فيروس الالتهاب الكبدي الوبائي أ

التهاب الكبد الفيروسي أ هو مرض معدٍ يصيب البشر، يتميز في المقام الأول بتلف الكبد، ويتجلى سريريًا بالتسمم واليرقان. اكتُشف فيروس التهاب الكبد أ عام ١٩٧٣ من قِبل إس. فينستون (وآخرون) باستخدام طريقة المجهر الإلكتروني المناعي، وعن طريق إصابة القرود - الشمبانزي والقردة. يتمثل جوهر طريقة المجهر الإلكتروني المناعي في إضافة أجسام مضادة محددة (مصل النقاهة) إلى راشح براز مريض مصاب بالتهاب الكبد أ، وتعريض الرواسب للمجهر الإلكتروني. بسبب تفاعل الفيروسات مع أجسام مضادة محددة، فإنها تخضع لتجمع محدد. في هذه الحالة، يسهل اكتشافها، ويؤكد التجمع تحت تأثير الأجسام المضادة خصوصية العامل الممرض. وقد تأكد اكتشاف إس. فينستون في التجارب التي أُجريت على المتطوعين.

فيروس التهاب الكبد الوبائي أ كروي الشكل، وقطر الفيريون 27 نانومتر. يُمثل الجينوم بواسطة حمض نووي ريبوزي موجب أحادي السلسلة مع MD 2.6 مم. لا يوجد غلاف فائق. نوع التماثل هو مكعب - عشروني الوجوه. يحتوي الغلاف على 32 غلافًا، ويتكون من أربعة بولي ببتيدات (VP1-VP4). وفقًا لخصائصه، ينتمي فيروس التهاب الكبد الوبائي أ إلى جنس Heparnovirus، وفصيلة Picornaviridae. من حيث المستضدات، فإن فيروس التهاب الكبد الوبائي أ (HAV - فيروس التهاب الكبد الوبائي أ) متجانس. يتكاثر HAV جيدًا في جسم الشمبانزي والبابون وقرود البابون الهامدرياس وقرود المارموسيت. لفترة طويلة، لم يكن من الممكن زراعة الفيروس. فقط في الثمانينيات كان من الممكن الحصول على مزارع خلوية يتكاثر فيها HAV. في البداية، تم استخدام خطوط الخلايا المستمرة من جنين كلية قرد المكاك الريسوسي (ثقافة FRhK-4) لهذه الأغراض، والآن يتم استخدام خط الخلايا المستمرة من خلايا كلية قرد أخضر (ثقافة 4647).

وفقًا لتوصيات خبراء منظمة الصحة العالمية، تم اعتماد التسمية التالية لعلامات فيروس التهاب الكبد أ: فيروس التهاب الكبد أ - أجسام مضادة لفيروس التهاب الكبد أ: IgM المضاد لـ HAV و IgG المضاد لـ HAV.

فيروس التهاب الكبد الوبائي أ (HAV) جسيم صغير يتراوح قطره بين 27 و30 نانومترًا، يتميز بتماثل عشروني الوجوه وتجانس. يكشف مخطط الإلكترونات المُحصّل باستخدام طريقة التجميع المناعي عن جسيمات كثيفة الإلكترونات ذات قفيصيات متناظرة متوضعة على السطح. باستخدام التباين السلبي، تظهر الجسيمات الممتلئة والفارغة في المستحضرات. على عكس الإنفلونزا، لا يحتوي غلاف فيروس التهاب الكبد الوبائي أ (HAV) على نتوءات سطحية أو غشاء. ومن المهم أيضًا ألا يكون لفيروس التهاب الكبد الوبائي أ بنية على شكل قلب.

بناءً على خصائصه الفيزيائية والكيميائية، يُصنف فيروس التهاب الكبد الوبائي أ على أنه ينتمي إلى عائلة الفيروسات البيكورانية، وهو جنس من الفيروسات المعوية يحمل الرقم التسلسلي 72. ومع ذلك، تبين أن هذا التصنيف غير عادي للغاية، ورأت منظمة الصحة العالمية أنه من الممكن الاحتفاظ بمصطلح "فيروس التهاب الكبد الوبائي أ".

كما هو الحال مع جميع فيروسات عائلة الفيروسات البيكورناوية، يحتوي فيروس التهاب الكبد أ على حمض نووي ريبوزي. وقد أثبتت بعض المختبرات إمكانية استنساخ جينوم فيروس التهاب الكبد أ، مما يفتح آفاقًا جديدةً للحصول على لقاحات.

[ 1 ]، [ 2 ]، [ 3 ]، [ 4 ]، [ 5 ]، [ 6 ]، [ 7 ]

مقاومة فيروس التهاب الكبد أ

يتمتع الفيروس بمقاومة نسبية لدرجات الحرارة المرتفعة، والأحماض، ومذيبات الدهون (خالية من الدهون)، والمطهرات، ويتحمل درجات الحرارة المنخفضة جيدًا. كل هذا يُسهم في الحفاظ عليه طويل الأمد في البيئة الخارجية. في درجة حرارة الغرفة، يبقى الفيروس حيًا لعدة أسابيع، وعند درجة حرارة 60 درجة مئوية، يفقد قدرته على العدوى جزئيًا بعد 4-12 ساعة، ويفقدها تمامًا بعد عدة دقائق عند درجة حرارة 85 درجة مئوية. يتميز الفيروس بمقاومته العالية للكلور، ما يسمح له بالنفاذ إلى مياه الصنبور عبر حواجز محطات معالجة المياه.

وبتلخيص كافة البيانات، يمكننا وصف فيروس التهاب الكبد الوبائي أ على النحو التالي:

• المضيف الطبيعي هو الإنسان؛
• الحيوانات التجريبية - القرود، الشمبانزي؛
• مصدر العدوى هو البراز؛
• المرض وبائي ومتوطن؛
• طريق الانتقال: عن طريق البراز والفم؛
• فترة الحضانة - 14-40 يومًا؛
• الانتقال إلى التهاب الكبد المزمن - لم يتم ملاحظته.

الخصائص المناعية لفيروس التهاب الكبد A هي كما يلي:

• السلالات النموذجية - Ms-1، CR-326، GВG. جميعها متشابهة أو متطابقة مناعيًا؛
• الأجسام المضادة - IgM و IgG، يتم إنتاجها استجابة لإدخال البروتينات البنيوية للفيروس وهي وقائية؛
• أولا: التأثير الوقائي للجاما غلوبيولين في مصل الإنسان: يمنع المرض أو يخففه إذا تم إعطاؤه قبل الإصابة أو أثناء فترة الحضانة.

الخصائص الفيزيائية والكيميائية لـ NAU هي كما يلي:

• الشكل: جسيم كروي بدون قشرة ذو تماثل مكعب، يتكون الغلاف من 32 غلافًا.
• القطر - 27-30 نانومتر؛
• الكثافة بـCsCl (جم/سم3) - 1.38-1.46 (جسيمات مفتوحة)، 1.33-1.34 (فيريون ناضج)، 1.29-1.31 (فيريونات غير ناضجة، جسيمات فارغة)؛
• معامل الترسيب - 156-160 فيريونات ناضجة؛
• الحمض النووي هو عبارة عن RNA خطي أحادي السلسلة؛
• الوزن الجزيئي النسبي - 2.25 106-2.8 106KD؛
• عدد النيوكليوتيدات هو 6500-8100.

استقرار HAV تحت التأثيرات الفيزيائية والكيميائية هو كما يلي:

• كلوروفورم، إيثر - مستقر؛
• الكلور، 0.5-1.5 ملغ/لتر، 5 درجة مئوية، 15 دقيقة - تعطيل جزئي؛
• الكلورامين، 1 جرام/لتر، 20 درجة مئوية، 15 دقيقة - تعطيل كامل؛
• الفورمالين، 1:4000، 35-37 درجة مئوية، 72 ساعة - تعطيل كامل، 1:350، 20 درجة مئوية، 60 دقيقة - تعطيل جزئي.

درجة حرارة:

• 20-70 درجة مئوية - مستقرة؛
• 56 درجة مئوية، 30 دقيقة - مستقرة؛
• 60 درجة مئوية، 12 ساعة - تعطيل جزئي؛
• 85 درجة مئوية، 1 دقيقة - تعطيل كامل؛
• التعقيم بالبخار، 120 درجة مئوية. 20 دقيقة - تعطيل كامل؛
• حرارة جافة، 180 درجة مئوية، 1 ساعة - إبطال مفعولها بالكامل؛
• UFO، 1.1 واط، 1 دقيقة - تعطيل كامل.

تُظهر البيانات المُقدّمة أن فيروس التهاب الكبد أ، من حيث خصائصه الفيزيائية والكيميائية، هو الأقرب إلى الفيروسات المعوية. ومثل غيره من الفيروسات المعوية، فإن فيروس التهاب الكبد أ مقاوم للعديد من محاليل التطهير، ويُعطّل تمامًا في غضون دقائق قليلة عند درجة حرارة 85 درجة مئوية وفي جهاز التعقيم بالبخار.

ثبت أن فيروس التهاب الكبد الوبائي أ قادر على التكاثر في الخلايا أحادية الطبقة الأولية والمستمرة لمزارع الخلايا البشرية والقردة. يُلاحظ تكاثر نشط للغاية لفيروس التهاب الكبد الوبائي أ في المزارع المخبرية عند استخدام مستخلصات كبد قرود مريضة كمادة أولية. مع ذلك، تجدر الإشارة إلى أنه في جميع تجارب تكاثر فيروس التهاب الكبد الوبائي أ في المزارع المخبرية، يُلفت الانتباه إلى طول فترة الحضانة خلال المراحل الأولية (تصل إلى 4-10 أسابيع)، حيث يزداد تراكم المادة الوراثية الفيروسية بعد ذلك، إلا أن القيم المطلقة تبقى ضئيلة للغاية، مما يُفسر عدم اكتمال تكاثر فيروس التهاب الكبد الوبائي أ في مزارع الأنسجة.

بتلخيص بيانات الأدبيات المتعلقة بتكاثر فيروس التهاب الكبد الوبائي أ في مزارع خارج الأنسجة، يمكن القول إن بقاء فيروس التهاب الكبد الوبائي أ على قيد الحياة لفترة طويلة في المختبر أمرٌ لا شك فيه. لم تُحدد بعد الظروف المثلى لتكاثر الفيروس بمستوى عالٍ ومستقر، مما يعيق دراسة خصائصه البيولوجية، والحصول على مصدر للكواشف اللازمة لإنتاج التشخيصات وتصميم اللقاحات.

في الوقت نفسه، يمكن العثور على أحكام أكثر تفاؤلاً بشأن هذه المشكلة في الأدبيات. إن حل جميع القضايا المتعلقة بزراعة فيروس التهاب الكبد أ هو مسألة مستقبل قريب. عند دراسة الظروف المثلى لتكاثر فيروس التهاب الكبد أ في مزرعة خلايا الكلى الجنينية لقرد المكاك الريسوس، تم تحديد مرحلتين: مرحلة إنتاج الفيروس المعدي (حتى 6-8 أيام عند مستوى الممر الخامس) ومرحلة التراكم المكثف للمستضد الفيروسي. كما تبين أن التراكم الأكثر أهمية للمستضد الفيروسي يحدث في ظل ظروف ما يسمى بزراعة الأسطوانة (القوارير الدوارة). تفتح هذه الطريقة فرصًا واسعة للحصول على مستضد ثقافي بكميات كبيرة، وبالتالي، ستظهر المادة المصدر لإعداد أنظمة التشخيص وتصنيع اللقاحات.

علم الأوبئة لالتهاب الكبد أ

فيروس التهاب الكبد أ شديد الإمراض للبشر. ووفقًا لمنظمة الصحة العالمية (1987)، فإن الإصابة بفيروس واحد فقط تكفي للتسبب في المرض. ومع ذلك، فإن الجرعة المعدية العملية ربما تكون أعلى من ذلك بكثير. المصدر الوحيد للعدوى هو الشخص المصاب. يتم إفراز الفيروس بكميات كبيرة مع البراز قبل 12-14 يومًا من ظهور اليرقان وخلال الأسابيع الثلاثة من فترة اليرقان. لم يتم العثور على أي اختلافات كبيرة في إفراز العامل الممرض لدى المرضى الذين يعانون من أشكال التهاب الكبد أ اليرقاني واللايرقاني وغير المصحوب بأعراض. يكون طريق العدوى هو البراز والفم، وينتقل بشكل رئيسي عن طريق الماء، بالإضافة إلى المنزل والغذاء. يكون طريق العدوى هو البراز والفم، وينتقل بشكل رئيسي عن طريق الماء، بالإضافة إلى المنزل والغذاء. الطريق الرئيسي (الأولي) لانتقال الفيروس هو عن طريق الماء. من الممكن أيضًا الإصابة عن طريق الرذاذ المحمول جوًا. قابلية السكان للإصابة عالمية. يتأثر معظم الأطفال دون سن 14 عامًا. يتميز هذا المرض بموسم خريفي وشتوي واضح.

[ 8 ]، [ 9 ]، [ 10 ]، [ 11 ]، [ 12 ]، [ 13 ]، [ 14 ]، [ 15 ]

أعراض التهاب الكبد الوبائي أ

تتراوح فترة الحضانة بين 15 و50 يومًا، حسب الجرعة المعدية للفيروس، ولكنها تتراوح في المتوسط بين 28 و30 يومًا. بمجرد دخوله الجسم، يتكاثر فيروس التهاب الكبد أ في العقد اللمفاوية الإقليمية، ويخترق الدم، ثم خلايا الكبد، مسببًا التهاب كبد حاد منتشر، مصحوبًا بتلف خلايا الكبد والعناصر الشبكية البطانية للكبد، وانخفاض في قدرته على إزالة السموم ووظائفه الحاجزية. لا يحدث تلف خلايا الكبد نتيجةً للتأثير المباشر للفيروس، بل نتيجةً لآليات مناعية مرضية. الصورة الأكثر شيوعًا لالتهاب الكبد أ هي الشكل الدوري اليرقي الحاد: فترة الحضانة، المرحلة المبكرة (ما قبل اليرقانة)، فترة اليرقانة، والنقاهة. ومع ذلك، في بؤر العدوى، يتم اكتشاف عدد كبير من المرضى المصابين بأشكال العدوى اليرقانية وغير المصحوبة بأعراض، ويتفوق عددهم بشكل كبير على المصابين باليرقان ("ظاهرة جبل الجليد").

المناعة بعد الإصابة بالعدوى قوية وطويلة الأمد، وهي ناجمة عن الأجسام المضادة المحايدة للفيروس وخلايا الذاكرة المناعية.

التشخيص الميكروبيولوجي لالتهاب الكبد أ

يعتمد تشخيص التهاب الكبد الوبائي أ (باستثناء إصابة الحيوانات - الشمبانزي، والقردة، والبابون، التي لا نملكها) على طرق مناعية متنوعة: الخلايا الجذعية السرطانية (RSC)، وطريقة التألق المناعي، وتقنية التراص الدموي المناعي (حيث يمتص مركب المستضد الفيروسي + الجسم المضاد، بوجود المتمم، على كريات الدم الحمراء ويسبب التصاقها). ومع ذلك، فإن إمكانيات استخدام هذه الطرق محدودة نظرًا لنقص المستضدات الفيروسية النوعية، ويتطلب تفاعل التألق المناعي خزعة كبدية، وهو أمر غير مرغوب فيه. تُعد طريقة المجهر الإلكتروني المناعي موثوقة ومحددة، ولكنها تتطلب جهدًا كبيرًا. لذلك، فإن التفاعل المناعي الوحيد المقبول حتى الآن هو طريقة تحليل الممتز المناعي للطور الصلب على شكل IFM أو RIM، وخاصةً في تعديل "التقاط" الغلوبولينات المناعية من الفئة M. في بلدنا، تم اقتراح نظام اختبار لهذا الغرض - "DIAGN-A-HEP". مبدأ عمل نظام الاختبار هذا هو كما يلي. أولاً، تُمتص الأجسام المضادة للغلوبولينات المناعية من الفئة M (مضادات الغلوبولين المناعي M) على جدران آبار البوليسترين، ثم يُضاف مصل المريض المراد فحصه. إذا احتوى المصل على أجسام مضادة IgM، فسوف يرتبط بمضادات الأجسام المضادة من الفئة M، ثم يُضاف مستضد فيروسي محدد (فيروس التهاب الكبد A)، والذي يُحصل عليه عن طريق النمو في مزرعة خلوية. يُغسل النظام، وتُضاف إليه أجسام مضادة للفيروسات مُوسومة ببيروكسيداز الفجل. إذا تفاعلت جميع مكونات النظام الأربعة، تتكون "شطيرة" من أربع طبقات:

• مضادات الغلوبولينات المناعية M،
• الغلوبولينات المناعية M (ضد فيروس التهاب الكبد A - في مصل المريض قيد الدراسة)،
• المستضد الفيروسي،
• الأجسام المضادة المضادة للفيروسات الموسومة بالإنزيم.

للكشف عن هذا المركب، تُضاف مادة ركيزة للإنزيم إلى الآبار. بتأثير الإنزيم، تُدمر المادة، ويتكون منتج ملون. يمكن قياس شدة اللون كميًا باستخدام مطياف ضوئي أو مقياس ألوان ضوئي.

ميزة طريقة "التقاط" IgM هي أن الأجسام المضادة لهذه الفئة من الغلوبولينات المناعية تظهر أثناء الاستجابة المناعية الأولية، وتشير إلى المرحلة النشطة من العدوى، ثم تختفي بعد الإصابة بالمرض. على العكس، تبقى الأجسام المضادة للفيروسات التي تنتمي إلى فئة IgG موجودة لفترة طويلة بعد الإصابة بالمرض، مما يوفر مناعة مكتسبة. اقتُرحت طريقة فحص الحمض النووي للكشف عن فيروس التهاب الكبد الوبائي أ: يُستخدم الحمض النووي الريبوزي منقوص الأكسجين التكميلي vRNA كمسبار.

علاج التهاب الكبد أ

نظرًا لحقيقة أن إنتاج الإنترفيرون يتعطل في التهاب الكبد الفيروسي، فإن علاج التهاب الكبد أ يعتمد على استخدام الإنترفيرون ومحفز تخليقها الداخلي، الأميكسين.

الوقاية المحددة من التهاب الكبد أ

لم يكن العلاج المصلي الوقائي لالتهاب الكبد الوبائي أ باستخدام غاما غلوبولين، والذي كان شائع الاستخدام سابقًا، فعالًا، لذا تم التركيز بشكل رئيسي على التطعيم الوقائي، وهو يُجرى حاليًا التطعيم ضد التهاب الكبد الوبائي أ. ولهذا الغرض، يجري تطوير أنواع مختلفة من اللقاحات، وهي قيد الاستخدام بالفعل. في روسيا، تم الحصول على لقاح فعال ضد التهاب الكبد الوبائي أ عام ١٩٩٥، ويُستخدم الآن بنجاح.