تفاعل البوليميراز المتسلسل التسلسلي لالتهاب الكبد C

عادةً ما يكون فيروس التهاب الكبد سي غائبًا في المادة.

بخلاف الطرق المصلية لتشخيص التهاب الكبد الفيروسي سي، والتي تكشف عن الأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد سي، يسمح تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) باكتشاف وجود الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي مباشرةً وتحديد تركيزه في مادة الاختبار. يتميز الاختبار بخصوصية النوع وحساسية عالية: عشر جزيئات من الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي في مادة الاختبار كافية للكشف عنه. يؤكد اكتشاف الأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد سي فقط حقيقة إصابة المريض، ولكنه لا يسمح بالحكم على نشاط العملية المعدية (تكاثر الفيروس) وتوقعات المرض. بالإضافة إلى ذلك، يتم اكتشاف الأجسام المضادة لفيروس التهاب الكبد سي في دم مرضى التهاب الكبد الحاد والمزمن، وكذلك في المرضى الذين كانوا مرضى ومتعافين، وغالبًا ما تظهر الأجسام المضادة في الدم بعد عدة أشهر فقط من ظهور الصورة السريرية للمرض، مما يُعقّد التشخيص. يُعدّ اكتشاف فيروس التهاب الكبد سي في الدم باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) طريقة تشخيصية أكثر إفادة. يشير اكتشاف الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي (HCV RNA) باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) إلى وجود الفيروس في الدم، ويُمكّن من تقييم تكاثر الفيروس في الجسم، ويُعدّ أحد معايير فعالية العلاج المضاد للفيروسات. يُعدّ اكتشاف الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي (HCV RNA) باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) في المراحل المبكرة من العدوى الفيروسية، في ظل غياب تام لأي علامات مصلية، الدليل الأوّلي على الإصابة. ومع ذلك، فإنّ الكشف المعزول عن الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي (HCV RNA) في ظل غياب تام لأي علامات مصلية أخرى لا يُمكن أن يستبعد تمامًا نتيجة إيجابية خاطئة لاختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR). في مثل هذه الحالات، من الضروري إجراء تقييم شامل للدراسات السريرية والكيميائية الحيوية والمورفولوجية، مع تأكيدات متكررة لوجود العدوى باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR).

يُعد استخدام طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) لدى مرضى التهاب الكبد الفيروسي سي المزمن ذا أهمية بالغة، إذ يفتقر معظمهم إلى وجود ارتباط بين وجود تكاثر الفيروس ونشاط إنزيمات الكبد. في هذه الحالات، يُمكّننا تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) فقط من الحكم على وجود تكاثر الفيروس، خاصةً إذا كانت النتيجة النهائية مُعبّر عنها كميًا. في معظم حالات المرض، يحدث اختفاء الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي من مصل الدم بعد عودة إنزيمات الكبد إلى وضعها الطبيعي، لذا لا يُمكن اعتبار عودتها إلى وضعها الطبيعي أساسًا لإيقاف العلاج المضاد للفيروسات.

من المهم عمليًا فحص ليس فقط مصل الدم، بل أيضًا الخلايا الليمفاوية وعينات خزعة الكبد باستخدام تقنية تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) للكشف عن الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي. يمكن الكشف عن الفيروسات في أنسجة الكبد بمعدل مرتين إلى ثلاث مرات أكثر من مصل الدم. عند تقييم نتائج فحص مصل الدم للكشف عن الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي، يجب تذكر أن طبيعة وجود الفيروس في الدم قد تكون متقلبة (وكذلك تغيرات في نشاط الإنزيمات). لذلك، بعد نتائج اختبار تفاعل البوليميراز المتسلسل الإيجابية، قد تكون النتيجة سلبية، والعكس صحيح. في مثل هذه الحالات، يُفضل فحص عينات خزعة الكبد لإزالة أي شكوك.

يتم استخدام الكشف عن RNA لفيروس التهاب الكبد C في المواد باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل للأغراض التالية:

• حل نتائج الاختبارات المصلية المشكوك فيها؛
• التمييز بين التهاب الكبد الفيروسي سي وأشكال أخرى من التهاب الكبد؛
• تحديد المرحلة الحادة من المرض بالمقارنة مع العدوى أو الاتصال السابق؛ تحديد مرحلة الإصابة لدى الأطفال حديثي الولادة من أمهات مصابات بفيروس التهاب الكبد الوبائي سي؛
• مراقبة فعالية العلاج المضاد للفيروسات.

المرضى المشتبه بإصابتهم بالتهاب الكبد الفيروسي سي:

• المتبرعين؛
• الأشخاص الذين لديهم عوامل الخطر؛
• الأفراد الذين لديهم نشاط ALT مرتفع؛
• مرضى التهاب الكبد الحاد

وتنطبق جميع الميزات المذكورة أعلاه لتقييم النتائج والأساليب المتبعة لتشخيص فيروس التهاب الكبد الوبائي سي باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) أيضًا على الالتهابات الأخرى.

لا تقتصر طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) على الكشف عن الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي في المادة المدروسة فحسب، بل تُمكّن أيضًا من تحديد النمط الجيني للفيروس. يُعدّ تحديد النمط الجيني للفيروس ذا أهمية بالغة لاختيار مرضى التهاب الكبد الفيروسي سي المزمن للعلاج بالإنترفيرون ألفا والريبافيرين. المؤشرات المخبرية لعلاج التهاب الكبد الفيروسي سي المزمن بالإنترفيرون ألفا هي كما يلي:

• زيادة نشاط الترانساميناز؛
• وجود RNA لفيروس التهاب الكبد سي في الدم؛
• النمط الجيني 1 لفيروس التهاب الكبد الوبائي سي؛
• ارتفاع نسبة الفيروسات في الدم (أكثر من 8×105 ^نسخة /مل).

حاليًا، يُمكن تحديد محتوى الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي (HCV) في مصل الدم كميًا باستخدام طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR)، وهي طريقة بالغة الأهمية لمراقبة علاج الإنترفيرون ألفا. يُقيّم مستوى الفيروس في الدم على النحو التالي: إذا كان محتوى الحمض النووي الريبوزي لفيروس التهاب الكبد سي (HCV) يتراوح بين 10 ² و10 ⁴ نسخ/مل، يكون ضعيفًا؛ وإذا كان يتراوح بين 10 ⁵ و10 ⁷ نسخ/مل، يكون متوسطًا؛ وإذا كان أعلى من 10 ⁸ نسخ/مل، يكون مرتفعًا. مع العلاج الفعال، ينخفض مستوى الفيروس في الدم.

[ 1 ]، [ 2 ]، [ 3 ]، [ 4 ]