فحص الدم للأجسام المضادة لفيروس إبشتاين-بار للأجسام المضادة وفحص تفاعل البوليميراز المتسلسل: كيفية النجاح، والمعايير

يُطلق على الهربس عادةً اسم طفح جلدي مؤلم وقبيح المنظر على الوجه في منطقة الشفاه، والذي يُشكل قشورًا بنية اللون. للأسف، هذا ليس سوى أحد أشكال فيروس الهربس، والذي يُمكن أن يُصيب البشر بثمانية أشكال. ما نُسميه عادةً بالهربس هو فيروس النوع الأول، أو فيروس الهربس البسيط. يُسبب فيروس النوع الثاني الهربس التناسلي، ويُسبب النوع الثالث "جدري الماء" والقوباء المنطقية، ويُسبب النوع الرابع داء كثرة الوحيدات المعدية والعديد من الأمراض الخطيرة الأخرى، إلخ. يُمكننا متابعة هذه القائمة بمزيد من التفصيل، لكننا سنُركز على فيروس الهربس من النوع الرابع، المعروف أيضًا باسم فيروس إبشتاين بار. دعونا نحاول فهم ماهية فيروس الهربس من النوع الرابع، وأسباب خطورته، ومتى ولماذا يُجرى اختبار فيروس إبشتاين بار، وما الذي تُشير إليه نتائج الفحوصات المخبرية.

ما هو فيروس الهربس من النوع الرابع؟

وصف عالم الفيروسات الإنجليزي مايكل إبستاين فيروس الهربس من النوع الرابع، كأحد أنواع عدوى فيروس الهربس، قبل 53 عامًا. وقد استعان البروفيسور في عمله على هذا المشروع بطالبة الدراسات العليا إيفون بار. ويُنسب اسم الفيروس إلى هؤلاء الأشخاص. ومع ذلك، بعد 15 عامًا من اكتشافه، غُيّر اسمه العلمي إلى فيروس الهربس البشري من النوع الرابع، وقبل عام واحد سُمي الفيروس فيروس غاما البشري من النوع الرابع.

لكن ما هو فيروس إبشتاين بار ؟ كأي فيروس آخر، يتكون الفيريون (الجسيم الفيروسي) لفيروس الهربس من النوع الرابع من مادة وراثية (في هذه الحالة، الحمض النووي ثنائي السلسلة) وقشرة بروتينية محيطة به (غلاف). بالإضافة إلى ذلك، يُحاط الفيروس بغشاء يُسهّل عليه اختراق خلايا المضيف.

أي فيروس هو شكل غير خلوي، وهو عامل مُعدٍ ولا يمكنه التطور والتكاثر خارج خلايا الكائن الحي. تُعتبر الخلايا الظهارية للبلعوم الأنفي الموطن المفضل لفيروس الهربس من النوع الرابع. كما أنها لا تستهين بالكريات البيضاء، مُفضلةً أحد أنواعها، وهو الخلايا الليمفاوية البائية. تُشارك الخلايا البائية بفعالية في توفير الدفاع المناعي للجسم. عند ملامسة مستضد، وهو في حالتنا فيروس الهربس من النوع الرابع (أو بالأحرى مستضداته)، تُنتج الخلايا الليمفاوية البائية أجسامًا مضادة (بروتينات الغلوبولين المناعي). يمكن اكتشافها في دم المريض بإجراء تحليل لفيروس إبشتاين بار (EBV).

يحتوي فيروس الهربس من النوع الرابع على 4 مستضدات تظهر في تسلسل محدد بدقة:

• EA هو مستضد مبكر يظهر في المرحلة الأولية من المرض، عندما تكون الجسيمات الفيروسية في مرحلة التخليق (عدوى حادة أولية أو إعادة تنشيط فيروس كامن عندما تنخفض المناعة)،
• VCA هو مستضد غلافي موجود في الغلاف البروتيني وينتمي أيضًا إلى المراحل المبكرة، لأنه من الناحية السريرية قد لا يظهر المرض نفسه حتى في هذه الفترة،
• MA - مستضد الغشاء، يظهر عندما يكون الفيروس قد تشكل بالفعل،
• EBNA – المستضد النووي (الببتيد أو النووي) هو أحد المستضدات المتأخرة، حيث يمكن اكتشاف الأجسام المضادة له حتى بعد عدة أشهر من المرض وتبقى في الدم طوال الحياة.

فيروس الهربس من النوع الرابع خبيث للغاية. ولأنه غير نشط خارج الجسم الحي، فلا يمكن أن ينتقل إلا من الشخص الذي يُسبب العدوى. وليس من الضروري أن تظهر عليه جميع أعراض المرض؛ فقد تكون العدوى كامنة، متخفية في صورة تعب عادي. على سبيل المثال، ترتبط متلازمة التعب المزمن في معظم الحالات بفيروس إبشتاين بار.

يمكن العثور على أنواع محددة من الفيروسات في الدم واللعاب والحيوانات المنوية والإفرازات المهبلية وأنسجة أعضاء مختلفة. يمكن لجزيئات الفيروس، إلى جانب اللعاب والدم، أن تدخل إلى الأشياء المحيطة بنا، حيث تبقى خاملة حتى تدخل جسم الإنسان بطريقة ما. في الغالبية العظمى من الحالات، تحدث العدوى عن طريق الرذاذ المحمول جوًا أو عن طريق التلامس (بالتقبيل). ولكن من الممكن أيضًا انتقال الفيروس داخل الرحم من الأم إلى الجنين، والإصابة أثناء نقل الدم (إذا كان دم المتبرع يحتوي على فيروسات فيروسية)، والاتصال الجنسي.

بعد دخول المرض إلى الجسم واختراقه للخلايا، قد يستغرق ظهور أعراضه من 5 إلى 50 يومًا. ولكن قد لا يظهر المرض، بل يستمر في طور كامن، كما هو الحال في معظم الحالات.

نعم، وفقًا للأبحاث، أُصيب حوالي 90% من البالغين بعدوى الهربس المرتبطة بفيروس إبشتاين بار مرة واحدة على الأقل في حياتهم. معظم الناس لا يدركون ذلك لأن أجسامهم قادرة على مقاومة الهجوم الفيروسي. لكن هذا ليس الحال دائمًا.

كيف يظهر فيروس ابشتاين بار؟

في أغلب الأحيان، يتعين على الأطباء التعامل مع الأنواع التالية من عدوى فيروس الهربس من النوع الرابع في ممارستهم:

• الشكل المزمن (يحدث بعد المرحلة الحادة من المرض، ويظهر بعض الأعراض العامة للمرض)،
• الشكل الكامن أو المخفي (لا توجد أعراض، ولكن الفيروس يبقى نشطًا وينطلق في البيئة)،
• الشكل البطيء (أقل شيوعًا، تظهر الأعراض واحدة تلو الأخرى على مدى فترة طويلة، وتنتهي بوفاة المريض).

يُصاب الأشخاص بفيروس إبشتاين بار لأول مرة، خاصةً في مرحلتي الطفولة والمراهقة. ويصل معدل الإصابة إلى ذروته بين سن 14 و18 عامًا.

العدوى الفيروسية الأولية لها 3 أشكال مختلفة:

• بدون أعراض (لا توجد مظاهر سريرية)،
• الجهاز التنفسي (أعراض عدوى الجهاز التنفسي: الحمى، إفرازات الأنف، الضعف العام، وما إلى ذلك)،
• التهاب الغدة النكافية المعدي مع مجموعة ثلاثية من الأعراض الرئيسية: ارتفاع درجة الحرارة، علامات التهاب الحلق مع قشور صفراء على اللوزتين، تضخم الأعضاء مثل الكبد والطحال؛ هناك زيادة في مستوى كريات الدم البيضاء وتضخم الغدد الليمفاوية.

هناك عدة خيارات للخروج من المرحلة الحادة من المرض:

• الشفاء التام،
• تختفي أعراض المرض، لكن يبقى الفيروس في الجسم ويتطور، على الرغم من أنه لم يعد يؤدي إلى تغيرات ملحوظة في الخلايا (حالة الناقل)،
• لا توجد أعراض للمرض، ولا يخرج الفيروس من الجسم، ولكنه يظهر أيضًا نشاطًا ضئيلًا (الشكل الكامن)،
• إعادة تنشيط الفيروس من شكل كامن،
• مسار مزمن للعدوى (مع انتكاسات المرض، الشكل النشط المزمن، معمم مع تلف الأعضاء وأنظمة الجسم).

يمكن أن تكون نتيجة بقاء الفيروس في الجسم لفترة طويلة:

• الشكل المزمن لمرض وحيدات النوى المعدية.
• متلازمة البلعمة الدموية: حمى مستقرة، انخفاض مكونات الدم (زيادة القدرة على التخثر)، تضخم الكبد والطحال، نزيف الأغشية المخاطية، اليرقان (بسبب خلل في وظائف الكبد)، تضخم الغدد الليمفاوية، أعراض عصبية.
• الشكل الكامن مع تطور نقص المناعة الثانوي: ارتفاع الحرارة لفترة طويلة من الزمن، ضعف عام، تضخم وألم في الغدد الليمفاوية، آلام العضلات والمفاصل، الأمراض المعدية المتكررة.
• تطور الأمراض المناعية الذاتية على شكل الذئبة الحمامية والتهاب المفاصل الروماتويدي وغيرها.
• مظاهر متلازمة التعب المزمن مع تدهور الحالة العامة والأداء.
• شكل معمم من العدوى المزمنة مع تلف في الجهاز العصبي المركزي، وعضلة القلب، والكلى، والكبد، والرئتين.
• تطور الأمراض السرطانية (سرطان الدم الليمفاوي والأورام اللمفاوية)، حيث تُلاحظ زيادة مرضية في عدد خلايا الجهاز الليمفاوي. لا يُدمر فيروس الهربس من النوع الرابع الخلايا الحاملة للفيروس، بل يُجبرها على التكاثر بنشاط، مما يُؤدي إلى اكتشاف أورام من الأنسجة الليمفاوية.

كما نرى، فإن فيروس إبشتاين بار ليس آمنًا كما يبدو للوهلة الأولى، مما يعني أنه لا ينبغي الاستهانة بعلاجه. علاوة على ذلك، يتميز فيروس الهربس من النوع الرابع بنوبات متكررة من حمل الفيروس وظهوره الكامن، ناهيك عن أشكال مختلفة من العدوى المزمنة، حيث يظل الشخص مصدرًا للعدوى دون أن يشك في ذلك.

في هذه الحالة، لا يمكن تحديد وجود عامل معدي في الجسم إلا باستخدام تحليل خاص لفيروس إبشتاين بار، والمادة الحيوية المستخدمة عادة هي الدم.

مؤشرات لهذا الإجراء اختبار فيروس إبشتاين-بار.

بما أن اكتشاف عدوى فيروس الهربس من النوع الرابع ليس سهلاً في بعض الأحيان، فلا يُشتبه به دائمًا. ولكن هناك علامات معينة قد يشتبه الطبيب من خلالها بوجود الفيروس في الجسم:

• ضعف شديد في الجهاز المناعي (المرضى المصابون بعدوى فيروس نقص المناعة البشرية والإيدز، والمرضى بعد زراعة الأعضاء أو العلاج الكيميائي معرضون للخطر)،
• تضخم الغدد الليمفاوية الإقليمية في منطقة الذقن والمنطقة القذالية من الرأس وألمها، خاصة إذا لوحظ ذلك بعد نقل الدم أو زراعة الأعضاء من متبرع.
• العدوى الفيروسية التنفسية الحادة (ARVI)، والتي تحدث على خلفية درجات حرارة عالية جدًا (38-40 درجة)،
• ظهور علامات الإصابة بمرض وحيدات النوى المعدي، والذي يحدث في أغلب الأحيان تحت تأثير فيروس إبشتاين بار.

حتى لو لم يكن لدى الشخص الأعراض المذكورة أعلاه، فقد يشك الطبيب المختص بناءً على بعض نتائج الاختبارات الروتينية (تحليل الدم العام والكيمياء الحيوية)، بالإضافة إلى دراسات الحالة المناعية.

قد يظهر تعداد الدم الكامل لفيروس إبشتاين بار ما يلي:

• زيادة في عدد الخلايا الليمفاوية،
• انخفاض الهيموجلوبين، مما يدل على انخفاض مستوى خلايا الدم الحمراء،
• زيادة تخثر الدم بسبب العدد الكبير من الصفائح الدموية،
• ظهور الخلايا الفيروسية (الخلايا الليمفاوية غير النمطية التي تشبه في بنيتها الخلايا الوحيدة).

اختبار الدم الكيميائي الحيوي، الذي يوفر معلومات عن حالة الأعضاء الداخلية، سيظهر تغييرات في وظائف الكبد والطحال.

قد يظهر الاختبار المناعي لفيروس إبشتاين بار تغييرًا في عدد الخلايا الليمفاوية المحددة، وتناقضًا في عدد الغلوبولينات المناعية من فئات مختلفة (خلل في الغلوبولين المناعي)، ونقص الغلوبولين المناعي G، مما يشير إلى ضعف الجهاز المناعي وعدم قدرته على احتواء هجوم الفيروس.

قد تُنبه نتائج هذه التحاليل غير المحددة الأطباء، ولكن لا يزال من المستحيل تحديد طبيعة المرض بدقة. سيبقى كل شيء في مرحلة الافتراضات والتشخيص الأولي. في معظم الحالات، يشتبه الأطباء في وجود شكل كامن من داء كثرة الوحيدات المعدية، على الرغم من أن أمراضًا فيروسية أخرى (مثل الإنفلونزا والتهاب الكبد وغيرها) قد تظهر بنفس الطريقة.

نظراً لانتشار التهاب الكبد الوبائي من النوع الرابع واحتمالية انتقاله من الأم إلى الطفل، يُعدّ اختبار فيروس إبشتاين بار مفيداً أيضاً عند التخطيط للحمل. إذا سبق للأم أن أصيبت بالعدوى، يكون جسمها قد طوّر أجساماً مضادة لها. عادةً ما يُستبعد تكرار الإصابة بسبب تكوّن مناعة قوية، وإذا حدث ذلك، فلن تكون له العواقب المحتملة عند الإصابة الأولى بالفيروس. ستُقيّد المناعة نشاط الفيروس طوال الحياة، مع أن الفيروس نفسه سيبقى داخل الجسم، كأي فيروس من فيروسات الهربس.

إذا أصيبت الأم الحامل بفيروس الهربس أثناء الحمل، فقد يؤدي ذلك إلى الإجهاض والولادة المبكرة، أو قد يؤثر الفيروس سلبًا على نمو الجنين داخل الرحم.

قد يطلب طبيب الأورام إجراء اختبار فيروس إبشتاين بار إذا اشتُبه في الإصابة بورم بوركيت اللمفاوي، أو لتشخيص نمو الورم لدى المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية. قد يستخدم المعالج هذا الاختبار لتشخيص عدوى الهربس (التشخيص التفريقي لتحديد نوع الفيروس). في بعض الأحيان، يُستخدم الاختبار أيضًا لتقييم فعالية العلاج.

[ 1 ]، [ 2 ]، [ 3 ]، [ 4 ]، [ 5 ]، [ 6 ]، [ 7 ]، [ 8 ]، [ 9 ]

تجهيز

اعتمادًا على نوع البحث، قد تكون المادة الحيوية المستخدمة هي الدم، أو اللعاب، أو البول، أو البلغم، أو عينة السائل الأمنيوسي، أو عينة من قناة عنق الرحم أو مجرى البول، أو السائل الدماغي الشوكي. في أغلب الأحيان، يلجأ الأطباء إلى فحص الدم، وهو الأكثر إفادة.

من الواضح أن بعض العوامل قد تؤثر سلبًا على جودة وكمية المواد الحيوية، لذا يجدر اتباع قواعد معينة في اليوم السابق:

• يُنصح بإجراء جميع التحاليل (وخاصةً تحاليل الدم) صباحًا على معدة فارغة. يجب ألا تتجاوز آخر وجبة ١٢ ساعة قبل أخذ عينة الدم، لذا يُفضل شرب الماء على العشاء.
• تعتبر المادة الأكثر قبولاً لتحليل فيروس إبشتاين بار هي الدم الوريدي، وقبل التبرع بالدم من الوريد، يوصى دائمًا بالراحة لمدة 15 دقيقة إذا كان الشخص قد وصل للتو إلى المختبر،
• ولضمان إجراء أخذ عينات الدم دون عواقب ولضمان موثوقية نتائج الاختبار، لا يُنصح بممارسة عمل بدني نشط أو ممارسة الرياضة أو شرب الكحول أو التدخين خلال 12 ساعة قبل الإجراء.
• قد تتأثر نتائج الفحوصات أيضًا بالأدوية التي تتناولها. يجب عليك التوقف عن تناول الأدوية قبل يومين على الأقل من موعد الفحص. إذا تعذر ذلك، يجب عليك إبلاغ ممرضة المختبر بالأدوية التي تتناولها.
• أثناء الحمل، قبل إجراء اختبار فيروس إبشتاين بار، يتم إجراء اختبار داء المقوسات لاستبعاد حدوث رد فعل إيجابي كاذب.
• إذا تم إجراء فحص دم لفيروس إبشتاين بار لطفل يقل عمره عن 5 سنوات، فيجب إعطاء الطفل قبل نصف ساعة من الإجراء الكثير من الماء المغلي للشرب في أجزاء صغيرة نسبيًا.

إذا تم أخذ مادة حيوية أخرى للتحليل، فيجب عليك توضيح كل التفاصيل الدقيقة للتحضير للتحليل مع طبيبك مسبقًا اعتمادًا على المادة المستخدمة.

[ 10 ]، [ 11 ]، [ 12 ]

تقنية اختبار فيروس إبشتاين-بار.

يُعطي الأطباء دورًا هامًا في تشخيص الهربس من النوع الرابع وداء كثرة الوحيدات المعدية لاختبارات مُحددة تُساعد في تحديد الحمض النووي للفيروس أو الأجسام المضادة الفريدة في المادة الحيوية للمريض. تشمل الأنواع الرئيسية من الاختبارات المعملية المُستخدمة للكشف عن فيروس إبشتاين بار في جسم الإنسان اختبار المُمتز المناعي المُرتبط بالإنزيم (ELISA) وتشخيص تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). دعونا نُلقي نظرةً مُتعمقةً على جوهر كلتا الطريقتين وخصائص تطبيقهما.

اختبار المناعة الإنزيمي لفيروس إبشتاين بار

اختبار الإليزا (ELISA) هو دراسة (تحليل) للدم الوريدي للمرضى للكشف عن أجسام مضادة لفيروس إبشتاين-بار. نتيجةً للتشخيص، يتم الكشف عن الغلوبولينات المناعية من نوع IgG أو IgM (وهناك خمسة أنواع إجمالاً) لأحد مستضدات الفيروس الثلاثة (المبكرة، أو القفيصة، أو النووية) في دم مرضى فيروس إبشتاين-بار.

يُجرى التحليل في مختبر مناعي، حيث يُسحب حوالي 10 مل من الدم من وريد المريض. تُترك المادة الحيوية في درجة حرارة الغرفة لمدة ربع ساعة، وخلال هذه الفترة يتخثر الدم. تُفصل الجلطة بعناية عن الجزء السائل. يُطرد السائل مركزيًا للحصول على مصل دم نقي، وهو ما يخضع لمزيد من الفحص.

نشأت فكرة هذه الطريقة بناءً على بيانات تُفيد بأن جسمنا يُنتج أجسامًا مضادة مُحددة لكل نوع من الفيروسات والبكتيريا التي تخترق الجسم من الخارج. يتعرف عليها الجسم على أنها غريبة، ويقضي عليها بمساعدة أجسام مضادة فريدة تلتصق بشدة بالمستضد.

يعتمد جوهر تحليل ELISA على هذا التفاعل. تتحد الأجسام المضادة المُرفقة بعلامات مع المستضدات. تُضاف مادة إلى العلامات، مما يُغير لون العينة عند تفاعلها مع إنزيم خاص. كلما زاد عدد هذه "السلاسل"، زاد لون المادة الحيوية كثافةً.

يمكن إجراء اختبار المناعة الإنزيمية باستخدام ثلاث طرق:

• اختبار الإليزا المباشر. يُوضع سائل الاختبار في الآبار ويُترك لمدة نصف ساعة تقريبًا حتى تلتصق المستضدات بجدران الآبار. يُضاف سائل يحتوي على أجسام مضادة مُعَلَّمة إلى المستضدات المُمتصة. بعد انقضاء الوقت المطلوب (من نصف ساعة إلى خمس ساعات)، وبعد أن تكتشف الأجسام المضادة المستضدات وترتبط بها، يُصفى السائل، وتُغسل الآبار بعناية، ويُضاف إليها الإنزيم. يُحدَّد تركيز الفيروس في وحدة الدم باستخدام طريقة التلوين.
• اختبار الإليزا غير المباشر. في هذه الطريقة، يُضاف مصل الدم المراد فحصه والأجسام المضادة المُعَلَّمة إلى المستضدات الممتصة على سطح الآبار. ونتيجةً لذلك، يتم الحصول على نوعين من الأربطة، بعضها مُعَلَّم. تعتمد النتيجة على تركيز المستضدات في العينة المراد فحصها. كلما زاد عدد الأجسام المضادة غير المُعَلَّمة، قلّت المركبات التي يُعَلِّمها الإنزيم.

بعد ذلك، يتم إضافة كاشف خاص إلى التركيبة المغسولة، والذي يستخدم لتحديد النشاط الأنزيمي لمجمعات المستضد-الجسم المضاد.

• "الساندويتش". يختلف عن الطريقة غير المباشرة في أنه في البداية، لا تُمتص المستضدات، بل الأجسام المضادة على السطح. يُضاف إليها محلول يحتوي على المستضدات قيد الدراسة. بعد غسل الناقل، تُضاف الأجسام المضادة ذات العلامات الإنزيمية. تُزال الأجسام المضادة الزائدة مرة أخرى، وباستخدام بيروكسيد الهيدروجين، يتم الحصول على مادة ملونة تُدرس باستخدام طريقة مطيافية.

لا يقتصر هذا النوع من التحليل على تحديد الأجسام المضادة المحددة وتحديد تركيز المستضدات فحسب، بل يُمكّن أيضًا من تحديد مرحلة المرض. والحقيقة هي أن مستضدات فيروس إبشتاين بار المختلفة تظهر في مراحل مختلفة من عدوى الهربس، مما يعني أن الأجسام المضادة لها تُنتج في مرحلة معينة من المرض.

وهكذا، تظهر أجسام مضادة من نوع IgG للمستضد المبكر (IgG EA) في الدم بعد أسبوع إلى أسبوعين من الإصابة، عندما يكون المرض في مرحلته الحادة أو مرحلة إعادة تنشيط الفيروس. تختفي الغلوبولينات المناعية من هذا النوع بعد 3-6 أشهر. في المسار المزمن للعدوى الفيروسية، تكون هذه الأجسام المضادة كثيرة بشكل خاص، وفي الشكل غير النمطي، تكون غائبة تمامًا.

تظهر أيضًا أجسام مضادة من نوع IgG لمستضد القفيصة (IgG VCA) في وقت مبكر، خلال الأسابيع الأربعة الأولى من المرض، ولكن يصل عددها إلى أعلى مستوياته في الشهر الثاني من الإصابة. في المرحلة الحادة، توجد هذه الأجسام لدى معظم المرضى، ولكنها قد لا تظهر لدى الأطفال. في المسار المزمن للمرض، وخاصةً خلال فترات إعادة تنشيط الفيروس، تكون كمية IgG VCA مرتفعة بشكل خاص. تبقى هذه الأجسام المضادة في دم الإنسان إلى الأبد، مثل الفيروس نفسه، مما يدل على المناعة المتكونة ضد العامل المُعدي.

قد تظهر أجسام مضادة IgM لمستضد القفيصة (IgM VCA) حتى قبل ظهور أولى علامات المرض. ويكون تركيزها (عياراتها) مرتفعًا بشكل خاص خلال الأسابيع الستة الأولى من المرض. يتميز هذا النوع من الأجسام المضادة بالعدوى الحادة وإعادة تنشيط العدوى المزمنة. يختفي IgM VCA بعد مرور شهر إلى ستة أشهر.

قد تشير الأجسام المضادة IgG للجين النووي (IgG EBNA) إلى إصابة سابقة مباشرة بعدوى الهربس. في المرحلة الحادة من المرض، نادرًا ما تُكتشف، وعادةً ما تظهر خلال فترة التعافي (من الشهر الثالث إلى العاشر). ويمكن اكتشافها في الدم بعد عدة سنوات من الإصابة.

لا يُعطي الكشف عن المستضدات الفردية صورةً كاملةً عن المرض، لذا ينبغي إجراء اختباراتٍ للأجسام المضادة المختلفة معًا. على سبيل المثال، إذا وُجد IgM VCA فقط، ولم يُكتشف IgG EBNA، فهذه عدوى أولية.

للأسف، غالبًا ما يكون اختبار المناعة الإنزيمي غير كافٍ للكشف عن عدوى الهربس الأولية أو الأمراض الخلقية. في هذه الحالة، قد لا تُكتشف الأجسام المضادة إطلاقًا. ولتأكيد الإصابة الأولية، تُستخدم دراسة جزيئية للدم أو مواد بيولوجية أخرى للكشف عن فيروس إبشتاين بار.

تحليل PRC لفيروس إبشتاين بار

يتم إجراء هذا التحليل في مرحلة العدوى الأولية الحادة، وإلا ستكون نتيجته غير صحيحة.

جوهر طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل متعدد الأبعاد (PCR) هو أن كل عامل مُعدٍ يمتلك مجموعة جيناته الخاصة الموجودة في جزيء الحمض النووي (DNA). يوجد الحمض النووي للعامل الممرض في المادة الحيوية المأخوذة للبحث بكميات صغيرة (الفيروسات نفسها مجهرية الحجم)، لذا يصعب تقييم الوضع. ولكن في حال إجراء تفاعل محدد، ستزداد كمية المادة الوراثية بشكل ملحوظ، مما يُتيح تسمية العامل الممرض.

باستخدام أدواتٍ للاستخدام مرة واحدة، تُؤخذ المواد للبحث الجزيئي، ثم تُوضع في جهازٍ خاصٍّ للتحليل. هذا الجهاز عبارة عن ترموستاتٍ مزودٍ ببرنامجٍ خاصٍّ - مُدَوِّر حراري أو مُضخِّم. يُشغِّل الجهاز دورةً كاملةً من دورة PRC لعشرات المرات (حوالي دقيقتين إلى ثلاث دقائق)، على ثلاث مراحل:

• التحلل (عند درجة حرارة 95 درجة، يتم فصل خيوط الحمض النووي).
• التلدين (عند درجة حرارة 75 درجة، يتم إدخال "بادئات" معدة خصيصًا لفيروس إبشتاين بار في المادة التي تتم دراستها، والتي ترتبط بالحمض النووي للفيروس).
• تمديد أو مضاعفة المادة الوراثية (يتم إضافة إنزيم خاص إلى البذرة عند درجة حرارة 72 درجة، مما يؤدي إلى إعادة إنشاء سلسلة DNA جديدة، وبالتالي مضاعفة كمية المادة الوراثية).

إذا أُجريت الدورة الكاملة للتفاعل متعدد الأبعاد ٥٠ مرة، فستزداد كمية المادة ١٠٠ مرة. هذا يعني أن تحديد العامل الممرض سيكون أسهل بكثير.

اختبار فيروس إبشتاين بار للطفل

كما نعلم، يُمكن لفيروس إبشتاين بار أن يُسبب العديد من الأمراض. بمجرد دخوله جسم الإنسان، يبقى مُقيمًا فيه بشكل دائم، ولا يُمكنه التطفل بنشاط داخل الخلايا إلا من خلال العمل المُنسّق للجهاز المناعي.

يعيش ما يقرب من 95% من سكان العالم البالغين حاملين لفيروس إبشتاين-بار داخل أجسامهم، وقد تعرّف معظمهم على الفيروس في طفولتهم المبكرة. ورثه بعضهم من أمهاتهم، بينما التقطه آخرون من آبائهم وأقاربهم الذين يهرعون إلى الطفل بالقبلات، أو عبر الرذاذ المتنقل جوًا في رياض الأطفال أو المدارس (حيث تنتشر الأمراض المُعدية هناك عادةً).

يميل الأطفال الصغار عمومًا إلى وضع كل شيء في أفواههم، ويوجد أكبر عدد من الفيروسات في اللعاب. وإذا لعق عدة أطفال اللعبة نفسها في روضة الأطفال بينما كان المعلمون منشغلين بشؤونهم الخاصة، فليس من المستغرب أن ينتشر الفيروس بهذا النشاط في مجموعات كبيرة من الأطفال.

يمكن بسهولة وصف فيروس إبشتاين بار بأنه مرض يصيب الأطفال والشباب، لأن نصف الأطفال في سن المراهقة يحملون الفيروس بالفعل (وبحلول سن الثلاثين، حوالي 90% من البالغين). يمرض الأطفال في مختلف الأعمار بطرقهم الخاصة. حتى سن عام واحد، عندما لا يتواصل الطفل بنشاط مع الناس، يكون احتمال إصابته بالمرض ضئيلاً. أما الطفل الذي يزيد عمره عن عام، حتى لو لم يذهب إلى روضة الأطفال، فيصبح أكثر اجتماعية، ويلعب مع أقرانه في الشارع، ويذهب في رحلات تسوق نشطة مع والدته، وما إلى ذلك، ويصبح احتمال إصابته بالفيروس أعلى بكثير.

لكن هذا ليس مبررًا لعزل الطفل. في عمر سنة إلى ثلاث سنوات، يتطور المرض في الغالبية العظمى من الحالات دون أي أعراض، ربما باستثناء ارتفاع طفيف في درجة الحرارة وسيلان خفيف في الأنف، يُذكرنا بنزلة البرد. اتضح أنه كلما تعرّف الطفل على الفيروس مبكرًا، كان ذلك أسهل.

ليس من الجيد أن يمرض الطفل دون ظهور أجسام مضادة لـ IgG VCA في الدم، مما قد يشير إلى عدم تكوّن مناعة ضد الفيروس، ومن الممكن إعادة تنشيط الفيروس بمجرد ضعف جهاز المناعة. والسبب على الأرجح هو ضعف جهاز المناعة لدى الأطفال الصغار، والذي يستمر في التكون لعدة سنوات.

تُهيئ الحياة المدرسية ظروفًا أكثر ملاءمةً للإصابة بالمرض، خاصةً في مرحلة المراهقة، حيث يمارس الشباب التقبيل بنشاط. أما لدى الأطفال الذين تزيد أعمارهم عن ثلاث سنوات، فنادرًا ما يكون المرض بدون أعراض. في معظم الحالات، يُصادف الأطباء داء كثرة الوحيدات المعدية بأعراضه المميزة.

على الرغم من أن المرض قد يستمر لفترة طويلة (حوالي شهرين)، إلا أنه ليس خطيرًا جدًا ولا يتطلب استخدام أدوية خطيرة. يصف الأطباء مضادات الالتهاب والفيروسات، وفي حال الإصابة بعدوى بكتيرية، يُلجأ إلى المضادات الحيوية. بالمناسبة، لا يُنصح باستخدام البنسلين في هذه الحالة لأنه قد يُسبب ظهور طفح جلدي.

لا تظنوا أن إصابة طفل أو مراهق بمرض كثرة الوحيدات المعدية تعني أن فيروس إبشتاين بار قد استقر في جسمه. لهذا المرض مسببات أمراض أخرى أقل شيوعًا، مثل الفيروس المضخم للخلايا (فيروس الهربس من النوع 5). لفهم طبيعة المرض، يصف الأطباء اختبار فيروس إبشتاين بار، وإذا لزم الأمر، فحوصات مخبرية أخرى.

صحيحٌ أيضًا أن داء وحيدات النوى المعدي ليس المظهر الوحيد لفيروس إبشتاين بار لدى الأطفال. فهناك أمراض أخرى مرتبطة بهذا العامل المُمْرِض، ولكنها نادرة في منطقتنا.

وهكذا، يُكتشف ورم بوركيت الليمفاوي (الذي يعود إليه اكتشاف فيروس إبشتاين بار) بشكل رئيسي لدى الأطفال في الدول الأفريقية، ونادرًا ما يُكتشف في أمريكا، بل وأكثر ندرة في أوروبا (وذلك فقط في ظل انتشار الإيدز). ويُكتشف ورم الفك المسبب لتلف الغدد الليمفاوية والكلى وأعضاء أخرى لدى الأطفال الذين تتراوح أعمارهم بين 3 و8 سنوات.

سرطان البلعوم الأنفي، ونسبة كبيرة من الأورام اللمفاوية الأخرى، والبقع البيضاء المشعرة في الفم - كل هذه هي مظاهر فيروس إبشتاين بار على خلفية انخفاض المناعة بشكل كبير، والذي يحدث مع الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية ومرحلته المتأخرة من الإيدز.

يُعد نقص المناعة الخلقي، بالإضافة إلى فيروس إبشتاين بار، مزيجًا خطيرًا قد يؤدي إلى تطور متلازمة التكاثر لدى الطفل. في هذه الحالة، تؤدي زيادة عدد الخلايا الليمفاوية البائية إلى ظهور حبيبات في العديد من الأعضاء، مما يعيق عملها بشكل طبيعي. يُعد هذا المرض ذو معدل وفيات مرتفع، ولكنه لا يتطور في ظل مناعة طبيعية.

يمكن القول إن فيروس إبشتاين بار يُشكل خطرًا على الأطفال، خاصةً في حالات نقص المناعة، نتيجةً لتطور مضاعفات مختلفة. في معظم الحالات، يقتصر الأمر على داء كثرة الوحيدات المعدية. ورغم أنه لا يتطلب علاجًا خاصًا، إلا أن الأطباء يُفضلون تحديد طبيعة العامل المُمرض، حيث يُوصف للطفل فحص دم عام، ومقايسة مناعية إنزيمية، وتفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).

نظرًا لأن العدوى الأولية تحدث بشكل رئيسي في مرحلة الطفولة، فمن الممكن تمامًا أن يقتصر الأمر على إجراء تعداد دم كامل واختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وهو اختبار مفيد للغاية عند اكتشاف المرض لأول مرة.

[ 13 ]، [ 14 ]، [ 15 ]، [ 16 ]، [ 17 ]، [ 18 ]، [ 19 ]، [ 20 ]، [ 21 ]، [ 22 ]

الأداء الطبيعي

تُعالَج نتائج تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) بالرحلان الكهربائي أو باستخدام "بادئات" مُعَلَّمة. في الحالة الأخيرة، يكفي إضافة كاشف (مولد كروموجين) وتحديد وجود فيروسات في العينة من خلال اللون. تُعَدُّ النتيجة الإيجابية للرحلان الكهربائي عند اكتشاف خيوط DNA بأطوال مختلفة في العينة قيد الدراسة.

خلال فترة حضانة المرض وحمل الفيروس بدون أعراض، يُعطي اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) نتيجة سلبية، وكذلك في حالة الغياب التام للفيروس في الجسم. في بداية تطور العدوى الأولية ومراحلها المبكرة، قد يُعطي اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) نتائج إيجابية وسلبية آنيًا، مما لا يُوضح الوضع بأي شكل من الأشكال.

مع ذلك، في ذروة المرض (المرحلة الحادة)، أو في مساره المزمن أو إعادة تنشيط الفيروس (التفاقم)، وفي حالات الأشكال غير النمطية، تكون نتيجة التحليل إيجابية. إذا كان الشخص مريضًا لفترة طويلة وكان الفيروس في جسمه في حالة خاملة، فإن تحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) يعطي نتيجة سلبية، أي أن إجراء هذا التحليل خلال هذه الفترة غير مناسب أيضًا، وكذلك في المراحل المبكرة جدًا من المرض.

ويجب القول أن النتائج الدقيقة لهذا النوع من الأبحاث المخبرية لا يمكن الحصول عليها إلا في حالة العدوى الأولية وعدم وجود فيروسات أخرى.

أما بالنسبة لاختبار المناعة الإنزيمي لفيروس إبشتاين بار، فهو يلبي المتطلبات نفسها. وجود فيروس الهربس من النوعين 5 و6، وداء المقوسات، والإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية في الجسم قد يُشوّه النتيجة، تمامًا كما هو الحال مع الإهمال في التحليل أو رداءة جودة الكواشف المستخدمة. في هذه الحالة، قد يلزم إجراء دراسات إضافية، مع مراعاة مسببات الأمراض المحتملة.

تُعتبر نتائج الاختبارات الطبيعية، التي تُشير إلى خلو الجسم من الفيروس، سلبية لجميع الاختبارات الأربعة: IgG EA، وIgM VCA، وIgG VCA، وIgG EBNA. نعم، يُجرى كل اختبار على حدة، نظرًا لظهور المستضدات في فترات مختلفة من المرض. قد يُوصف أحيانًا اختبارات فردية فقط، ولكن في معظم الحالات، يجب إجراء جميع الاختبارات الأربعة، ولكن في فترات مختلفة من المرض.

على سبيل المثال، خلال فترة حضانة المرض، وكذلك في حالة عدم وجود عدوى، لا يُكتشف أيٌّ من أنواع الأجسام المضادة الأربعة في الدم. لا تُعتبر هذه النتيجة كافية، لأنها لا تُمكّن من التمييز بين الشخص الذي أُصيب بالمرض لأول مرة والشخص السليم.

في بداية تطور المرض الأولي، تظهر الأجسام المضادة IgM VCA فقط في الدم. في المراحل المبكرة من المرض، تنضم إليها الأجسام المضادة IgG VCA.

تبدأ المرحلة الحادة من العدوى الأولية بتكوين ثلاثة أنواع من الأجسام المضادة: IgG VCA، وIgM VCA، وIgG EA، مع رصد أكبر عدد من أجسام IgG المضادة لمستضد القفيصة. ويظل تكوين الأجسام المضادة ثابتًا لمدة ستة أشهر بعد المرحلة الحادة من المرض، ولكن كمية IgM VCA تنخفض تدريجيًا إلى الصفر.

بعد ستة أشهر من المرض، تظهر الأجسام المضادة IgG EBNA في الدم، في حين تصبح الغلوبولينات المناعية IgG EA أقل فأقل، ويختفي IgM VCA تمامًا.

في الحالات المزمنة من المرض أو إعادة تنشيط الفيروس، قد تختلف المؤشرات. غالبًا ما تُعثر على جميع أنواع الأجسام المضادة الأربعة في الدم. ولكن قد لا تُكتشف الغلوبولينات المناعية IgM VCA وIgG EBNA.

تحدث مضاعفات العدوى الفيروسية عن طريق العمليات الورمية في حالة غياب الأجسام المضادة IgM VCA، ولا يتم الكشف عن الغلوبولينات المناعية IgG EBNA في جميع الحالات.

لكن الفحص المناعي الإنزيمي لا يحدد وجود أجسام مضادة معينة فحسب، بل يحدد أيضًا تركيزها، مما يسمح لنا بتقييم مرحلة المرض وعواقبه المحتملة بدقة أكبر. لا داعي للحديث عن أرقام محددة هنا. ففي النهاية، يُجري كل مختبر التحليل بإحدى الطرق الممكنة، باستخدام كواشف مختلفة، لذا قد تختلف نتائج التحليل الرقمي من مختبر لآخر.

يُطلب من المريض الحصول على نموذج يُشير إلى القيم الحدية (المرجعية). إذا كانت النتيجة أقل من الحدية، تُعتبر مؤشرًا طبيعيًا (سلبيًا). إذا كانت القيمة المحددة أعلى من القيمة المرجعية، فكل شيء يُشير إلى نتيجة إيجابية، مما يعني أن الفيروس موجود في الجسم. تشير قيمة القيمة المحددة إلى مرحلة المرض ومدى استعمار الجسم لفيروسات إبشتاين بار، أي شدة الحالة المرضية.

إذا كانت نتيجة اختبار ELISA سلبية، فهذا يعني فقط أن الشخص لم يكن على اتصال سابق بفيروس إبشتاين بار. ولكن من المستحيل الجزم بوجود الفيروس حاليًا في الجسم. قد تكون النتيجة السلبية ناتجة عن حضانة العامل الممرض في الجسم وحمل الفيروس بدون أعراض. في بعض الأحيان، للتأكد من خلو الجسم من الفيروس، يلزم إجراء سلسلة ثانية من الاختبارات بعد فترة.

إذا تجاوزت نتيجة اختبار ELISA لفيروس إبشتاين بار القيم المرجعية بقليل، تُعتبر النتيجة مشكوكًا فيها. غالبًا ما يكون السبب هو المرحلة المبكرة من المرض أو وجود فيروسات من فيروس آخر في الجسم. في هذه الحالة، يُنصح بإجراء اختبار مُكرر بعد أسبوعين لفيروس إبشتاين بار، وربما لمسببات أمراض أخرى.

[ 23 ]، [ 24 ]، [ 25 ]، [ 26 ]، [ 27 ]، [ 28 ]، [ 29 ]، [ 30 ]

بالنسبة لمسألة مدة إجراء فحص فيروس إبشتاين بار وموعد ظهور النتائج، فلا توجد صعوبات تُذكر. في مختبر مُجهّز جيدًا، لن تضطر للانتظار أكثر من يومين بعد تقديم العينة. في الحالات التي تتطلب تحليلًا عاجلًا، يُمكن الحصول على النتيجة حتى بعد ساعتين.

يجب إجراء فحص فيروس إبشتاين بار في مختبر موثوق، يضم كواشف عالية الجودة وأخصائيين مؤهلين. فالفحص مكلف (وهو مبلغ كبير، إذ يتراوح سعر فحص نوع واحد من الأجسام المضادة بين 150 و170 هريفنا أوكرانية)، ولا أرغب في الحصول على نتيجة خاطئة، ثم ربما مراجعة مختبر آخر لإجراء فحص جديد.

[ 31 ]، [ 32 ]، [ 33 ]، [ 34 ]، [ 35 ]