تشكل عناصر الخلايا اللحمية شبكة تملأ الفراغ بين الجيوب الأنفية والنسيج العظمي. إن محتوى MSC الخام في نخاع العظم لشخص بالغ يشبه عدد الخلايا الجذعية المكونة للدم ولا يتعدى 0.01-0.001٪. الخلايا الجذعية الوسيطة المعزولة من نخاع العظم ولا تخضع للزراعة تخلو من جزيئات لاصقة. لا تعبر هذه اللجان الفرعية عن CD34 و ICAM و VCAM والنوع الأول والثالث من الكولاجين و CD44 و CD29. لذلك، في المختبر ليست ثابتة الخلايا الجذعية الوسيطة على الركيزة ثقافة، وأكثر تقدما السلف المستمدة الخلايا الجذعية الوسيطة، وقد شكلت مكونات هيكل الخلية والأجهزة المستقبلة من جزيئات التصاق الخلية. تم العثور على خلايا سترومال مع النمط الظاهري CD34 حتى في الدم المحيطي ، على الرغم من أنها أقل بكثير في نخاع العظام من الخلايا النووية أحادية النواة الإيجابية CD34. الخلايا CD34 المعزولة من الدم ونقلها إلى الثقافة تعلق على الركيزة وتشكيل مستعمرات الخلايا الليفية تشبه.

من المعروف أن القاعدة اللحمية لجميع أعضاء وأنسجة الثدييات والبشر تنشأ في الفترة الجنينية من مجموعة مشتركة من الخلايا الجذعية الوسيطة قبل مرحلة تكوين الأعضاء. لذلك ، يعتقد أنه في جسم ناضج ، يجب أن تكون معظم الخلايا الجذعية الوسيطة في النسيج الضام والعظمي. وقد ثبت أن غالبية العناصر الخلوية من سدى النسيج الضام والعظم الفضفاض يتم تمثيلها من قبل الخلايا السلفية الملتزمة ، والتي ، مع ذلك ، تحتفظ بالقدرة على التكاثر وتشكيل الحيوانات المستنسخة في المختبر. مع إدخال هذه الخلايا في تدفق الدم الكلي ، يتم زرع أكثر من 20 ٪ من الخلايا السلفية الوسيطة بين العناصر اللحمية للأنسجة المكونة للدم والأعضاء المتنيّة.

مصدر محتمل للخلايا الجذعية الوسيطة هو الأنسجة الدهنية، ومنها الخلايا الجذعية ملتزمة وجدت في درجات الأسلاف خلية شحمية متفاوتة. عناصر السلف الأقل نضجا من الأنسجة الدهنية - خلايا انسجة الأوعية الدموية، وهو نفس الأسلاف الوسيطة متعددة القدرات من نخاع العظام يمكن أن تفرق في الخلايا الشحمية في إطار العمل من السكرية، وعامل النمو الذي يشبه الانسولين والانسولين. في ثقافة خلايا الأوعية الدموية انسجة تفرق في الخلايا الشحمية والغضروفية والعظام نسيج الخلايا المشتقة نخاع الدهنية وتشكيل الخلايا الشحمية وبانيات.

في العضلات ، تم العثور أيضا على مصادر الجذعية اللحمية. في الثقافة الأولية للخلايا المعزولة من العضلات الهيكلية البشرية ، يتم الكشف عن خلايا شكل النجمية و myotubes multinucleated. في ظل وجود الخلايا النجمية مصل الحصان تتكاثر في المختبر بدون علامات تمايز خلوي وبعد إضافة ديكساميثازون ليتميز مستنبت التمايز بظهور خلايا عناصر الخلية التي تحتوي على النمط الظاهري من العضلات والهيكل العظمي وسلس، والعظام والغضاريف، والأنسجة الدهنية. وبالتالي ، فإن كل من الخلايا السلفية متعددة الوسيطة الملتزمة وغير الملتزم بها موجودة في الأنسجة العضلية البشرية. وتبين أن مجموعة من الخلايا الاصلية موجودة في العضلات والهيكل العظمي يأتي من نخاع العظم خلايا اللحمة المتوسطة السلف متعددة القدرات غير ملتزم بها، ويختلف من الخلايا الأقمار الصناعية عضلي.

في عضلة القلب من الفئران حديثي الولادة كما وجدت الخلايا النجمية لاصق، ومناسبة لإمكانات تمايز خلايا اللحمة المتوسطة السلف متعددة القدرات، وتحت تأثير ديكساميثازون أنها تفرق في الخلايا الشحمية، بانيات، غضروفية وخلايا العضلات الملساء، myotubes الهيكل العظمي والعضلات وmyocytes القلب. وقد تبين أن الأوعية الدموية خلايا العضلات الملساء (pericytes) وتستمد متعدد القدرات غير متمايزة خلايا السلائف الوسيطة المحيطة بالأوعية. في الثقافة من الخلايا الجذعية الوسيطة المحيطة بالأوعية تعبر عن والسلاسة الأكتين العضلات والصفائح الدموية المشتقة مستقبلات عامل النمو وقادرة على تمييز خلايا العضلات الملساء على الأقل.

وهناك مكان خاص ، من حيث احتياطيات الجذع ، هو النسيج الغضروفي ، الذي يعتقد أن إمكاناته التعويضية المنخفضة للغاية ناتجة عن نقص في الخلايا السليفة المتوسطة الحجم متعددة العوامل أو عوامل التمايز والنمو. من المفترض أن الخلايا السلفية متعددة الوسيطة المتعددة التي تم التبرع بها مسبقًا إلى الكوندرو والتكوّن العظمي تدخل النسيج الغضروفي من مصادر الأنسجة الأخرى.

لم يتم تأسيس المنشأ الأنسجة والشروط لعمولة الخلايا السليفة الوسيطة في الأوتار أيضا. وتشير الملاحظات Ekspermentalnye أنه في أوائل الخلايا وتر أخيل أرنب ما بعد الولادة في الثقافات الأولية في الممر الأول والإبقاء على التعبير عن نوع الكولاجين أنا وdecorin، ولكن على مزيد من زراعة فإنها تفقد tenotsitov علامات التمايز.

وتجدر الإشارة إلى أن الإجابة على سؤال عما إذا المترجمة بالفعل في أنسجة مختلفة من الخلايا الاصلية الوسيطة متعددة القدرات هي دائما موجودة في سدى، أو يتم تعويضها تجمع الأنسجة من الخلايا الجذعية الوسيطة التي كتبها هجرة انسجة العظام خلايا نخاع الجذعية، ما زال ينتظر ذلك.

بالإضافة إلى نخاع العظم ومناطق الأنسجة الوسيطة الأخرى للكائن الحي للكبار ، يمكن أن يكون مصدر آخر ل MSC دم الحبل السري. ولقد ثبت أن دم الحبل السري الوريد يحتوي على الخلايا التي تحتوي الخصائص المورفولوجية ومولدة مماثلة مع الخلايا الاولية الوسيطة متعددة القدرات قادرة على الالتصاق، وليس أقل شأنا متعددة القدرات خلايا اللحمة المتوسطة السلف من نخاع العظام الأصل عن طريق التفريق المحتملة. في الثقافات الخلايا الجذعية الوسيطة من دم الحبل السري الكشف عن 5-10٪ غير ملتزم بها الأسلاف الوسيطة متعددة القدرات. واتضح أن عددهم في دم الحبل السري يتناسب عكسيا مع عمر الحمل، وهو دليل غير مباشر للهجرة متعددة القدرات الخلايا الاولية الوسيطة في الأنسجة المختلفة أثناء التطور الجنيني. وترددت معلومات لأول مرة عن التطبيق السريري من الخلايا الجذعية الوسيطة عزل من دم الحبل السري، وكذلك الجنينية المستمدة مادة بيولوجية، الذي يستند على قدرة معروفة من الخلايا الجذعية الجنينية دمج وprizhivlyatsya وظيفة في الأجهزة وأنظمة الأنسجة المستفيدين الكبار.

البحث عن مصادر جديدة للخلايا الجذعية الوسيطة

يخلق استخدام الخلايا الجذعية الوسيطة من أصل جنيني ، مثل خلايا الجنين الأخرى ، عددًا من المشكلات الأخلاقية والقانونية والتشريعية. لذلك ، لا يزال البحث عن المواد المانحة الخلوية extraembryonic. وكانت محاولة غير ناجحة التطبيق السريري من الخلايا الليفية الجلد البشري، تم تحديد من قبل ليس فقط القدرة المالية العالية التكنولوجيا، ولكن أيضا التمايز السريع لالخلايا الليفية إلى الخلايا الليفية وجود انتشار أقل بكثير المحتملين وإنتاج عدد محدود من عوامل النمو. مزيد من التقدم في دراسة علم الأحياء من MSK وسليمات نخاع العظام mesenchymal متعددة الطيف يسمح لوضع استراتيجية للاستخدام السريري للخلايا الجذعية اللحمية الذاتية. تتطلب تكنولوجيا عزلتها وزراعتها وتكاثرها خارج الجسم الحي وتمييزها الموجه ، أولاً ، دراسة الطيف الجزيئي للعلامة التجارية MSC. أظهر تحليلهم أن في الثقافات الأولية لأنسجة العظام البشرية هناك عدة أنواع من الخلايا السلفية متعددة الوسيطة. تم العثور على النمط الظاهري المؤيد ل osteoblast في الخلايا معربا عن علامة من الخلايا السلوية سترومال STRO-1 ، ولكن لا تحمل علامة osteoblast - الفوسفاتيز القلوية. وتتميز هذه الخلايا بقدرة منخفضة على تشكيل مصفوفة العظام المعدنية ، فضلاً عن غياب التعبير عن osteopontin ومستقبل هرمون الغدة الدرقية. يتم تمثيل مشتقات الخلايا STRO-1 الإيجابية التي لا تعبر عن الفوسفاتيز القلوية بواسطة بانيات العظم المتوسطة والمتمايزة تمامًا. ثبت أن العناصر الخلوية للخطوط المستنسخة للخلايا الإيجابية STRO-1 لعظام trabecular البشرية قادرة على التفريق إلى الخلايا الناضجة الناضجة والخلايا الشحمية (adipocytes). تمايز اتجاه هذه الخلايا يعتمد على التعرض للأحماض الدهنية غير المشبعة، السيتوكينات الموالية للالتهابات - IL-1B وعامل نخر الورم و(TNF-أ)، وكذلك المضادة للالتهابات ومناعة TGF-ب.

وفي وقت لاحق تبين أن خلايا متعددة القدرات السلائف الوسيطة تفتقر معينة فقط لهم النمط الظاهري الأصيل، ولكن التعبير عن علامات معقدة، مميزة لالوسيطة، البطانية، الخلايا الظهارية والعضلات في غياب التعبير من الخلايا المكونة للدم مستضدات immunophenotypic - CD45، CD34 CD14 و. وبالإضافة إلى ذلك، والخلايا الجذعية الوسيطة وجوهري إنتاج inducibly المكونة للدم وعوامل النمو غير المكونة للدم، الإنترليوكينات، وكيموكينات، وفي الخلايا السلائف الوسيطة متعددة القدرات أعرب مستقبلات بعض عوامل النمو والسيتوكينات. بين الخلايا اللحمية أساسيات الجسم البشري وجدت dormantnye أو يستريح الخلايا مع نمط ظاهري مناعي، متطابقة تقريبا إلى المولدات المضادة من الخلايا الاصلية الوسيطة متعددة القدرات 5 فلورويوراسيل الخام - هذه وغيرها من الخلايا التعبير عن CD117، بمناسبة "الكبار" الخلايا الجذعية.

وهكذا ، لم يتم بعد تحديد علامة خلية فريدة من نوعها للخلايا الجذعية الوسيطة. ومن المفترض أن الخلايا يستريح والسكان غير الملتزمين من خلايا السلائف الوسيطة متعددة القدرات لأنها لا تعبر عن علامات خلية ملتزمة هشاشة العظام (CBFA-1) أو تكون الشحم (PPAR-Y-2). يؤدي التعرض المطول للخلايا البطيئة المتكاثرة ببطء إلى مصل العجل الجنيني إلى تكوين سلائف متمايزة في النهاية ، ويتميز بالنمو السريع. يتم دعم النمو النسيلي لخلايا اللحمة المتوسطة الجذعية بواسطة FGF2. ويبدو أن الخلايا اللحمية الجذعية المستمدة من الجينوم "مغلقة" ما يكفي من ضيق تم الإبلاغ عن غياب التمايز عفوية في اللجان الدائمة - وبدون شروط خاصة لارتكابهم حتى أنها لا تتحول إلى خلايا سلسلة الوسيطة.

لدراسة التركيبة السكانية المستمدة الوسيطة يتم البحث الخلايا الجذعية البروتينات التمايز علامة على خطوط الخلايا اللحمية والثقافات الأولية. في مستعمرة فحص خلايا نخاع العظام نسيلي في المختبر وجد الباحثون أنه عندما يتعرض للثقافات الأولية من EGF يزيد من متوسط حجم المستعمرات ويقلل من التعبير نسيلي من الفوسفاتيز القلوية، في حين أن إضافة الهيدروكورتيزون ينشط التعبير عن الفوسفاتيز القلوية التي هي علامة التمايز عظمي المنشأ التوجه اللجان الدائمة. جعل الاجسام المضادة ضد STRO-1 من الممكن فصل والسكان دراسة الخلايا الملتصقة STRO-1-إيجابية في نظام غير متجانسة الثقافات دكستر. الطيف السيتوكينات تنظيم ليس فقط الانتشار وتمايز الخلايا المكونة للدم واللمفاوية، ولكن أيضا المشاركة في تشكيل وتكوين وارتشاف الأنسجة العظمية التي كتبها para-، والسيارات والآليات الغدد الصماء. وتستخدم الإفراج بوساطة مستقبلات الرسل الثانوية مثل المخيم، مادة ال diacylglycerol، inositol ثلاثي الفوسفات، وCA2 + أيضا لتحليل علامة على فئات مختلفة من الأنسجة اللحمية من الخلايا معربا عن المستقبلات ذات الصلة. استخدام الأجسام المضادة وحيدة النسيلة كعلامات السماح للإنشاء الأجهزة اللمفاوية انسجة خلايا تابعة شبكي لT ومناطق B-التابعة.

لبعض الوقت استمرت النزاعات العلمية حول مسألة إمكانية أصل MSC من الخلايا الجذعية المكونة للدم. وبالفعل ، مع ازدياد تعليق خلايا نخاع العظام إلى ثقافات أحادية الطبقة ، تنمو فيها مستعمرات منفصلة من الأرومات الليفية. ومع ذلك، فقد تبين أن وجود السلائف من مستعمرات الخلايا الليفية ومختلف الجراثيم تمايز الأنسجة المكونة للدم كجزء من نخاع العظام ليست دليلا على أصلها المشترك الخلايا الجذعية المكونة للدم. باستخدام تحليل التمايز للخلايا الجذعية نخاع العظام وجدت أن المكروية في زرع منتبذ، يتم نقل الخلايا المكونة للدم من نخاع العظام، وهو ما يثبت وجود، في نخاع العظام مستقلة عن السكان MSC مكون للأنسجة الخلايا المكونة للدم.

وبالإضافة إلى ذلك، كشفت طريقة الاستنساخ انتقائية في الثقافات أحادي الطبقة من الخلايا اللحمية نخاع العظام من فئة جديدة من خلايا تمهيدا لتحديد أعدادهم، لدراسة خصائص، التكاثري والتمايز إمكاناتهم. اتضح أن الخلايا الشبيهة بالورم الليفية تتكاثر وتتكون من مستعمرات ثنائية الصبغة ، والتي ، مع عودة الزرع إلى الجسم ، توفر تكوين أعضاء جديدة للدم. وتشير نتائج الدراسات من الحيوانات المستنسخة الفردية أن هناك مجموعة من الخلايا في التكاثري والتمايز إمكاناتهم قادرة على المطالبة دور الخلايا الجذعية من الأنسجة اللحمية، Gistogeneticheskaja مستقلة عن الخلايا الجذعية المكونة للدم في الخلايا اللحمية السلف. تتميز خلايا هذا النوع من السكان بنمو ذاتي الدعم ، وتمايز الخلايا السلفية لأنسجة العظام ، والغضاريف ، ونخاع العظم الشبكي.

ذات أهمية كبيرة هي نتائج دراسات Chailakhyan R. آخرون (1997-2001)، والتي كانت العظام مثقف المشتقة من نخاع انسجة خلايا السلف الأرانب والخنازير الغينية، والفئران ل-MEM مستنبت تستكمل مع مصل العجل الجنين. قام الباحثون بالاكتشاف بكثافة أولية 2-4 × 103 خلايا نخاع عظمي لكل 1 سم 2. كما تستخدم مثلي المغذية أو أجنبي المنشأ المعطل بواسطة أشعة من خلايا نخاع العظام في العمل الاحتفاظ جرعة المغذية، ولكن انتشار سدت تماما. تم تجريب مستعمرات أساسية منفصلة لمدة أسبوعين من الأرومات الليفية لإنتاج سلالات وحيدة النسيلة. تم الحصول على أدلة المستعمرات أصل نسيلي باستخدام علامات الكروموسومات في ثقافات مختلطة من نخاع العظام من الذكور والإناث غينيا الخنازير، والوقت الفاصل بين اطلاق النار الثقافات الحية، وكذلك في ثقافات مختلطة من نخاع العظام من الفئران مسانج وCBA SVAT6T6. وقد أجريت الطين زرع خلايا نخاع العظام المعزولة حديثا نمت في المختبر أو انسجة الخلايا الليفية تحت كبسولة الكلى في السقالات ivalonovyh المسامية أو الجيلاتين، وكذلك الأرنب المعطل مصفوفة العظام إسفنجي. استنساخ زرع في تغطية العظام خنزير غينيا الفخذين تنظيفها من الأنسجة اللينة والسمحاق، وقطع الكردوس وغسل بدقة نخاع العظام. تم تقطيع العظام إلى أجزاء (3-5 ملم) ، وتجفيفها وتشعيعها بجرعة 60 غي. في الأغطية العظمية ، تم وضع مستعمرات ليفية فردية وزرعها في العضل. للزرع داخل الصفاق من الخلايا الليفية اللحمية، ونمت في المختبر، وكنا أنواع A غرفة نشر (V = 0015 سم 3، ح = 0، ل مم) وD (V = 0،15 سم 3، ح = 2 مم).

عند دراسة ديناميكية نمو سلالات نسيلي Chailakhyan R. وآخرون (2001) وجدت أن الخلايا الفردية، ومستعمرة تشكيل الخلايا الليفية، وكذلك ذريتهم إمكانات التكاثري كبيرة. في الممر العاشر ، كان عدد الخلايا الليفية في بعض السلالات 1.2-7.2 × 10 ⁹ خلايا. في عملية تطويرها ، أدوا ما يصل إلى 31-34 الازدواجية الخلية. زرع منتبذ بالتالي العظام سلالات المشتقة من نخاع التي شكلتها السلائف اللحمية أدت عدة عشرات من الحيوانات المستنسخة لنقل المكروية نخاع العظم والتعليم في زرع جديد الجهاز المكونة للدم المنطقة. أثار المؤلفون مسألة ما إذا كانت الحيوانات المستنسخة الفردية قادرة على نقل المكروية العظمية من الخلايا السداسية العظمية أم أنها تتطلب تعاون عدة أسلاف سترومال مشتقة من نسيلة مختلفة؟ وإذا كانت الحيوانات المستنسخة الفردية قادرة على نقل البيئة المكروية ، فهل تكون مكتملة لجميع الجراثيم الثلاثة ، أم أن الحيوانات المستنسخة المختلفة توفر بيئة المكروية لمختلف براعم الدم؟ لمعالجة هذه المشاكل ، تم تطوير تقنية لزرع الخلايا السدومة الانسدالي على هلام الكولاجين ، مما يسمح لإزالة من المستعمرات السطحية من الخلايا الليفية نمت لاحقة لزراعة الأعضاء. استنساخ الخلايا الليفية الفردية انسجة وخلايا نخاع العظام التي تزرع من الفئران CBA وخنازير غينيا، وقطع جنبا إلى جنب مع جزء من طبقة جل ومغاير التوضع المزروعة - تحت كبسولة الكلى من الفئران مسانج أو ذاتي عضلة بطن الخنازير الغينية. عندما زرع في العضلات ، وضعت المستعمرات على الجل في الأغطية العظمية.

لقد وجدنا أن من 50-90 يوما بعد زرع الخلايا الليفية مستعمرة نخاع العظام في 20٪ من لوحظت في تنمية المناطق زرع العظم أو العظام والأنسجة المكونة للدم الحالات. في 5٪ من الحيوانات المتلقي تشكيل جيوب العظام وجود تجويف مليئة نخاع العظام. داخل اسطوانات العظام مثل هذه البؤر لها شكل دائري وكبسولة مصنوعة من النسيج العظمي، مع خلية عظمية ومتطورة طبقة بانيات العظم. نخاع العظام تجويف يحتوي على نسيج شبكي مع النخاعي ومحمر الخلايا، نسب التي لا تختلف عن تلك في نخاع العظم الطبيعي. وكان الكسب غير المشروع الكلى هيئة النخاعية نموذجية تتكون من زرع نخاع العظم الأصلي، حيث تغطي كبسولة العظام فقط تجويف النخاع من الكبسولة الكلى. وشملت الأنسجة مقنعين النخاعي ، محمر والعناصر megakaryocytic. سدى من القناة النخاعية والجيوب الأنفية وضعت بشكل جيد ويتضمن نظام خلية الدهون نموذجي. في نفس الوقت في مجال زرع بعض المستعمرات العظم مع عدم وجود علامات الدم تم العثور عليه تحت كبسولة الكلى. واستمرت الدراسة لقوة التكاثري والتفريق بين الحيوانات المستنسخة الفردية على وحيدة النسيلة سلالات نخاع العظام أرنب، ومعلق الخلايا في مستنبت وفي اسفنجة ivalonovoy منفصل وزنها 1-2 ملغ مدسوس تحت كبسولة الكلى من نخاع العظام المانحة أرنب. وقد خضع هذا زرع ذاتي لخلايا 21 سلالة أحادية النسيلة. تم أخذ النتائج في الاعتبار في 2-3 أشهر. ووجد الباحثون أن 14٪ من العظام سلالات نخاع المزروع وحيدة النسيلة الجسم شكلت تتكون من العظام ونخاع العظام تجويف مليئة الخلايا المكونة للدم. في 33٪ من الحالات السلالات المزروعة شكلت العظام التعاقد مع تجاويف مختلفة الحجم ostootsitami خربت في بانية العظم وطبقة المتقدمة. في بعض الحالات، والإسفنج زرع الحيوانات المستنسخة وضعت شبكية بدون عظم أو الخلايا المكونة للدم. أحيانا وقع تشكيل سدى شبكي مع شبكة متطورة من الجيوب، ولكن لا يتم تعبئة الخلايا المكونة للدم. وهكذا، كانت النتائج التي تم الحصول عليها مماثلة لتلك التي حصلت عليها زرع من الحيوانات المستنسخة على جل الكولاجين. ومع ذلك، إذا كان زرع استنساخ نمت على الركيزة أسفرت عن تشكيل أنسجة النخاع هو 5٪ من العظام - 15٪ ونسيج شبكي - في 80٪ من الحالات، وحيدة النسيلة زرع سلالات تكوين خلايا نخاع العظام لوحظ في 14٪ من حالات العظام - في 53 ٪ و شبكي - في 53 ٪ من الحالات. ووفقا للمؤلفين، وهذا يدل على أن الظروف لتنفيذ إمكانات التكاثري وتمايز الخلايا الليفية اللحمية عند زرعها على السقالات التي يسهل اختراقها كانت أكثر المثلى من وزرع في العظام وتغطي الركيزة الكولاجين. ليس من المستبعد أن استخدام أساليب أكثر تقدما من زراعة وزرع استنساخ ردود الفعل يمكن أن تحسن الظروف لتنفيذ استنساخ إمكانات التمايز وتغيير هذه العلاقات. بطريقة أو بأخرى، ولكن القيمة الرئيسية للبحث تكمن في حقيقة أن بعض الحيوانات المستنسخة الخلايا اللحمية قادرة على تشكيل أنسجة العظام مع ضمان المكروية للدم اللحمية على الفور لمدة ثلاثة براعم الدم نخاع العظم: محمر، النخاعي والنواءات، وخلق كبيرة بما يكفي موطئ قدم الأنسجة المكونة للدم و بعض كتلة العظام.

علاوة على ذلك ، حل المؤلفون مشكلة القدرة على هذه الأنواع من التمايز الخلوي للخلايا السلفية الأنفية الفردية الفردية في ظروف نظام مغلق من غرف الانتشار. وعلاوة على ذلك، كان من الضروري تحديد ما إذا كانت الحيوانات المستنسخة الفردية للمعرض المحفزة أو عرض للتمييز إمكانية تتطلب التفاعل التعاوني للعديد من الحيوانات المستنسخة مع تمايز خلوي علامة ثابتة، نسبة مختلفة من الذي يحدد تشكيل تفضيلية من العظام والغضاريف أو شبكي. من خلال الجمع بين نهجين المنهجية - وحيدة النسيلة يعزل العظام الخلايا الاولية نخاع اللحمية وزرع لهم في غرف نشرها، Chailakhyan R. وآخرون (2001) الحصول على نتائج التي سمحت للاقتراب من فهم التنظيم الهيكلي للسدى نخاع العظام. أسفرت زرع سلالات المضادة الخلايا الاولية اللحمية إلى خلايا O نوع في تشكيل كل من العظام والغضاريف الأنسجة، مما يدل على قدرة ذرية واحدة خلايا انسجة تشكيل تشكيل مستعمرة في وقت واحد العظام والغضاريف. إن الافتراض القائل بأن النسيج العظمي والغضروفي ينشأ من الخلية السدالية المشتركة قد تم التعبير عنه مرارا وتكرارا. ومع ذلك ، لم يكن لهذه الفرضية تأكيد تجريبي صحيح. كان تشكيل العظام والغضروف في غرف الانتشار دليلاً ضروريًا على وجود الخلايا الجذعية لسمكة نخاع العظم لخلية بديلة مشتركة لهذين النوعين من الأنسجة.

ثم 29 سلالات نسيلي الممرات الثانية والثالثة، وضعت الثقافات الأولية المشتقة من نخاع العظام من الأرانب في غرف نشر وزرع حيوان مثلي البريتونى. وقد أظهرت الدراسات أن 45 ٪ من سلالات النخاع العظمي أحادي النسيلة لها قدرات عظمية المنشأ. بشكل استثنائي ، يحتوي النسيج الشبكي على 9 غرف ، ولكن مع العظام والأنسجة الغضروفية كان موجودًا في 13 غرفة أخرى ، والتي تمثل 76 ٪ من جميع السلالات. في غرف من النوع O ، حيث كان التمايز ممكنا لكل من النسيج العظمي والغضروفي ، تمت دراسة 16 سلالة. في أربع حجرات (25 ٪) ، تم تشكيل كل من النسيج العظمي والغضروفي. مرة أخرى تجدر الإشارة إلى أن الدراسات Chailakhyan R. وآخرون (2001) الخلايا الاصلية الفردية خضعت سلالة خلية تتكون من 31-34 الأضعاف، وكان نسلهم 0،9-2،0 × 10 ⁹ خلايا. كان عدد الإنزيمات التي كانت تتعرض لها الخلايا الأولية للسلالات متعددة السلالات من الناحية العملية مماثلاً لخلايا السلالات الوحيدة النسيلة. في الوقت نفسه ، فإن معدل تطور السلالات متعددة النسيلة ، خاصة في المرحلة الأولى من تكوينها ، يعتمد إلى حد كبير على عدد المستعمرات المستخدمة لبدء السلالات. سلالات ثنائية من الخلايا الليفية الجنينية البشرية (WI-38) عند إعادة تشكيل في مستويات 12-15 من الازدواجية شكلت أيضا مستعمرات تختلف في قطرها وفي محتوى الخلايا فيها. كانت المستعمرات الكبيرة التي تحتوي على أكثر من 103 خلايا 5-10 ٪ فقط. مع الزيادة في عدد الانقسامات ، انخفضت نسبة المستعمرات الكبيرة. الإبقاء على سلالات الخلايا الليفية نخاع العظام انسجة الأحادية وبولكلونل كروموسوم مضاعفا تعيين بعد 20 أو أكثر من الأضعاف، وكان الميل للتنمية مماثلة لديناميات سلالات مضاعفا الخلايا الليفية الجنينية. تحليل إمكانية التفريق بين نخاع العظم خلايا انسجة السلف المحددة، التي أجرتها السلالات وحيدة النسيلة زرع في غرف نشرها، أظهرت أن نصفهم المكونة للعظم. شكلت المستعمرات الكبيرة 10 ٪ من العدد الإجمالي. وبالتالي ، فإن عدد الخلايا المكونة للمستعمرة المكونة للعظم يناظر حوالي 5٪ من مجموع سكانها. في الكتلة الكلية للخلايا السلية العظمية التي حددها المؤلفون ، كانت هناك خلايا قادرة على تكوين نسيج عظمي ونسيج غضروفي في وقت واحد. للمرة الأولى وجدت أن لهذين النوعين من الأنسجة في الكائن الحي الكبار هي الخلية تمهيدا المشتركة: تم إنشاء 25٪ من الحيوانات المستنسخة اختبارها من قبل خلايا مماثلة، وكان عددهم في عموم السكان من الخلايا الاصلية لا تقل عن 2.5٪.

وهكذا ، افتتح زراعة الأعضاء التناسلية من الحيوانات المنوية الفردية من الخلايا الليفية نخاع العظام جوانب جديدة من التنظيم الهيكلي من السكان من الخلايا السلفية الوسيطة. العثور على خلايا انسجة السلف قادرة على نقل المكروية محددة على الفور لجميع الجذعية المكون للدم عدد بين الحيوانات المستنسخة التحقيق بشكل اكبر على نماذج مختلفة وهو 5-15٪ (0،5-1،5٪ من العدد الكلي للخلايا السلف الكشف). جنبا إلى جنب مع الحيوانات المستنسخة، ونقل كاملة المكروية نخاع العظام، وهناك خلايا السلف، حتمية فقط لتكوين العظام، والذي شكل عندما نقل إلى نظام مفتوح، والعظام التي لا تدعم تطوير الدم. عددهم من العدد الإجمالي للخلايا السلف هو 1.5-3 ٪. بعض هذه الخلايا يمكن أن تشكل أنسجة العظام مع فترة محدودة من الصيانة الذاتية. وبالتالي ، فإن عدد السكان من الخلايا السلفي انسجة غير متجانسة في إمكاناتها التمايز. ومن بين هؤلاء هناك فئة الخلية، مدعيا دور الخلايا الجذعية اللحمية قادرة على التفريق في جميع الأبعاد الثلاثة الكامنة في الأنسجة اللحمية نخاع العظام، وتشكيل العظام والغضاريف والأنسجة شبكي. تسمح هذه البيانات لنا أن نأمل أنه مع مساعدة من علامات مختلفة خلية سوف يكون من الممكن تحديد مساهمة كل نوع من الخلايا اللحمية في المكروية لمنظمة معينة ودعم الدم في الثقافات دكستر.

تقنية

ملامح الخلايا الجذعية الوسيطة

في السنوات الأخيرة، وجدت أن في الثقافات ثابتة من نخاع العظام قدمت الوسيطة الخلايا الاولية متعددة القدرات يبلغ عدد سكانها محدود من الخلايا غير المحببة صغيرة الخلايا (RS-1)، وتتميز قدرة منخفضة من الاستعمار وغياب كي-67 التعبير مستضد محدد لتكاثر الخلايا. المعلمات مولدة dormantnyh RS-1 خلايا مختلفة من الطيف المستضدات التي ارتكبت تنتشر بسرعة خلايا انسجة السلف. وقد وجد أن نسبة عالية من انتشار الخلايا السلفية الملتزمة لوحظ فقط في وجود خلايا RS-1. بدوره، RS-1 خلايا يزيد من معدل النمو تحت تأثير العوامل يفرز من قبل خلايا السلف متعدد القدرات الوسيطة المشتقة الأكثر نضجا. يبدو أن خلايا RS-1 هي فئة فرعية من MSK غير ملتزم بها ، وقادرة على إعادة التدوير. في مقاومة إلى 5 فلورويوراسيل خلايا انسجة السلف من نخاع العظام يتميز محتوى RNA منخفضة ومستويات عالية من التعبير عن الجينات كربوكسيل الأورنيثين المختبر - علامة غير المتكاثرة الخلايا.

مكثفة الخلايا الاولية تربية انسجة تبدأ بعد التثبيت على الركيزة. عندما هذا الملف يتم التعبير عن علامة الخلايا سيئة متباينة: SH2 (TGF- مستقبلات (3)، SH3 (المجال يشير البروتين)، وأنواع الكولاجين الأول والثالث، فبرونيكتين، التصاق مستقبلات VCAM-1 (CD106) وICAM (CD54)، كادهيرين-11 ، CD44، CD71 (ترانسفيرين المستقبلة)، CD90، CD120a وCD124، ولكن من دون التعبير عن علامات مميزة من الخلايا الجذعية المكونة للدم (CD34، CD14، CD45). تمكن النمو نسيلي passaged مرارا الخلايا الجذعية الوسيطة لإنتاج ثقافة العديد من متجانسة وراثيا المحفزة انسجة السلف الخلايا. CEREA 2-3 مرور عددهم يصل 50-300،000،000. في ثقافة كثافة كافية بعد وقف انتشار خلايا انسجة السلف، على عكس الخلايا الليفية الأنسجة المكونة للدم تفرق في الخلايا الشحمية، myocytes، وخلايا الغضروف والأنسجة والعظام. إن الجمع بين الإشارات التنظيمية ثلاثة التمايز تضم 1-ميثيل izobutilksantin (محفز من تشكيل المخيم داخل الخلايا)، ديكساميثازون (مثبط لفسفوليباز ووC) وإندوميثاسين (مثبط انزيمات الأكسدة الحلقية، الثرموبوكسان النشاط تخفيض و) يتحول في الخلايا الشحمية و 95٪ خلايا اللحمة المتوسطة السلف. تشكيل خلية شحمية من خلايا انسجة غير ناضجة وأكد التعبير عن الجينات البروتين الدهني الليباز، وتحديد النسيجية من apolipoproteins ومستقبلات peroxysomal. خلايا من نفس استنساخ تتأثر TGF-ب في المتوسط مجانا المصل يخلق السكان متجانسة من خلية غضروفية. وضعت زراعة الخلايا متعددة الطبقات من الغضروف المصفوفة خارج الخلية تتميز تتكون من بروتيوغليكان والكولاجين النوع الثاني. في وسط غذائي مع مجمع 10٪ مصل الجنين إشارات أثر التمايز تتكون من ب-سكرولي (المتبرع الفوسفات غير العضوية)، وحمض الاسكوربيك وديكساميثازون، في نفس الثقافة انسجة الخلايا الاولية السلف يؤدي إلى تشكيل المجاميع الخلية. في مثل هذه الخلايا، وهناك زيادة مطردة في نشاط مستويات الفوسفاتيز القلوية وosteopontin، مشيرا إلى تشكيل لتمعدن العظام التي أكدت خلايا زيادة مطردة في الكالسيوم داخل الخلايا.

ووفقا لبعض، وقدرة الخلايا الجذعية الوسيطة لتقسيم إلى أجل غير مسمى وتكاثر أنواع مختلفة من الخلايا النسب الوسيطة جنبا إلى جنب مع وجود درجة عالية من المرونة. عندما تدار إلى البطينين، أو المادة البيضاء الخلايا الجذعية الوسيطة تهاجر إلى لحمة النسيج العصبي وتفرق في الخلايا العصبية أو الدبقية المستمدة خط الخلية. بالإضافة إلى ذلك ، هناك أدلة على تبدل التفرعات في الخلايا الجذعية السرطانية في الخلايا المكونة للدم على حد سواء في المختبر وفي الجسم الحي. وأكثر تحليلا متعمقا في بعض الدراسات تحديد ليونة عالية بشكل استثنائي من اللجان الدائمة، والذي يتجلى في قدرتها على التمايز إلى الخلايا النجمية، قليلة التغصن، الخلايا العصبية، العضلية، والخلايا العضلية الملساء وخلايا العضلات والهيكل العظمي. في عدد من الدراسات transdifferentsirovochnogo إمكانات اللجان الدائمة في التجارب المختبرية والحية وجدت أن متعددة القدرات خلايا اللحمة المتوسطة تمهيدا لنخاع العظام أصل يفرق عضال في خطوط الخلايا التي تشكل العظام والغضاريف والعضلات والأعصاب والأنسجة الدهنية، وكذلك الأوتار وسدى التي تدعم الدم .

ومع ذلك، في دراسات أخرى، لا يمكن أن يتم الكشف عن أي علامات على تقييد تعدد القدرات جينوم الخلايا الجذعية الوسيطة والسكان خلية انسجة السلف، ولكن للتحقق من خلايا انسجة المحفزة الممكنة تم التحقيق أكثر من 200 استنساخ MSC معزولة عن ثقافة الأولية. الغالبية العظمى من الحيوانات المستنسخة في المختبر الإبقاء على القدرة على التمايز إلى المكونة للعظم، مكون للغضروف والاتجاهات مكون الشحم. عندما استبعاد احتمال هجرة الخلايا المتلقية من خلال زرع الخلايا الجذعية الوسيطة تحت كبسولة الكلى أو في غرف نشر يبدو أن خلايا انسجة السلف في الموقع تحتفظ النمط الظاهري متجانسة، مما يدل إما لعدم وجود زرع منطقة عوامل تقييد أو غياب اللجان الدائمة المحفزة وحدها. وفي الوقت نفسه يسمح بوجود نوع نادر من الخلايا الجذعية المحفزة الجسدية، التي تبشر المشتركة للخلايا الجذعية البالغة.

على متعددة، ولكن ليس صحيحا الخلايا الجذعية الوسيطة المحفزة تشكل نسبة ضئيلة جدا من خلايا نخاع العظام وقادرة، في ظروف معينة، عندما مثقف في المختبر لتتكاثر من دون التوصل إلى التمايز، كما يتضح من التزام النسب التي يسببها لهم من الخلايا في العظام والغضاريف والدهون والأنسجة العضلية ، وكذلك في الخلايا العظمية وعناصر سداسية دعم تكون الدم. عادة، والتعرض المستمر في مستنبت مع مصل العجل الجنين يثير اللجان الدائمة الانتاج في انسجة الخلايا الاصلية الملتزمة، وسلالة الذي يخضع التمايز النهائي من تلقاء أنفسهم. في المختبر من الممكن تحقيق تشكيل العظمية الاتجاه عن طريق إضافة إلى حمض المتوسط ديكساميثازون تكييف، ß-سكرولي والاسكوربيك، في حين أن مزيج من التمايز يشير ديكساميثازون والانسولين الحث على تشكيل الخلايا الشحمية.

أنشئت أنه قبل الدخول في مرحلة التمايز النهائي من نخاع العظام اللجان الدائمة لخلق ظروف ثقافة معينة تميز في البداية إلى الخلايا الجذعية الوسيطة مثل الخلايا الليفية. مشتقات هذه الخلايا في الجسم الحي يشاركون في تشكيل العظام والغضاريف والأوتار والدهون والأنسجة العضلية وكذلك دعم انسجة الدم. العديد من الكتاب على فهم مصطلح "الخلايا الاصلية الوسيطة متعددة القدرات" كما في الواقع اللجان الدائمة، وملتزمة خلايا انسجة السلف والأنسجة الوسيطة نخاع العظام. وأظهر تحليل نسيلي من الخلايا الاصلية متعددة القدرات الوسيطة من أصل نخاع العظام الذي يزيد قليلا عن ثلث الحيوانات المستنسخة متباينة في osteo-، hondro- والخلايا الشحمية، في حين أن خلايا الحيوانات المستنسخة أخرى لديها إمكانات المكونة للعظم وشكل hondro- وخلية عظمية فقط. هذا استنساخ خلايا السلائف الوسيطة متعددة القدرات كما اللولب-9، في ظل ظروف مناسبة المكروية متباينة في الخلايا مع النمط الظاهري والوظيفية الخصائص ليس فقط من بانيات، غضروفية وpotsitov أديك ولكن الخلايا اللحمية التي تدعم الدم. عزل من خلايا نخاع العظام في الفئران الجنينية استنساخ RCJ3.1 متباينة خلايا اللحمة المتوسطة من الظواهر المختلفة. بواسطة العمل المشترك من حامض الاسكوربيك، ب سكرولي، وديكساميثازون من العناصر الخلوية من هذا استنساخ يتم تشكيل أول myocytes متعددة النوى وبعد ذلك، على التوالي، الخلايا الشحمية، غضروفية والجزر العظام المعدنية. السكان الخلايا الحبيبية من السمحاق من أجنة الفئران يتوافق مع الخلايا الاولية الوسيطة متعددة القدرات غير ملتزم بها، كما تتميز انخفاض معدل انتشار الأسلحة النووية، لا يعبر عن علامات التمايز، ومتباينة في ظروف ثقافة لتشكيل hondro-، osteo- والخلايا الشحمية وخلايا العضلات الملساء.

وبالتالي، ينبغي الاعتراف بأن مسألة الجينوم plyuri- أو multipotency الخلايا الجذعية الوسيطة لا يزال مفتوحا، مما يؤثر بالتالي على عرض إمكانات تمايز الخلايا السلف اللحمية، التي هي أيضا غير مثبتة تماما.

ثبت بالتجربة والخصائص الهامة للخلايا الجذعية الوسيطة هي قدرتها على ترك مكانه الأنسجة، ويقوم بتعميمها في التداول العام. لتفعيل البرنامج الوراثي للتمايز ، يجب أن تقع هذه الخلايا الجذعية الدائرية في البيئة المكروية المناسبة. ويظهر أنه عندما تدار بشكل منتظم إلى مجرى الدم الحيوانات المتلقي اللجان الدائمة غير ناضجة الخلايا المزروعة في الأجهزة والأنسجة المختلفة، ثم متباينة في خلايا الدم، myocytes، الخلايا الشحمية، غضروفية، والخلايا الليفية. ونتيجة لذلك، في مجالات النسيج المحلية يحدث التفاعل إشارة التنظيمي للخلايا انسجة السلف ملتزمة وغير ملتزم، وكذلك بينها وبين خلايا ناضجة المحيطة بها. ومن المفترض أن تحريض التمايز ويتم العوامل نظير الصماوي التنظيمية المنشأ الوسيطة وnemezenhimalnogo (عوامل النمو، إيكوزانويد، جزيئات المصفوفة خارج الخلية) التي توفر العلاقات المكانية والزمانية في المكروية من الأسلاف الوسيطة multipotential. لذلك، يجب أن الضرر المحلي من الأنسجة الوسيطة يؤدي إلى تشكيل مناطق متعددة القدرات المكروية خلايا السلائف الوسيطة تختلف نوعيا عن الإشارات التنظيمية المعقدة أنسجة سليمة في العمليات الفسيولوجية التي تحدث بدلا من تجديد الترميمي. هذا التمييز أمر بالغ الأهمية من حيث الخبرة في النمط الظاهري خلية في الضرر العادي والتي يسببها لالمكروية.

وفقا للأفكار ، فمن هنا وضعت آليات الاختلاف الأساسي في عمليتين معروفتين - التجدد الفسيولوجي والانتشار التهديدي. وينتهي أولهما باستعادة تكوين الأنسجة الخلوية المتخصصة ووظائفها ، في حين أن نتيجة عملية الانتشار هي تكوين عناصر النسيج الضام الناضج وفقدان وظيفة منطقة الأنسجة المتضررة. وبالتالي ، من أجل تطوير البرامج المثلى لاستخدام الخلايا السلفية متعددة الوسيطة في الطب التجديدي البلاستيكي ، من الضروري دراسة متأنية لخصائص تأثير عوامل البيئة الدقيقة على تمايز MSCs.

اعتماد مقصورة بنية الخلايا الجذعية من para- خلية والمنظمين autocrine الذي هو منظم بواسطة إشارات خارجية التعبير، ليس لأحد يدع مجالا للشك. ومن أهم وظائف من العوامل التنظيمية واللجان الدائمة السيطرة تقسيم غير المتماثلة والتعبير عن الجينات تحديد التزام النسب خطوة وعدد من انقسامات الخلية. يتم توفير الإشارات الخارجية ، التي يعتمد عليها تطوير MSC ، من خلال البيئة المكروية. في اللجان الدائمة غير الناضجة لتتكاثر فترة طويلة بما فيه الكفاية، مع الحفاظ على القدرة على التمايز إلى خط الخلايا الشحمية، myofibroblasts، دموية المنشأ الأنسجة اللحمية، وخلايا الغضروف والعظام. تبين أن عدد سكانها المحدود تعميم عناصر خلية انسجة SB34 سلبية من التداول العام وعاد إلى الأنسجة سدى نخاع العظام، ويتحول إلى خط حيث-CD34 إيجابي الخلايا الجذعية المكونة للدم. وتشير هذه الملاحظات أن خلايا اللحمة المتوسطة تدوير السلف في مجرى الدم من الأنسجة توفر الدعم لتوازن الخلايا الجذعية اللحمية في مختلف الأجهزة من خلال تعبئة مجموعة مشتركة من العظام غير ناضجة خلايا نخاع اللحمية. التفريق بين اللجان الدائمة في الخلايا مع الظواهر الوسيطة المتعددة ومشاركتها في إصلاح أو تجديد العظام والغضاريف والأوتار والأنسجة الدهنية في الجسم الحي يتضح من النماذج نقل بالتبني في حيوانات التجارب. وفقا لمؤلفين آخرين، يتم الجمع بين الهجرة البعيدة من اللجان الدائمة السرير الوعائي مع تشريد المحلي أو خلايا اللحمة المتوسطة السلائف متعددة القدرات korotkodistantnym داخل الأنسجة في غضروف إصلاح، وتجديد العضلات، وردود الفعل تخفيض الأخرى.

الاحتياطيات المحلية تنبع أسس الأنسجة اللحمية تلعب دورا مصدر من الخلايا في عمليات تجديد الأنسجة الفسيولوجية وتتجدد من قبل اللجان الدائمة النقل البعيدة كما الانفاق انسجة الموارد الجذعية الأنسجة. ومع ذلك، في حاجة إلى تعبئة الطوارئ من قدرة تعويضية الخلوية، مثل الصدمة متعددة، في عمليات تعويضية للتجديد تشارك اللجان الدائمة كامل القطار، والمحيط من خلال مجرى الدم تجنيد خلايا السلائف الوسيطة من نخاع العظام.

زرع الخلايا الجذعية الوسيطة

هناك بعض أوجه الشبه بين عمليات التجديد الفسيولوجي للأنسجة وتكوينها خلال فترة تطور داخل الرحم. في مرحلة التطور الجنيني للإنسان والثدييات، وتشكيل لأنواع مختلفة من الخلايا المتخصصة المستمدة من ecto والمتوسط والأديم الباطن الجرثومية تجمع طبقات، ولكن بمشاركة إلزامية من اللحمة المتوسطة. شبكة خلية فضفاضة الأنسجة الوسيطة الجنين ينفذ العديد التنظيمي، التمثيل الغذائي، الهيكل العظمي وظائف التخلق. ويتم مرجعية الهيئات الوقتي إلا بعد اللحمة المتوسطة التكثيف على حساب النمو مولد الرمع الخلايا الاولية التي تولد إشارات الأساسي تخلقية توالد. انسجة المستمدة اللحمة المتوسطة الجنينية خلق هيئات الوقتي سقالة وتشكل أساسا لمستقبل energoplasticheskogo ضمان نتيجة لنمو الأوعية الدموية الابتدائي والأوعية اللمفاوية. بعبارة أخرى ، تظهر العناصر اللحمية للوحدة الدقيقة الأوعية الدقيقة للأعضاء الجنينية قبل تشكيل وحداتها البنيوية الوظيفية. وبالإضافة إلى ذلك، والهجرة نشطة من خلايا اللحمة المتوسطة خلال توالد يوفر التوجه المكاني تطوير أجهزة بسبب بمناسبة حدودها من حيث الحجم تقييد مثلية هوكس-tepov. على انسجة يحدث الهيكل العظمي وتجميع الوحدات البنيوية والوظيفية للأجهزة متني، والتي غالبا ما تتضمن morphogenetically وخلايا وظيفيا مختلفة جدا. ونتيجة لذلك، في مرحلة التطور الجنيني اللحمة المتوسطة هي الوظيفة الأساسية وتنفيذها عن طريق توليد الإشارات التنظيمية تفعيل انتشار السلف الإقليمي وتمايز الخلايا الظهارية. خلايا اللحمة المتوسطة الجنينية تنتج عوامل النمو مثل القدمين، HGF-ب، CSF، والتي توجد المقابلة المستقبلات على خلايا متني السلف. الأنسجة متباينة ناضجة لشبكة خلية انسجة الكائن الكبار يولد أيضا إشارات للحفاظ على سلامة وانتشار الخلايا الاصلية nemezenhimalnogo المنشأ. ومع ذلك، فإن الإشارات التنظيمية الطيف اللحمية في ما بعد الولادة ontogenesis الأخرى (SCF، HGF، IL-6، IL-1، IL-8، IL-11، IL-12، IL-14، IL-15، GM-CSF، FLT-3، LIF ، وما إلى ذلك) ويهدف إلى توفير التجديد الفسيولوجي أو إصلاح المناطق الأنسجة التالفة. علاوة على ذلك ، تختلف الخصائص الطيفية للعوامل التنظيمية اللحمية في كل نوع من الأنسجة وحتى داخل نفس العضو. في معين، تكون الدم واللمفاويات لتكاثر وتمايز للدم والخلايا مناعيا يحدث فقط في بعض الأجهزة، ضمن الذي يعمل المكروية انسجة توفير الظروف لنضوج الخلايا المكونة للدم واللمفاوية. والأمر متروك للعوامل التنظيمية المكروية تعتمد على قدرة الخلايا المكونة للدم واللمفاوية لإعادة ملء الجسم لتتكاثر وتنضج في منافذ لها المجهرية.

بين مكونات المصفوفة خارج الخلية، والتي تنتج خلايا اللحمة المتوسطة السلائف متعددة القدرات، تجدر الإشارة إلى فبرونيكتين، laminin، والكولاجين والبروتيوغليكان، فضلا عن CD44 (hyaluronan ومستقبلات osteopontin) تلقي الجزء الرئيسي في تنظيم التفاعل بين الخلايا وتشكيل المصفوفة خارج الخلية في نخاع العظام والعظام . ثبت أن نخاع العظام الوسيطة، وخلايا متعددة القدرات خلق redshestvenniki المكروية اللحمية، وتوفير إشارات الاستقرائي والتنظيمية ليس فقط MSC، ولكن أيضا السلائف المكونة للدم وnemezenhimalnye العظام خلايا نخاع الجذعية. ومن المعروف أن اللجان الدائمة المعنية في الدم تقاس قدرتها على التمايز إلى خلايا انسجة التي تدعم الدم، حيث النشطة إشارة MSK التوجيه التي تم الحصول عليها مباشرة من الخلايا الجذعية المكونة للدم. هذا هو السبب في ثقافة خلايا انسجة السلف الشبكة أساسا لتغذية جميع الحيوانات المستنسخة من الخلايا المكونة للدم.

في كثافة الكائنات الحية الناضجة تصفية الدم واللمفاويات في حالة توازن ديناميكي مع "الإنفاق" من خلايا الدم الناضجة وخلايا جهاز المناعة في الهامش. منذ خلايا انسجة نخاع العظام وأجهزة اللمفاوية نادرا ما تحديثها، وهياكل هامة إعادة هيكلة انسجة لا يحدث فيها. تجعل نظام توازن ديناميكي ممكن مع مساعدة من التلف الميكانيكي إلى أي أجهزة HEMO أو اللمفاويات، الأمر الذي يؤدي إلى نفس النوع من التغييرات متتابعة التي تؤثر ليس فقط وليس ذلك بكثير من للدم أو اللمفاوية الخلايا، كما هياكل انسجة تضررت الجهاز. في عملية تجديد الإطار انسجة شكلت أساسا الترميمي، والتي ثم إعادة إسكانها المكونة للدم أو الخلايا المناعية. هذه حقيقة معروفة منذ فترة طويلة يجعل تجديد ما بعد الصدمة نموذج مناسب لدراسة المكروية انسجة من أعضاء تكوين الدم. على وجه الخصوص، للتحقيق في تجديد الترميمي من نخاع العظام يستخدم الميكانيكية تفريغ تجويف النخاع من العظام الطويلة - كحت، مما يتيح لسرعة وفعالية الأنسجة المكونة للدم من حالة توازن ديناميكي. عند دراسة عملية تجديد الترميمي من المكونات المكونة للدم ونخاع انسجة العظام بعد إفراغ الميكانيكية من تجويف medullar من خنازير غينيا الساق وجدت أن ما بين مؤشرات تجديد الخلايا المكونة للدم واللحمية (عدد الخلايا المكونة للدم، وتركيز وكمية من الخلايا اللحمية السلف) لا توجد علاقة مباشرة. وبالإضافة إلى ذلك، تبين أن الزيادة في عدد السكان من الخلايا الاصلية اللحمية يحدث في وقت مبكر بعد كحت، وأنفسهم الليفية اللحمية وfosfatazopolozhitelnymi، التي هي من سمات الأنسجة المكونة للعظم. تأسست أيضا أن عملية كحت 3-5 العظام الطويلة تؤدي إلى نمو السكان خلية في نخاع العظام والعظام غير تشغيلها حتى في الطحال، والتي في خنازير غينيا ليست سوى جسد مكون اللمفاويات.

العمليات الصورة ربرتيف المورفولوجية في نخاع العظام kyuretirovannyh عظام الساق خنازير غينيا يتوافق عموما إلى البيانات الأدب التي تم الحصول عليها في التجارب على الحيوانات من الأنواع الأخرى، وديناميات التغيرات التي تحدث بعد إزالة الأنسجة المكونة للدم هي نفسها بالنسبة لجميع الأنواع والفرق يتعلق فقط المعلمات الوقت . شكليا يتم إفراغ إجراء المرحلة لاستعادة الدم في تجويف النخاع في العمليات المتعاقبة تنظيم تشكيل تجلط الدم الألياف الخشنة العظام، وارتشاف لها، من الجيوب وشبكي سدى تشكيل، الأمر الذي يزيد من إعادة إسكانها العناصر المكونة للدم. عدد الخلايا الاصلية المكونة للدم في النخاع العظمي زيادة عملية تجديد الأنسجة في زيادة موازية في المحتوى الخلايا الجذعية المكونة للدم.

غيراسيموف يو وآخرون (2001) مقارنة التغيرات التي طرأت على عدد من الخلايا المكونة للدم وكمية السلائف الخلية اللحمية في مراحل الفردية للعملية تجديد. وقد وجد أن التغيرات الكمية في خلايا نخاع العظام في kyuretirovannoy العظام مباريات ديناميات الخصائص المورفولوجية تجديد. تخفيض خلال الأيام الثلاثة الأولى من المحتوى خلية في الكتاب تجديد تنسب فقدان الخلايا المكونة للدم بسبب الآثار السلبية لالمكروية، مما يخلق أنسجة الشبكية تنمو في نخاع العظام المتبقية في الكردوس وفي الأخير إلى تشكيل عظمية بؤر وتلف الأوعية الدموية مع كحت. 7-12 رفع اليوم خلايا yaderosoderzhaschih ال تتزامن مع ظهور بؤر الفردية في مناطق انتشار الخلايا اللحمية المكونة للدم الدم النخاعي. في اليوم ال20 هناك أجزاء كبيرة من نخاع العظام مجدد والجيوب الأنفية متطورة، والذي يرافقه زيادة كبيرة في إجمالي عدد الخلايا. ومع ذلك، كان عدد من الخلايا المكونة للدم في هذه الفترة 68٪ من مستويات الرقابة. وهذا يتفق مع البيانات المنشورة سابقا تبين أن عدد الخلايا المكونة للدم بعد كحت يصل المعايير إلا بعد 35-40 يوما من العملية.

في فترة ما بعد الصدمة في وقت مبكر ، المصدر الخلوي الرئيسي لاستعادة تكون الدم هي العناصر الخلوية المحفوظة في الكشط. في المصطلحات اللاحقة ، فإن المصدر الرئيسي لتجديد نسيج نخاع العظام في النخاع العظمي هو الخلايا الجذعية ، وإعادة ملء المناطق اللحمية الحرة. وفيما يتعلق بفئات معينة من خلايا انسجة (البطانية، شبكي والمكونة للعظم)، ومصادر للتعليم في إعادة هيكلة تجويف النخاع، لا تزال غير واضحة. نتائج Yu.V. Gerasimova وآخرون (2001) أن في نخاع العظام المتبقية بعد تركيز خلية كحت من مستعمرة تشكيل الخلايا الليفية أعلى بكثير مما كانت عليه في نخاع العظم الطبيعي. يعتقد المؤلفون أنه مع كحت هو شطف انتقائية أكثر كثافة من الخلايا المكونة للدم مقارنة مع مستعمرة انسجة تشكيل خلايا التي تشارك في تكوين سدى ومتصلة بشكل أكبر مع جوهر الأساسية من الخلايا المكونة للدم.

ديناميات التغيرات في عدد الخلايا التي تشكل مستعمرات الخلايا الليفية يرتبط مع كثافة العمليات تكون العظم لاحق التربيقي ارتشاف العظام وتشكيل شبكي سدى التي ملء الخلايا المكونة للدم. معظم خلايا انسجة السلف في هذه الشروط تجديد يشكل الخشنة فيبيريد أنسجة العظام وسدى شبكي. لكسور العظام الفخذ في ظروف تثبيت طرفي العظم لفترات طويلة في اليوم 5TH في منطقة تجديد يزيد من تركيز الخلايا وعدد من مستعمرة تشكيل الخلايا الليفية، وتكوين العظام في مكثفة وارتفع عددها بواقع 6 مرات. من المعروف أن خلايا نخاع العظم التي تشكل مستعمرات ليفية تمتلك خصائص عظمية. يزيد عدد خلايا انسجة السلف قبل أن يستقر الخلايا المكونة للدم نخاع العظام الأراضي kyuretirovannogo. وهذا يتفق مع النتيجة التي مفادها أن تشكيل خلايا انسجة توفر للدم المكروية. ومن الواضح أن خلق المكروية للدم يتوافق مع مستوى معين من تجديد الأنسجة اللحمية، ويزيد من عدد الخلايا المكونة للدم على انسجة التوسع العبور مناسبة لتكون الدم.

الأكثر أهمية هي بيانات المؤلفين التي مباشرة بعد curettage عدد الخلايا السلفي stromal في الأجزاء البعيدة من الهيكل العظمي يزيد. بدءا من الساعة السادسة، ويوما بعد يوم العشرين بما في الساق المقابل لوحظ في أكثر من اثنين أضعاف الزيادة في تركيز وعدد الخلايا التي تشكل مستعمرات الخلايا الليفية. آلية هذه الظاهرة ربما يرتبط مع حقيقة أن إصابة نخاع العظام ضخمة مما أدى إلى تشكيل عدد كبير من جلطات الدم بينما هو يدمر في وقت واحد عدد كبير من الصفائح الدموية وإطلاقها في الدم عامل النمو المشتق من الصفيحات (RBSK)، والذي يعرف أن يسبب انتشار الخلايا تشكيل المستعمرات الخلايا الليفية الموجودة في الجسم خارج تجمع التكاثري. في التجارب على الأرانب الإدارة المحلية اللجان الدائمة تعزز استعادة الغضاريف التالفة جراحيا في الركبة، والتي يمكن أن تترافق مع تشكيل غضروفية المستمدة من اللجان الدائمة قدم. ومع ذلك تجديد الترميمي من عيوب العظام في الفئران المختبرية ومما يعزز بشكل كبير عند استخدام الخلايا الجذعية الوسيطة المغلقة في إطار السيراميك. ولذلك، يمكننا أن نفترض أنه إذا كنت لا RBOK، ثم أي عامل آخر، والمستمدة من الخلايا اللحمية التالفة، له تأثير تحفيز بعيد على انتشار الخلايا الاصلية الوسيطة في المناطق لا تزال سليمة من نخاع العظام ويحفز هجرتهم إلى منطقة الأنسجة نخاع عيب العظام. بدوره، وهذا يتعارض مع البيانات الأدب في السنوات السابقة، مشيرا إلى أن الخلايا اللحمية هي المسؤولة عن المكروية، على عكس الخلايا المكونة للدم ليست قادرة على الهجرة، وتأتي من مصادر محلية.

ومع ذلك، فإن نتائج الدراسة غيراسيموف يو وآخرون (2001) تشير إلى أن تطبيق الصدمة الميكانيكية يسبب ليس فقط إعادة هيكلة حادة من الأنسجة اللحمية في العظام kyuretirovannoy، ولكن أيضا تغييرات كبيرة في سدى العظام البعيدة سليمة، وهذا هو، وجود استجابة النظامية الأنسجة اللحمية للصدمة المحلية. وعندما يطبق الإصابات المتعددة - كحت متعددة - يتم تضخيمه رد الفعل هذا، ولاحظ ليس فقط في العظام تشغيلها وأجزاء بعيدة من الهيكل العظمي، ولكن أيضا في الأجهزة اللمفاوية، ولا سيما الطحال. آلية مثل هذه الاستجابة النظامية من الأنسجة اللحمية ونخاع العظم الطحال إلى الصدمة المحلية وتعدد الأطوار لا تزال مجهولة. ومن المفترض أن هذه العملية مرتبطة عمل عامل الخلطية صدر سدى الوسيطة النخاع العظمي نخاع تجويف. إمكانية صنع خلايا انسجة نخاع العظم والطحال organonespetsificheskogo عامل الخلطية مسؤولة عن تكاثر الخلايا، مستعمرة تشكيل الخلايا الليفية وتشير البيانات عن مستعمرتهم تحفيز النشاط في الثقافات أحادي الطبقة من نخاع العظام.

وفي هذا الصدد، تجدر الإشارة إلى أنه عندما تدار خلايا السلائف الوسيطة متعددة القدرات للنظام إعادة إسكانها مشتقاتها ليس فقط نخاع العظم، ولكن أيضا الأنسجة الأخرى، التي يتم استخدامها، وخاصة للعلاج بالجينات. وتبين أن بعد الحقن الوريدي كميات كبيرة من اللجان الدائمة مع جينوم البرية من نوع الفئران بخلايا الكولاجين متحولة مورثة I المانحة استبدال ما يصل إلى 30٪ من الخلايا في العظام والغضاريف أنسجة المتلقي، وtransfected الوسيطة خلايا فأر الجذعية إفراز IL-3 البشرية، لمدة 9 أشهر دعم فعال الدم في حالة الإدارة في وقت واحد مع الخلايا الجذعية المكونة للدم الإنسان في الفئران العوز المناعي.

[5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14]

التعديل الوراثي للخلايا الجذعية الوسيطة

وتجدر الإشارة إلى نجاح التجربة إضافي من التعديل الوراثي اللجان الدائمة ترنسفكأيشن العامل التاسع الجينات في اللجان الدائمة الإنسان يليه نقل خلية transfectants الفئران العوز المناعي، الأمر الذي يؤدي إلى ظهور في الدم العامل المضاد للناعور B أكثر من 8 أسابيع بعد الزرع. في هذه التجربة، تم تنفيذ الخلايا transfected من التعديل بعد متعدية للعامل IX ص غلوتاميل كربوكسيلاز. تنبيغ من اللجان الدائمة مع فيروسات ترميز ناقلات العامل البشري IX، كانت أقل نجاحا - مقدمة لاحق من هذه الخلايا مع الكلب الهيموفيليا في مستوى العلاجي للعامل التاسع، الذي يدعم العادي الارقاء كثافة التخثر، فقط لمدة 12 أيام.

وقد أظهرت زرع الخلايا الجذعية الوسيطة في لحمة الدماغ من الحيوانات التي المانحة تحويل خلايا غير ناضجة في عدد السكان الخلايا العصبية والدبقية. Engraftment المشتقات العصبية متبرع سليم الأنسجة الوسيطة نظريا يجعل من الممكن تصحيح خلل وراثي في استقلاب الدماغ في المرضى الذين يعانون من مرض جوشر وغيرها من اضطرابات استقلاب الشحوم، والكربوهيدرات أو gangliosides.

استمرار التجريبية شروط البحث transdifferentiation الخلايا الجذعية في نخاع العظم خلايا انسجة السلائف في النسيج العصبي والكبد. يتركز انتباه الباحثين على مجموعات من محرضات الاختلاف ووسائط تكييف خاصة. على وجه الخصوص، لعزل ثقافة الأولية مع 10٪ مصل العجل الجنين، وخلايا نخاع العظام انسجة غسلها ومعلق في DMEM / F12 مستنبت (1/1) والمصنف في مناطق ذات كثافة من 200000 / CM2. بعد 24 ساعة، وإزالة الخلايا غير ملتصق وتعلق على الخلايا الليفية البلاستيكية هي تربيتها لمدة أسبوع. لتمايز الخلايا اللحمية نخاع العظم لneuroblasts تستخدم المتوسطة مكيفة الحصول عليها عن طريق زراعة ثقافة لمدة ثلاثة أيام من الماوس الأساسي الليفية الجنينية، وكذلك بين DMEM / F12 (1/1) مع 2٪ مصل العجل الجنين وتستكمل مع 20 نانوغرام / مل أو 10-6 M ليف حمض الريتينويك (neyroinduktory التي يتم تطبيقها على التمايز العصبي من الماوس الجنينية الخلايا الجذعية والبشرية). وكان المستحث تمايز خلايا نخاع العظام اللحمية في الخلايا الاصلية في خلايا الكبد بيئة مكيفة تم إنشاؤها نتيجة لمدة ثلاثة أيام زرع ثقافة الأولية من خلايا فأر الكبد الجنينية في DMEM / F12 (1/1) تستكمل المتوسطة مع 10٪ مصل العجل الجنين.

هنا يجب مجددا الإشارة إلى أن مستعمرة تشكيل خلايا انسجة نخاع العظم مغاير الشكل ويمكن تقسيمها إلى نوعين. ويشمل النوع الأول تشكيل الخلايا الليفية أرجل كاذبة خيطية الخلية مع نواة كبيرة واحد أو اثنين من نويات. النوع الثاني هو عبارة عن خلايا صغيرة ذات شكل مغزلي. في كلا النوعين من ثقافة خلية في المتوسط مكيفة الحصول على طبقة المغذية من الماوس الأساسي الليفية الجنينية، وفي اليوم-Z 4-ال الخلايا الثقافة تظهر مشابهة لneuroblasts. في هذه المرحلة غالباً ما يكون لديهم شكل مغزلي الشكل بواحدة أو مرحلتين طويلتين تنتهيان بالأصابع اللولبية. تكون الخلايا الهرمية أو النجمية ذات التشبعات القصيرة أقل شيوعًا. التشعبات واحد neuroblasts يكون التوسع نموذجي (النمو الكلى) والمتفرعة في الجزء الخاص بها القاصي، والآخر - مع متميزة مخاريط النمو أرجل كاذبة خيطية، التي من خلالها يحدث نمو التغصنات. يتم وصف ميزات مشابهة المورفولوجية (مخاريط النمو الكلى وأرجل كاذبة خيطية أ) العصبية الكامنة، تفرق في الخلايا العصبية، بالتفصيل في الأوراق التي الخلايا العصبية. على هذا الأساس ، يستنتج بعض المؤلفين أن الخلايا التي يكتشفونها في الثقافة هي الخلايا العصبية neuroblasts. على وجه الخصوص، وجد Schegelskaya E. وآخرون (2002)، بعد ثقافة الرئيسي لخلايا انسجة تربيتها لمدة أسبوعين في استبدال في كل المتوسطة مكيفة Z-و4TH اليوم هذا الجزء من الخلايا المتكاثرة، والإبقاء على حالة غير متمايزة. خارجيا، تشبه هذه الخلايا الليفية، وحددت في الثقافة جنبا إلى جنب مع neuroblasts تمييز. كانت معظم الخلايا (حوالي 80٪) في مراحل مختلفة من التمايز إلى خلايا النسيج العصبي ، وبشكل رئيسي في الخلايا العصبية. عمليات شجيري من هذه الخلايا على اتصال وثيق مع بعضها البعض، بحيث تدريجيا خلايا شكلت على الشبكة العصبية أجزاء الركيزة في شكل سلاسل طويلة متعددة الخلايا. نمت العمليات التغصنية من الأرومة العصبية لفترة أطول ، بعضها 8-10 مرات أعلى من طول جسم الخلية العصبية نفسها. تدريجيا ارتفعت نسبة الخلايا الهرمية والنجمية. تشعبت من الخلايا النجمية متفرعة. ووفقا للمؤلفين، والتمايز في وقت لاحق من الخلايا الهرمية والنجمية مقارنة مع يتوافق ضعيف لتسلسل المراحل العادية لتكوين الخلايا العصبية في الحيوانات. ونتيجة لذلك، خلص الباحثون أن الخلايا الجذعية من خلايا انسجة نخاع العظم والخلايا العصبية التي يسببها يتعرض فيه عملية في المختبر neuroblasts المتولدة من كل ثلاثة أنواع رئيسية من الخلايا العصبية. تم العثور على السلائف الخلايا العصبية أيضا في ثقافة خلايا انسجة نخاع العظم لمدة 3-4 أيام في المتوسط مع مصل الجنين بنسبة 2٪ و 20 نانوغرام / مل LIF. ولكن في هذه الحالة، تم تقسيم الخلايا الجذعية ببطء شديد، والتفريق بين neuroblasts يحدث فقط في 30٪ من الحالات، وأنها لا تشكل الشبكات العصبية. وذلك باستخدام الخلايا العصبية المحرضات التمايز حمض الريتينويك، والكتاب تم الحصول عليها في ثقافة إلى 25-30٪ من الخلايا العصبية مع غلبة الخلايا الدبقية - النجمية و oligodendrocytes. وكانت الخلايا العصبية فقط ثلث جميع الخلايا العصبية، على الرغم من أنها قدمت كل أنواع ثلاثة: مغزلي، هرمي والنجمية الخلايا. في اليوم 6TH خلايا انسجة زراعة في الخلايا العصبية المتوسطة حمض الريتينويك أصبح أكثر متباينة، في حين تم العثور على المحاور الفردية من الخلايا العصبية الهرمية أنه في neuroontogenesis طبيعية تظهر تشكيل لاحق للعمليات الجذعية. ووفقا للمؤلفين، على الرغم من العائد المنخفض من الخلايا العصبية، وطريقة حمل حمض الريتينويك مزاياه: الخلايا النجمية و oligodendrocytes وmyelinating تشغيل وظائف تغذية خلال نمو محاور عصبية والتشعبات والتي تكون ضرورية لتكوين الأنسجة العصبية العادي. لذلك ، لإصلاح المواقع التالفة في الجسم الحي ، فمن الأفضل استخدام تعليق الخلايا العصبية المخصب مع الخلايا الدبقية.

في السلسلة الثانية من التجارب ، حاول الباحثون تحفيز التمايز لخلايا انسجة نخاع العظام في خلايا الكبد. بعد ثقافة لمدة ثلاثة أيام من نخاع العظم خلايا انسجة الجذعية في المتوسط مكيفة الحصول عليها عن طريق احتضان الماوس خلايا الكبد الجنينية، تم العثور كبيرة، وخلايا على شكل كروي، وغالبا النووية اثنين، مشتملات ذات أحجام مختلفة. كانت هذه الخلايا في مراحل مختلفة من التمايز واختلفت في الحجم ، وعدد النوى والتضمينات في السيتوبلازم. في تم الكشف عن معظم هذه الخلايا الجليكوجين، حيث حددنا لهم كما الخلايا الكبدية السلائف. منذ الثقافة تم الكشف عن أي خلايا مماثلة لneuroblasts، تليها الاستنتاج أنه في المتوسط مكيفة الحصول عليها عن طريق زراعة خلايا الكبد الجنينية، لا توجد عوامل التفريق بين الخلايا العصبية، وعلى العكس، هناك عوامل التي تحفز على تمايز الخلايا اللحمية نخاع العظم في الخلايا الاولية من خلايا الكبد . ويقترح المؤلفان وجود الخلايا المحفزة من سدى نخاع العظام، لأنها تفرق في المختبر إلى خلايا الأنسجة الكبدية أو العصبية اعتمادا على وسائل الإعلام الخاصة مكيفة، والمحاثات.

في بعض الأعمال ، فإن تمايز الخلايا السعفية لنخاع العظم في الخلايا العضلية ، وخلايا الغضروف والعظام والأنسجة العصبية تظهر بالفعل بشكل صحيح. هناك معلومات من بين خلايا النخاع العظمي هناك مجموعات من الخلايا الجذعية يمكن أن تفرق إلى خلايا كبدية. في ضوء هذه النتائج فوق التجريب في الفئران لا يزال من الممكن اعتبار تأكيد آخر من وجودها في خلايا نخاع العظام المحفزة الجذعية الوسيطة التي لها القدرة على التمايز إلى خلايا الأنسجة المختلفة للكائن الحي الكبار.

زرع الخلايا الجذعية الوسيطة

في زرع السريري من الخلايا الجذعية الوسيطة الإنسان يمكن أن تستخدم للتوسع الخلايا الجذعية المكونة للدم وذريتهم في وقت مبكر prekommitirovannyh. على وجه الخصوص، وإدخال الخلايا الجذعية المكونة للدم ذاتي ومرضى السرطان اللجان الدائمة بعد العلاج الكيميائي عن طريق عالية يسرع الانتعاش في العدلات والصفائح الدموية في الدم المحيطي. ذاتي وزرع خيفي الخلايا الجذعية الوسيطة المستخدمة لعلاج الورم النخاعي المتعدد، وفقر الدم اللاتنسجي، نقص الصفيحات عفوية - الأمراض المرتبطة الخلل الأساسي الأنسجة اللحمية المكونة للدم. كفاءة العلاج بالخلايا في الأمراض الدموية في كثير من الحالات المذكورة أعلاه، في حين أن إدخال انسجة والخلايا الجذعية مكونة للدم، والتي تتجلى تخفيض فترة النقاهة بعد العملية الجراحية، والدم، وانخفاض في عدد الوفيات الناجمة عن الخلايا السرطانية الإقليمية وتعميم غير انتقائية الدمار الذي يموت وخلايا المريض للدم في السلف الخاصة. اللجان الدائمة واعدة التطبيقات وغيرها من الخلايا الطليعية الوسيطة متعددة القدرات في الممارسة السريرية نظرا لسهولة النسبية للحصول على aspirates نخاع العظام، والتوسع في الثقافة وترنسفكأيشن من الجينات العلاجية. وبالتالي للتعويض عن عيوب الأنسجة المحلية يمكن استخدام زرع الخلايا المحلية تمهيدا الوسيطة متعددة القدرات وفي الخلل المنهجي من الأنسجة الأصلية الوسيطة ليس مستبعدا دخولها إلى الدورة الدموية العامة.

أكثر حذرا في حججهم لمؤلفي المصنفات التي يتم فيها تحليل وجهات نظر اللجان الدائمة لزرع النظامية المحلي والعلاج الجيني من وجهة نظر من خلايا انسجة البيولوجيا. ويعتبر نخاع العظام بعد الولادة تقليديا باعتبارها هيئة تتألف من نظامين الرئيسية من خطوط الخلايا المتميزة - في الواقع الأنسجة المكونة للدم والمرتبطة سدى الداعمة لها. ولذلك، نخاع العظم خلايا الجذعية الوسيطة تعتبر في الأصل فقط كمصدر للأساس انسجة لإنتاج العوامل التنظيمية المكروية للدم. ثم تحول انتباه الباحثين لدراسة دور اللجان الدائمة كمصدر للأنسجة الهيكل العظمي الجذعية. تشير أحدث البيانات إلى إمكانات غير متوقعة من التمايز لخلايا انسجة نخاع العظم مع تشكيل الأنسجة العصبية أو العضلية. وبعبارة أخرى، فإن الخلايا الجذعية الوسيطة يحمل transgermalnuyu اللدونة - القدرة على التمايز إلى أنواع الخلايا التي خلايا الأنسجة ظاهريا غير الأصلية. ومع ذلك، لا تزال بعض جوانب بيولوجيا خلايا انسجة نخاع العظم غير واضحة وغير محلولة في خطة البيولوجية العامة، وبشيء من التفصيل، بما في ذلك تحديد، والطبيعة، أصل وتطور وظيفة في العظام فيفو خلايا نخاع اللحمية وكذلك تمايز المحتملين يجوز المجراة سابقا وإمكانية الاستخدام العلاجي في الجسم الحي. البيانات على الفرص الكامنة في اللجان الدائمة، وكذلك نتائج الدراسات من إمكانات التجدد أخرى من الخلايا الجذعية، في تناقض حاد مع العقيدة أنشئت في علم الأحياء.

عندما تستزرع تحت ظروف منخفضة الكثافة ، تشكل خلايا انسجة نخاع العظام الجذعية مستعمرات متميزة ، كل منها عبارة عن مشتق لخلية سلائف واحدة. النسبة المئوية للالسلائف الخلية اللحمية في خلايا نخاع العظام الأنوية التي تحددها قدرتها على تشكيل مستعمرات يعتمد إلى حد كبير على الظروف والثقافة وأنواع من اللجان الدائمة الانتماء. على سبيل المثال، في القوارض للحصول على أكبر قدر ممكن من الخلايا الاصلية انسجة أمر ضروري للغاية في وجود ثقافة المغذية المشع من خلايا نخاع العظام والدم، في حين أن تشكيل مستعمرة كفاءة الخلايا الجذعية الوسيطة الإنسان مستقلة عن وحدة التغذية، أو من ثقافة المتوسط. عدد من العوامل mitogenic المعروفة تحفيز تكاثر الخلايا السلفي stromal محدودة. وتشمل هذه PDGF ، EGF ، FGF ، TGF-B ، وأيضا IGF1. تحت الظروف المثلى، زراعة اللجان الدائمة خطوط بولكلونل المحافظة في المختبر لأكثر من 50 انقسامات الخلية، مما يجعل من الممكن الحصول على المليارات من خلايا انسجة نخاع العظم من 1 مل من نضح ذلك.

ومع ذلك، فإن عدد سكان خلايا انسجة نخاع العظم هو غير المتجانسة، التي يتجلى التباين في الأحجام من المستعمرات، ونسبة مختلفة من تشكيل ومجموعة متنوعة من مورفولوجيا الخلايا، والذي يشمل مجموعة من المغزل تشبه الخلايا الليفية إلى خلايا مسطحة كبيرة. مع تطوير هذه المحاصيل بعد 20 يوما ، كما لوحظ عدم التجانس المظهري. يتميز جزءا من مستعمرة من قبل التعبير عال من الفوسفاتيز القلوية، والبعض الآخر لا تعبر عن ذلك، والمستعمرات نوع الثالثة وfosfatazopozitivnymi في المنطقة الوسطى وfosfatazonegativnymi على الهامش. المستعمرات الفردية تشكل عقيدات العظام (تمعدن بداية المصفوفة تميزت تلطيخ مع الصبغ الأحمر أو الكالسيوم فان كوسا). في مستعمرات أخرى ، تراكم الدهون يحدث ، التي حددها G- تلطيخ مع أحمر النفط. أقل في كثير من الأحيان في المستعمرات من الخلايا الجذعية الوسيطة تشكيل الغضاريف التي هي ملونة مع الأزرق الكايني).

بعد زرع خارج الرحم في حيوانات التجارب تشكل خطوط MGK بولكلونل سدى العظام خارج الرحم مع setchatoobraznoy المرتبطة تكون النقويات والخلايا الشحمية، وكذلك، ولكن نادرا ما، مع أنسجة الغضروف. في خطوط زرع وحيدة النسيلة من خلايا انسجة نخاع العظم في بعض الحالات هناك الخيمرية، حيث يتكون من جديد شكلت النسيج العظمي خلايا العظام، والخلايا الشحمية تضم سدى والجهات المانحة الأصل، في حين يتم اشتقاق خطوط الخلايا المكونة للدم من والأوعية الدموية من المستلم.

نتائج هذه الدراسات تؤكد الطبيعة الجذعية لسلسلة نقي العظم اللحمية ، والتي تم الحصول منها على الخط النسيلي. كما أنها تظهر في الوقت نفسه أنه ليس كل الاستنساخ في خلايا الاستزراع هي بالفعل خلايا جذعية متعددة. ويعتقد بعض الباحثين، ونحن نشاطر وجهة نظرهم، أن أدق المعلومات حول إمكانية حقيقية للتمايز من الحيوانات المستنسخة الفردية يمكن الحصول عليها الا في الجسم الحي بعد الزرع، بدلا من تحديد النمط الظاهري من مشتقاتها في المختبر. التعبير في علامات ثقافة المظهرية osteo- hondro- أو تكون الشحم (يحدده مرنا أو عبر تقنيات النسيجية)، وحتى إنتاج مصفوفة المعادن لا يعكس درجة من تعدد القدرات استنساخ واحد في الجسم الحي. ولذلك، فإن تحديد الخلايا الجذعية في مجموعة خلايا انسجة تكون متاحة فقط لاحقة، في ظل ظروف مناسبة زرع عينة بيولوجية. على وجه الخصوص، تكون الغضروف نادرا جدا ما لوحظ في النظم المفتوحة زرع، في حين أن تشكيل الغضروف ليس من غير المألوف في النظم المغلقة، مثل الغرف نشر أو في الثقافات mikromassnyh الخلايا اللحمية في المختبر، حيث بلغ انخفاض محليا توتر الأوكسجين، والمساهمة في تشكيل الغضروف. ولذلك، حتى تقنية زرع، وكذلك غير محددة في ظروف المختبر ثقافة تؤثر تأثيرا كبيرا على مجموعة من التفريق بين اللجان الدائمة.

الزرع التجريبي مع مراعاة الشروط التجريبية المعينة هو المعيار الذهبي لتحديد إمكانية التمايز لخلايا انسجة نخاع العظام والعنصر الرئيسي في تحديد هويتها. تاريخياً ، ترتبط دراسات زرع نخاع العظم في نخاع العظم بمشكلة زرع نخاع العظم الشائعة. وقد تبين أن يتم إنشاء المكروية للدم عن طريق زرع خطوط النخاعية خلايا انسجة وتوفر تنمية خارج الرحم من الأنسجة المكونة للدم في مجال زرع الأعضاء. إن منشأ البيئة المكروية من المتبرع والأنسجة المكونة للدم - من العائل يسمح لنا بمعالجة العظم خارج الرحم كزرع نخاع عظمي حقيقي "مقلوب". زرع الخلايا النخامية في نخاع العظام المحلية يعزز التصحيح الفعال للعيوب العظمية ، أكثر وضوحا من التجديد التعويضي العفوي. في العديد من الدراسات قبل السريرية في نماذج حيوانية ثبت بشكل مقنع إمكانية زرع خلايا انسجة النخاع العظمي في جراحة العظام، على الرغم من أن لتحسين هذه الأساليب، حتى في أبسط الحالات، يتطلب العمل الأكثر حذرا والتحليل. على وجه الخصوص ، لم يتم بعد تحديد الظروف المثلى لتوسيع الخلايا اللحمية العظمية المنشأ خارج الجسم الحي ، وتبقى بنية وتكوين الناقل المثالي غير مستخدمة ، وكذلك عدد الخلايا اللازمة لتجديد العظام بالجملة.

بالإضافة إلى تطبيق المجراة سابقا العظام خلايا نخاع انسجة نشر لتجديد الأنسجة الأصلية الوسيطة ليونة غير تقليدية MSC يفتح الاستخدام المحتمل لتجديد الخلايا العصبية، أو تسليم المنتجات الجينات في الجهاز العصبي المركزي. من حيث المبدأ ، هذا يبسط العلاج الخلوي في هزيمة الجهاز العصبي ، حيث لا توجد حاجة للحصول على خلايا جذعية ذاتية المنشأ من البشر. يقال عن إمكانات استخدام خلايا نخاع العظام لتوليد الخلايا العضلية والخلايا السلوية myogenic كأصل بثرى وخارجي حقا.

تجري التجارب على زرع نظامية لخلايا انسجة نخاع العظام لعلاج أمراض الهيكل العظمي الشائعة. لا شك في أن خلايا نخاع العظام اللحمية هي السكان مسؤولة عن الاضطرابات الوراثية في أمراض الهيكل العظمي، والتي يتضح أيضا عن طريق نقل ناقلات باستخدام المعلومات الوراثية للخلايا، مما يؤدي إلى تكوين أنسجة العظام المرضية في حيوانات التجارب. ومع ذلك ، فإن قدرة الخلايا اللحمية على الزرع والنمو والتكاثر والتمييز في عظام الهيكل العظمي بعد إدخالها في مجرى الدم العام لم يتم إثباتها بعد.

ويرجع هذا جزئيا إلى حقيقة أن الإجراء العادي من نخاع العظم سدى لا زرع الأنسجة المكونة للدم مع معايير صارمة جدا لتقييم engraftment الناجح لهذه للنظام إدارة حتى الآن لم يتم تطوير الخلايا اللحمية. وينبغي أن نتذكر أن وجود جينات علامة في مقتطفات الأنسجة أو الافراج عنه في ثقافة الخلايا المشتقة المانحة يشهد عدم engraftment من الخلايا، ولكن فقط عن بقائهم على قيد الحياة. حتى الحقن داخل الشريان من خلايا انسجة نخاع العظام في الطرف الماوس يمكن أن يؤدي إلى تقريبا نتيجة engraftment الصفر، على الرغم من أن توجد الخلايا المشتقة المانحة بأعداد كبيرة داخل الشبكة نخاع العظام الاوعية الدموية الدقيقة. لسوء الحظ ، عادة ما توصف هذه الخلايا بأنها "مغروسة" فقط على أساس نتائج تحديد الجينات المانحة للعلامات في ظل ظروف الثقافة الحية. بالإضافة إلى ذلك ، من الضروري توفير أدلة مقنعة على التكامل طويل الأجل في أنسجة الخلايا المتمايزة والمفعمة بالوظائف النشطة من أصل المانحين. في العديد من الأعمال المنشورة، والتي تفيد engraftment للخلايا انسجة نخاع العظام في الهيكل العظمي، ومن الملفت للنظر هو عدم وجود بيانات واضحة من هذا النوع. ومع ذلك ، تجدر الإشارة إلى أنه في بعض التجارب الصحيحة على الحيوانات ، ومع ذلك ، فإن engraftment محدودة ولكن حقيقية من الخلايا السلفي stromal بعد أن تم تأسيس الإدارة النظامية.

هذه البيانات تتسق مع نتائج دراسة إمكانية تقديم الخلايا العضلية لنخاع العظم العضلي إلى العضلات من خلال نظام الأوعية الدموية. ومع ذلك ، لا ينبغي أن ننسى أن كل من الأنسجة الهيكلية والعضلات تتشكل خلال النمو والنمو على أساس حركات الخلايا خارج الأوعية الدموية التي تستخدم عمليات الهجرة التي لا تنطوي على التداول في الدم. إذا كان هناك بالفعل مسار دوراني مستقل لتسليم الخلايا السليفة إلى أنسجة الطور الصلب ، فهل من الممكن السماح بوجود خلايا سلفيتية حميدة دائرية من الناحية الفيزيولوجية؟ ما هو أصل هذه الخلايا في كل من الكائنات الحية النامية وما بعد الولادة ، وكيف تخترق جدار الأوعية الدموية؟ إن حل هذه القضايا ضروري للغاية ويتطلب إجراء تحليل ما قبل السريري. حتى بعد العثور على إجابات لهذه الأسئلة ، تبقى الجوانب الحركية الإشكالية المرتبطة بنمو الهيكل العظمي وإعادة تشكيل النسيج الضام دون حل. وفي الوقت نفسه، فإن علاج اضطرابات تكوين العظام عن طريق استبدال السكان من الخلايا الاولية الهيكل العظمي تحور إلى عناصر اللحمية صحية تمثل وجهة نظر سريرية حقيقية. في هذه الحالة ، يمكن تصحيح المناطق المحلية من الكسر أو التشوه الناجم عن تكوين العظم المرضي ، وكذلك التغيرات المدمرة في أنسجة العظام ، عن طريق زرع الخلايا الجذعية في المختبر. لذلك ، ينبغي أن يركز اتجاه البحوث المستقبلية على مشاكل التحول أو تصحيح وراثي للخلايا السلفية المنشأ ذات المنشأ المتغير المنشأ.

الهندسة الوراثية للخلايا، بصفة مؤقتة أو دائمة، وأصبح أساس الخلية والبيولوجيا الجزيئية، ومصدرا للكثير من الاكتشافات العلمية حول دور البروتينات الفردية في الأيض الخلوي في المواد المختبرية والحية. استخدام التقنيات الجزيئية لتصحيح الأمراض الوراثية والأمراض التي تصيب الإنسان واعدة جدا للطب العملي، منذ خصائص انسجة العظام خلايا نخاع الجذعية سمحت لتطوير فريد الدوائر زرع لتصحيح الأمراض الوراثية من الهيكل العظمي. في هذه الحالة، يمكن الحصول على الخلايا الاصلية الوسيطة بسهولة تامة من المستلم في المستقبل، فهي قابلة للتلاعب الجيني وتكون قادرة على تربية بأعداد كبيرة في فترة قصيرة من الزمن. استخدام الخلايا الجذعية الوسيطة يتجنب القيود والمخاطر المرتبطة تسليم المواد المعلومات الجينية مباشرة للمريض من خلال بنيات ناقلات vrtrusnye. هذه الاستراتيجية هي التي تنطبق على بي الخلايا الجذعية الجنينية، ولكن بعد الولادة ذاتي خلايا انسجة نخاع العظام - مادة فضل لإدارتها تستثني مضاعفات posttransplantation المناعية المحتملة. من أجل تحقيق تأثير على المدى القصير، على سبيل المثال من أجل تسريع تجديد العظام، وطريقة الأمثل هو التعديل الوراثي للخلايا الجذعية الوسيطة باستخدام elektroporatsrsh، والانصهار الكيميائية، lipofection، البلازميدات ويبني الفيروسة الغدانية. على وجه الخصوص، كان ترنسفكأيشن فيروسية في خلايا انسجة نخاع العظم BMP-2 فعال في تسريع تجديد العظام في الإصابات المتعددة التجريبية. فضل خلق بنيات ناقلات الفيروسة الغدانية بسبب غياب سمية. ومع ذلك ، يتميز التعديل الوراثي لخلايا انسجة نخاع العظام في هذه الحالة باستقرار منخفض للغاية. وعلاوة على ذلك، تتطلب طبيعية خلايا نخاع العظام انسجة تحولت استخدام ناقلات ناقلات المعلومات الجينية 10 مرات أكثر عدوى من أنواع الخلايا الأخرى، مما يزيد بشكل كبير من نسبة وفاة الخلايا transfected.

لعلاج الأمراض المتنحية الناجمة عن انخفاض أو الصفر البيولوجي النشاط من الضروري تعديل لفترات طويلة أو دائمة من الخلايا الجذعية الوسيطة، الأمر الذي يتطلب استخدام الغدة المرتبطة الفيروسات، الفيروسات، lentiviruses والوهم-الغدة فيروسات جينات معينة. مواقع النقل لهذه الفيروسات قادرة على حمل ناقلات الدنا الكبيرة (حتى 8 كيلو بايت). الأدب العلمي وقد ظهرت بالفعل معلومات حول النشاط البيولوجي للخلايا الخارجية نخاع العظام انسجة transfected مع ثوابت فيروسات ترميز تركيب الجزيئات التنظيمية، وعلامات - IL-3، CD2، العامل الثامن، والأنزيمات المشاركة في تركيب L-دوبا. ولكن في هذه الأعمال يشير المؤلفون إلى عدد من القيود التي يجب التغلب عليها قبل أن يبدأ التطبيق العملي لهذه التكنولوجيا. تتمثل المشكلة الأولى في تحسين عملية تعديل MCK ex vivo. ومن المعروف أن على المدى الطويل (3-4 أسابيع) في انتشار المختبر من خلايا انسجة نخاع العظم يقلل transfected بهم. في نفس الوقت من أجل تحقيق مستوى عال من التعديل الوراثي من اللجان الدائمة هو ضروري لإجراء عدة دورات transfitsirovadiya. تتعلق المشكلة الثانية بمدة تعبير الجين العلاجي ، الذي لا يتجاوز بعد أربعة أشهر. يعود الانخفاض الطبيعي في التعبير الجيني الفعال إلى تعطيل المعززات وموت الخلايا المعدلة. في نقل آفاق عام في المعلومات الوراثية باستخدام الخلايا الجذعية الوسيطة نتائج الدراسات الأولية تشير إلى الحاجة إلى مزيد من التحسين من أساليب ترنسفكأيشن خارج الحي، واختيار المروج كاف تنظيم النشاط البيولوجي في الاتجاه الصحيح، وتعزيز قدرة خلايا نخاع انسجة العظام تعديلها لتجديد الذات في الجسم الحي بعد الزرع. وتجدر الإشارة إلى أن استخدام التركيبات فيروسات لتعديل خلايا انسجة نخاع العظام في الاتجاه المطلوب لا يتطلب دائما engraftment على إلزامية. Transfected الخلايا الجذعية الوسيطة يمكن أن تؤدي وظيفة تصحيحية على خلفية مستقرة والإقامة دون الحاجة إلى التأسيس المادي نشطة وفاعلة في النسيج الضام. في هذه الحالة، ينبغي اعتبار مصغرة مضخة البيولوجية، وتنتج في عامل الجسم الحي، وعدم وجود أي يحدد مظهر من مظاهر المرض الوراثي.

استخدام العظام خلايا نخاع انسجة حولت للعلاج من مرض وراثي المهيمنة التي تتميز بها التعبير عن الجينات أو غير طبيعي النشاط البيولوجي المرضية، أكثر إشكالية لأنه في هذه الحالة يكون من الضروري لمنع نقل أو بيع المعلومات الجينية مشوهة. واحدة من طرق الهندسة الوراثية - إعادة التركيب مثلي الخلايا الجذعية الجنينية لتوليد الحيوانات المعدلة وراثيا. ومع ذلك، فإن مستوى منخفض للغاية من المؤتلف مثلي، جنبا إلى جنب مع مشاكل الهوية، والفصل والتوسع في مثل هذه recombinants من غير المرجح أن تعزيز انتشار استخدام هذه التقنية في المستقبل القريب، حتى لو كان تطوير أساليب تكنولوجية جديدة. ويستند النهج الثاني إلى العلاج الجيني على المهيمن علم الأمراض التصحيح التلقائي للDNA التالفة التي قد تصحيح الطفرات الجينية التي كتبها إدخال الحمض النووي الخارجية مع تسلسل المطلوبة ([أليغنوكليوتيد DNA قصيرة، أو خيالية أليغنوكليوتيد] RNA / DNA) التي تربط لhomologs في الجينوم معطوب. يوفر تجسيد الثالث المرضية قفل نقل المعلومات الذي يتحقق من خلال استخدام أليغنوكليوتيد] صممت خصيصا الذي ربط جينات معينة لتشكيل بنية حلزونية الثلاثي، الذي يستبعد إمكانية النسخ.

على الرغم من أن تصحيح الأمراض الوراثية في مستوى الجينوم هو الأمثل والأسلوب العلاجي المفضل، مرنا أيضا ناقلات واعد (ربما حتى أكثر يسرا) لمنع الجين السلبي السائد. من أجل منع الترجمة و / أو زيادة تدهور مرنا وقد استخدمت لفترة طويلة مع جزيئات البروتين العقاقير متواليات النوكليوتيد أو حجب الكامل ملزمة مرنا جهاز السكروز من الخلية. بالإضافة إلى ذلك ، الحمض النووي الريبي المزدوج تقطعت بهم السبل يدفع تدهور سريع من مرنا ، والآلية التي لا تزال غير واضحة. ومع ذلك، فإنه من غير المحتمل أن مجرد إزالة مرنا كتب من أليل متحولة مع طفرات قصيرة أو واحدة من شأنها أن تعزز التعبير مرنا للأليل العادي. وبديل ذلك هو استخدام ribozinov المطرقة والقاسي، لديها القدرة على ربط مواقع محددة للغاية من مرنا مع تحريض لاحق من تفككها وتعطيل أثناء الترجمة. حاليا ، تجري دراسة إمكانية استخدام هذه الطريقة في علاج تكون العظم المرضي. بغض النظر عن ما هو بالضبط الهدف - العناصر الجينية أو حشوية نجاح تقنية العلاج الجيني الجديد سيتم تحديده من قبل كفاءة إدراج المواد الكيميائية في العظام خلايا نخاع انسجة الجسم الحي السابقين، والاختيار الأمثل للناقل معين، والقدرة مستقرة الخلايا الجذعية الوسيطة تعبير عن العوامل المطلوبة في الجسم الحي.

وبالتالي ، فإن اكتشاف الخلايا الجذعية الوسيطة ذات خصائصها غير المتوقعة يخلق مخططًا مفاهيميًا جديدًا لتطوير خطوط الخلايا. ولكن لكي نفهم الدور البيولوجي للخلايا انسجة الساق، طبيعتها، والقدرة على transdifferentiation أو فقد التمايز، أهمية الفسيولوجية في عملية التطور الجنيني والنمو بعد الولادة، والنضج والشيخوخة، وكذلك في الأمراض التي تصيب الإنسان تتطلب مزيد من البحوث متعددة التخصصات.