التشخيص المختبري لمرض السل

السل مرض سهل التشخيص في الظروف الحديثة والإنجازات العلمية. يعتبر التشخيص المختبري للسل مركزيا في طرق التشخيص الأخرى ، في المرتبة الثانية بعد طرق البحث في الأشعة السينية.

[1], [2], [3], [4],

اختبار الدم السريري

في المرضى الذين يعانون من مرض السل ، فإن التغييرات في التحليل العام للدم ليست مسببة للأمراض. مع وجود أشكال محدودة وغير نشطة من مرض السل ، تكون كريات الدم الحمراء في حالة هيموكرومية بالكمية الطبيعية. عندما تتسرب ضخمة أو الالتهاب الرئوي الجبني، في حين أن معدل انتشار الغدد الليمفاوية الجبني، آفات الأمعاء محددة، فضلا عن الرئوية كبيرة أو نزيف بعد العملية الجراحية ومذكرة قلة الكريات الحمر صغر الكريات الحمر، oligohromaziyu، polihromaziyu. أقل بكثير في كثير من الأحيان ، macrocytosis وخاصة poikilotsitoz ، عادة مع فقر الدم الشديد. عدد الشبكيات في خطوة السل تعويض يتراوح 0،1-0،6٪، مع subcompensated - 0،6-1،0٪ و 1٪ يتميز الشبكيات اللا تعويضية.

عندما السل في بعض الحالات قد يكون هناك الكريات البيض المعتدلة (تصل إلى 15000 من الكريات البيض)، والإشعاع أقل، والتي تحدث في 2-7٪ من المرضى الذين يعانون من أشكال محدودة وسهلة تحدث عملية وفي 12.5٪ - السل الرئوي المدمرة والتدريجي .

تحدث التحولات الأكثر شيوعا في الصيغة الكريات البيض. علامة على كل من العدلات النسبية والمطلقة ، تحول معتدل من الصيغة الكريات البيض إلى اليسار قبل promyelocytes. الخلايا النواة نادرة جدا في حالة السل غير معقدة. تشير الزيادة في عدد العدلات ذات الحبيبات المرضية في صورة الدم لمريض مصاب بمرض السل دائمًا إلى مدة العملية: في المرضى المصابين بالسل الشديد ، تحتوي جميع العدلات تقريبًا على حبيبات مرضية. عندما يتوقف تفشي الدرن ، يقترب التحول النووي بسرعة نسبية. عادة ما يستمر التقسيم المرضي للعدلات أطول من التغيرات الأخرى في صورة الدم.

يختلف محتوى الحمضات في الدم المحيطي أيضًا وفقًا لمرحلة العملية وحالة الحساسية للكائن الحي. يتناقص عددهم حتى aneozinofiliya في اندلاع الشديد وفترات طويلة من المرض، وعلى العكس، ويزيد كما تتسرب ارتشاف والانصباب الجنبي، فضلا عن أشكال مبكرة من السل الابتدائي.

معظم أنواع السل الأولي مصحوبة بمرض اللمفوبيا ، والذي يلاحظ في بعض الأحيان لعدد من السنوات ، حتى بعد حدوث تغيرات محددة. السل الثانوي في طور التفاقم ، اعتمادا على شدة العملية ، قد يكون مصحوبا إما بعدد طبيعي من الخلايا الليمفاوية ، أو اللمفوبينيا.

وتحتل مكانا خاصا تحديد معدل الترسيب اختبارات إضافية لتقييم عملية السلية (ESR) وجود قيمة في تقييم عملية السل تدفق وتحديد أشكاله النشطة. زيادة في ESR يدل على وجود عملية المرضية (معدية للالتهابات، والصرف الصحي القيحي، كثرة أرومات الكريات، هودجكين وآخرون.) ويدل على وحدته، ولكن المستويات الطبيعية ESR يست دائما تشير إلى عدم وجود علم الأمراض. تسهل عملية تسريع ترسيب كريات الدم الحمراء بزيادة في محتوى الجلوبيولين والفيبرينوجين والكولسترول في الدم وانخفاض في لزوجة الدم. تباطؤ ترسب كرات الدم الحمراء هو سمة بالنسبة للدول المصحوبة بتركيز الدم ، زيادة في محتوى الالبومين والأحماض الصفراوية.

صورة الدم في المرضى الذين يعانون من تغيرات مرض السل خلال فترة العلاج. التحولات الدموية تختفي أسرع ، وأكثر نجاحا التدخل العلاجي. ومع ذلك ، ينبغي للمرء أن نأخذ في الاعتبار التأثير على صفة الدم من الأدوية المضادة للبكتيريا المختلفة. وغالبا ما تسبب فرط الحمضات ، في بعض الحالات - زيادة عدد الكريات البيضاء ، وكثير من الكريات البيض في كثير من الأحيان تصل إلى ندرة المحببات والتفاعل الشبكي اللمفاوي. يعتبر التحكم الدموي المنظم والتحليل الصحيح للبيانات التي تم الحصول عليها ضروريين لتقييم الحالة السريرية للمريض ، وديناميكيات العملية وفعالية المعالجة المستخدمة.

[5], [6], [7], [8], [9],

التحليل السريري للبول

مع مرض السل من الجهاز البولي ، وتحليل البول هو الأسلوب التشخيصي المختبر الرئيسي. يمكنك مشاهدة بيلة الكريات البيض، eritrotsiturii، بروتينية، gipoizostenuriyu والسل mikobakteriuriyu، تجرثم غير محددة.

تعد الكريات البيض من أكثر أعراض داء السل في الجهاز البولي قبل إجراء العلاج الكيميائي المحدد وتغيب فقط في الحالات الاستثنائية ، على سبيل المثال ، مع القضاء التام على التجويف الحالب. اختبار Nechiporenko (تحديد عدد الكريات البيض في 1 مل من البول) يساعد على تقييم موضوعي بدرجة أكبر من الكريات البيض في مرض السل الكلوي ، وفي بعض الحالات ، والكشف عنها في تحليل عام عادي للبول. ومع ذلك ، يجب أن تؤخذ بعين الاعتبار أن بيلة كريات الدم البيضاء قد تحدث في التهاب الحويضة والكلية الحاد والمزمن ، التهاب المثانة ، التهاب الإحليل ، حصى الكلى والحالب.

Eritrotsiturii. فضلا عن كثرة الكريات البيض. تعتبر واحدة من علامات المختبر الأكثر شيوعا من مرض السل من الجهاز البولي التناسلي. يعتمد تكرار بيلة الدم على مدى انتشار العملية ، ويزداد مع تطور عملية السل المدمر في الكلى. تعدّ الكريات الحمرّة بدون الكريات البيض أكثر نموذجيّة للمراحل المبكّرة من مرض السل الكلوي. Hematuria ، التي تسود أكثر من الكريات البيض ، هو حجة مهمة لصالح السل الكلى عندما يتم تمييزه عن التهاب الحويضة والكلية غير محدد.

[10], [11], [12], [13], [14], [15], [16],

اختبار الدم البيوكيميائي

مع السل ، تعتمد التغيرات في بعض المعايير البيوكيميائية في المقام الأول على مرحلة العملية ، والمضاعفات والأمراض المصاحبة المختلفة. في المرضى الذين يعانون من السل غير نشط من الرئتين وغيرها من الأجهزة ، فإن البروتين الكلي وأجزاء البروتين من مصل الدم هي دون تغيير وتحديد محتواها الطبيعي.

في الأشكال الحادة من المرض ، وكذلك مع تفاقم وتطور الأشكال المزمنة من مرض السل ، ينخفض معامل الجلوبيولين الزلال.

أساسي في تقييم حالة وظيفية من الأضرار العضوية والكبد في مرض السل ومضاعفاته هو تحديد المصل الكلي والبيليروبين المباشر، AST (ACT)، الألانين ألانين (ALT). التحديد الديناميكي لمستوى ناقلات الأمين. البيليروبين في علاج مرضى السل ، وخاصة في أشكال حادة ، هو عنصر إلزامي للفحص البيوكيميائية لمرضى السل ويتم إجراؤه شهريا.

تقييم الحالة الوظيفية للكلية يتضمن تحديد كرياتينين المصل وحساب معدل الترشيح الكبيبي وفقا لصيغة Cockcroft-Gault. حساب معدل الترشيح الكبيبي باستخدام عينة Reberg يعطي نتائج أقل دقة.

الهدف الرئيسي من الدراسات البيوكيميائية الحيوية لمرضى السل هو رصد مسار العملية ، والكشف في الوقت المناسب من الآثار الجانبية للأدوية والتصحيح الكافي للاضطرابات الاستتبابية الناشئة.

[17], [18], [19]

تطبيق الأساليب البيوكيميائية للتحقيق في السل خارج الرئة

المؤشر الأكثر إفادة هو محتوى حمض السل البوري في السوائل البيولوجية ، ولكن تعريفه يرتبط بالصعوبات التقنية (الحاجة إلى اللوني للغاز وقياس الطيف الكتلي).

القياس الاستباقي لنشاط الأدينوزين ديمايناز - وهو إنزيم ، محدد في السوائل: الزليلي ، التامور ، الاستسقاء أو العمود الفقري. المنتجون الرئيسيون للأدينازين ديازيناز هي الخلايا الليمفاوية وحيدة الخلية. تحديد نشاط الديازيناز الأدينوزين في السوائل البيولوجية يسهل تشخيص التهاب الغشاء المفصلي السل ، السل الغدد الليمفاوية ، والتهاب السحايا السل ، السل المصلي.

يتم تحديد بعض المؤشرات البيوكيميائية بسبب عدم خصوصيتها فقط في السوائل البيولوجية ، بالقرب من تركيز الآفة. ﻗم ﺑﻘﯾﺎس ﻣﺳﺗوى اﻟﻣؤﺷرات اﺳﺗﺟﺎﺑﺔ ﻟﺣﻘن اﻟﺗﯾوﺑوﻟﯾﻧﯾن ﺗﺣت اﻟﺟﻟد أو اﻟﺑﺷري (ﻋﺎدة ﻣﺎ ﯾﮐون ﻗﺑل وﻗت 48 و 72 ﺳﺎﻋﺔ ﺑﻌد ذﻟك). بعد ذلك ، يتم حساب درجة الزيادة لمستوى العلامة (في٪) بالنسبة للمستوى الأولي.

التحديد الأمثل في البول من نشاط إنزيم خاص بالأعضاء من transamnidase ، لوحظ ظهوره في هزيمة الكلى ذات الطبيعة المختلفة. لا يمكن تبرير دراسة transamidinase إلا تحت ظروف حقن السلين تحت الجلد من أجل تفاقم العملية الالتهابية المحلية. تحديد نشاط التراماميدين في البول في البداية و 24-72 ساعة بعد إدخال 50 تي توبولين. تكبير التخمير في 2 مرات وأكثر يسمح في 82 ٪ من الحالات للتمييز بين السل النشط من الكلى من تفاقم التهاب الحويضة والكلية المزمن.

مع السل للأعضاء التناسلية الأنثوية ، يتم تحديد تركيزات الهابوغلوبين والكاليداليدون في الدم في ظروف اختبار Tuberculin الاستفزازي. وأجرى حقن السليرين عن طريق الحقن بجرعة مقدارها 50 هكتارًا و 72 ساعة في وقت لاحق أجرت دراسة كيميائية حيوية ثانية. في حالة المسببات السلية ، لا تقل درجة الزيادة في مستوى الهابوغلوبين عن 28٪ ، ومستوى malondialdehyde هو 39٪ أو أكثر. كما يستخدم تحديد نشاط الديازيناز الأدينوزين في السائل البريتوني الذي تم الحصول عليه من مساحة دوغلاس. يتم إعادة فحص النقطة بعد 72 ساعة من الحقن داخل الأدمة من السلين عند جرعة من 0.1 TE و 0.01 TE في إسقاط الأعضاء التناسلية الداخلية على جدار البطن الأمامي. في صالح عملية السل ، فإن زيادة نشاط دايميناز الأدينوزين هي 10٪ أو أكثر بالمقارنة مع النشاط الأولي.

عندما تتأثر العين ، يتم فحص التفاعل البؤري الذي يحدث في العين استجابة لتحفيز مولد الأنتيجينيك. من غير المستحسن تطوير استجابة واضحة ، مصحوبة بانخفاض في الوظائف البصرية. بما أن تقييم الحد الأدنى من التفاعلات البؤرية يكون صعباً في كثير من الأحيان ، من أجل تحديد الخلاصة ، يوصى بالتوجيه بالتوازي وعلى درجة النمو في مصل الدم من haptoglobin أو adenosine deaminase.

يجب إجراء جميع الدراسات البيوكيميائية بالاقتران مع طرق أخرى.

[20], [21], [22], [23],

بحوث نظام تخثر الدم

سبب أهمية وضع البحوث في نظام تخثر الدم لمرض السل من خلال وجود عدد من المرضى الذين يعانون من نفث الدم الرئوي أو السل أو النزف الرئوي، وكذلك مضاعفات تخثر الدم في العلاج الجراحي لمرض السل. بالإضافة إلى ذلك ، يؤثر التدفق الكامن لعملية تخثر الدم داخل الأوعية الدموية المصاحبة بشكل طبيعي لمرض السل في مسار المرض وفعالية العلاج الكيميائي.

في المرضى الذين يعانون من انتشار السل الرئوي من عنصر التهاب نضحي من الانخفاض الملحوظ في النشاط منع تخثر الدم الدم. في المرضى الذين يعانون من انخفاض معدل انتشار آفة معينة في الرئتين مع غلبة تخثر الدم داخل الأوعية الدموية إنتاجية عنصر التهابات أعرب قليلا. في المرضى الذين يعانون من مرض السل الرئوي مع نفث الدم والرئة الدولة نزيف نظام تخثر الدم يختلف: في المرضى الذين يعانون من انخفاض خسارة الدم في gemoptoe ارتفاع أو مباشرة بعد انتهائها هناك زيادة حادة في القدرة تخثر الدم بسبب تكثيف شديد من trombinoobrazovaniya مع الحفاظ على زيادة تخثر "الهيكلية". في المرضى الذين يعانون من فقدان الدم الهائل ، لوحظ انخفاض في احتمال تجلط الدم بسبب انخفاض في تركيز الفيبرينوجين. نشاط العامل الثالث عشر ، عدد الصفائح الدموية. في مرحلة العلاج الجراحي في المرضى الذين يعانون من أشكال محدودة من السل الرئوي مع خروقات كبيرة تحدث نظام التوازن. المرضى الذين يعانون من عملية واسعة النطاق في تنفيذ pnevmon- أو plevropnevmonektomii في كثير من الأحيان تطوير مدينة دبي للإنترنت، والتي يمكن أن تتخذ شكل "المرض الثاني".

لرصد حالة من تخثر الدم في المرضى الذين يعانون ينبغي إجراء السل الرئوي من تحديد وقت تجلط الدم الجزئي تنشيط (APTT)، الفيبرينوجين، والوقت الثرومبين، مؤشر البروثرومبين وزمن النزف وزمن التجلط.

[24], [25], [26], [27], [28]

البحث الهرموني

الملاحظات التجريبية والسريرية الحديثة تشير إلى وجود تغيرات في الحالة الهرمونية في التهاب رئة محدد السلي. ثبت أن تصحيح الخلل في أنظمة النخامية الكظرية، الغدة النخامية، الغدة الدرقية وظيفة البنكرياس بالتزامن مع العلاج المضادة للسل تسهم في تفعيل تكون الألياف وإصلاح في التهاب محدد مكان.

يتم الحكم على حالة وظيفية للنظام النخامية الغدة الدرقية من قبل محتوى في مصل دم ثلاثي يودوثيرونين (T ₃ )، هرمون الغدة الدرقية (T ₄ )، الغدة النخامية هرمون تنشيط الغدة الدرقية (TSH). ثبت أن قصور الغدة الدرقية دون السريري تم الكشف في 38-45 ٪ من المرضى الذين يعانون من مرض السل الرئوي ، وغالبا ما يتم تشخيصه مع الأشكال المنتشرة والنافذ الليفي - الكهفي من هذه العملية. تحت هذه الأشكال نفسها أكثر خفضت بشكل كبير مستويات كل من T ₃ و T ₄ ، وهناك يأتي وجود خلل في هذه الهرمونات في شكل زيادة نسبة T ₄ / T _الصورة.

يتم تقييم وظيفة قشرة الكظر من مستوى الكورتيزول في مصل الدم، وظيفة الغدد الصماء في البنكرياس - تركيز الأنسولين المناعية المتفاعلة. في المرحلة الحادة من المرض المعدية ، تزداد الحاجة إلى الكورتيزول الداخلي والأنسولين. يشهد Hyperinsulinemia أيضا على مقاومة الانسولين في أنسجة الجسم ، والتي هي نموذجية لأي عملية التهاب نشطة ، على وجه الخصوص ، محددة. تحديد وظيفة جلايكورتيكود الغدد الكظرية مع السل الرئوي النشط يسمح لكشف وجود فرط الكالوري في غالبية المرضى. وينبغي النظر في مستويات طبيعية من تركيز الدم الكورتيزول في المريض مع التهاب المعدية في الفترة الحادة كما الفشل النسبي وظيفة جلايكورتيكود من قشرة الغدة الكظرية التي يمكن أن تخدم كأساس لعقد جرعات العلاج ببدائل كافية السكرية.

ما يقرب من ثلث المرضى الذين يعانون من مرض السل الرئوي يمكن أن يثبت أن مستوى الأنسولين في الدم لديهم منخفض جداً ويقترب من الحد الأدنى للقاعدة ، في حين أن 13-20٪ يلاحظون فرط الإنسولينية. كل من hypo- و hyperinsulinism النسبية هي عوامل الخطر العالية لتطوير انتهاكات التمثيل الغذائي للكربوهيدرات بدرجات متفاوتة. هذه التغييرات في النشاط الوظيفي للخلايا البائية من البنكرياس تتطلب مراقبة منتظمة لنسبة السكر في الدم في المرضى الذين يعانون من مرض السل والوقاية من مرض السكري في الوقت المناسب. بالإضافة إلى ذلك. هذا بمثابة مبرر إضافي لنفعية استخدام الجرعات الفسيولوجية للأنسولين في العلاج المعقد من مرض السل.

بشكل عام مستويات، وانخفاض هرمونات الغدة الدرقية وhypercortisolemia من الخلل وفرط الأنسولينية أكبر المنال في المرضى الذين يعانون من مسار حاد في عملية السل، مع تلف الرئة واسعة وأعراض حادة من التسمم السل.

التشخيص الميكروبيولوجي لمرض السل

تعتبر الدراسات الميكروبيولوجية ضرورية لتحديد المرضى المصابين بالسل ، والتحقق من التشخيص ، ورصد وتصحيح العلاج الكيميائي ، وتقييم نتائج العلاج ، وبعبارة أخرى ، من لحظة تسجيل المريض مع السل قبل خلعه.

وتستند جميع البرامج والمشروعات الوبائية إلى تقييم لعدد البذيرات البكتيرية ، التي لا يمكن القيام بها دون استخدام طرق مختبرية للكشف عن المتفطرات السلية. في دراسة استقصائية لما يسمى بالسكان غير المنظمين ، تبلغ النسبة المئوية للغزاة البكتيرية 70 أو أكثر ، مما يجعل الطرق المختبرية وسيلة فعالة بما فيه الكفاية لتحديد مرضى السل بين هذه المجموعة السكانية.

الطرق الميكروبيولوجية التقليدية لتشخيص مرض السل هي دراسات بكتيرية مجهرية وثقافية. الأساليب الحديثة تنظر في زراعة المتفطرة السلية في النظم الآلية ، وتحديد PCR. ومع ذلك ، فإن كل هذه الأساليب تتحد بالضرورة مع الأساليب البكتريولوجية الكلاسيكية.

مجموعة من المواد التشخيصية

تعتمد فعالية الدراسات المختبرية إلى حد كبير على جودة المواد التشخيصية. الامتثال لقواعد جمع وتخزين ونقل المواد التشخيصية والتنفيذ الدقيق لخوارزمية تقييم المريض يؤثر بشكل مباشر على النتيجة ويضمن السلامة البيولوجية.

للاختبار على مرض السل ، يتم استخدام مجموعة متنوعة من المواد. يرجع ذلك إلى حقيقة أن TB logkih- الشكل الأكثر شيوعا الآفات السل، والمواد الأساسية للبحوث النظر البلغم وأنواع أخرى من الرغامي للانفصال: العلوي إفرازات الجهاز التنفسي التي تم الحصول عليها بعد استنشاق الهباء الجوي: الغسيل الشعب الهوائية. الشلل القصبي المواد التي تم الحصول عليها عن طريق تنظير القصبات، وعبر الرغامى داخل الرئة خزعات من aspirates الشعب الهوائية، ومسحات الحنجرة، الإفرازات من الجروح ومسحات الله.

تزيد فعالية الأبحاث إذا تم إجراء مجموعة من المواد الخاضعة للرقابة من المريض. لهذا الغرض ، يتم تخصيص غرفة مجهزة خصيصًا أو يتم شراء سيارة أجرة خاصة. يعتبر جمع المواد إجراءً خطيرًا ، لذلك من الضروري جمع المواد للبحث ، ومراقبة قواعد السلامة المعدية.

يتم جمع المواد للاختبار على المتفطرة السلية في زجاجات معقمة مع أغطية ملولبة بشدة لمنع تلوث البيئة وحماية المواد المجمعة من التلوث.

يجب أن تلبي القارورة لجمع المواد التشخيصية المتطلبات التالية:

• يجب أن تكون مصنوعة من مواد مقاومة للتأثير ؛
• يجب أن تذوب بسهولة أثناء التعقيم.
• يكون الحجم الكافي (40-50 مل):
• لديهم فتحة واسعة لجمع البلغم (لا يقل قطرها عن 30 ملم) ؛
• يكون من السهل التعامل معها ، شفافة أو شفافة ، بحيث يمكنك تقييم كمية ونوعية العينة التي تم جمعها دون فتح الغطاء.

للحصول على نتائج البحث الأمثل ، يجب مراعاة الشروط التالية:

• جمع المواد قبل بدء العلاج الكيميائي.
• يجب جمع المواد اللازمة للدراسة قبل تناول الطعام والدواء في الصباح ؛
• للبحث من المستحسن جمع ما لا يقل عن 3 عينات من البلغم الصباحي. جمع البلغم لمدة 3 أيام متتالية ؛
• يجب تسليم المواد المجمعة إلى المختبر في أقرب وقت ممكن:
• في الحالة التي يكون فيها من المستحيل على الفور تسليم المادة إلى المختبر ، يتم تخزينها في الثلاجة عند درجة حرارة الهواء 4 درجات مئوية لمدة لا تزيد عن 48 ساعة ؛
• عند نقل المادة ، من الضروري مراقبة سلامة القوارير عن كثب.

تجمع البلغم بشكل صحيح هو المخاطية أو mucopurulent. الحجم الأمثل من البلغم المختبر هو 3-5 مل.

يتم جمع البلغم تحت إشراف طبيب محترف. يجب على الأشخاص المسؤولين عن جمع البلغم اتباع تنفيذ قواعد معينة:

• من الضروري أن توضح للمريض الغرض من الدراسة والحاجة إلى السعال لا اللعاب أو مخاط البلعوم ، ولكن محتويات الجهاز التنفسي العميق. ويمكن تحقيق ذلك نتيجة للسعال المنتج الذي يحدث بعد عدة (3 - 3) نفس عميق. من الضروري أيضا تحذير المريض بأنه يجب عليه أن يغسل فمه بالماء المغلي ، لإزالة الجزء الرئيسي من الميكروفلورا الذي ينمو في تجويف الفم وبقايا الطعام التي تعيق فحص البلغم.
• يجب على العامل الطبي المشارك في جمع البلغم ، بالإضافة إلى رداء الحمام وقبعة ، ارتداء قناع وقفازات مطاطية وساحة مطاطية ؛
• يقف خلف المريض ، ويوصى بإبقاء الزجاجة أقرب ما يمكن إلى شفتيه وفصله مباشرة إلى البلغم عند السعال ، ويجب أن يتم توفير تدفق الهواء بعيدًا عن العامل الصحي:
• عند الانتهاء من جمع البلغم ، ينبغي على العاملين الصحيين أن يغلقوا القنينة بغطاء بعناية وأن يقيّموا كمية ونوعية البلغم الذي يتم جمعه. ثم يتم وضع علامة على الزجاجة ووضعها في بيكسل خاص لنقلها إلى المختبر.

إذا كان المريض لا تنتج البلغم، في الليلة التي سبقت وفي الصباح يوم جمع المواد اللازمة لمنحه مقشع :. مستخرج من جذور الخطمي (mukaltin)، برومهيكسين، امبروكسول، وما إلى ذلك في وقت مبكر - أو تطبيق استنشاق غضب باستخدام المعدات التي يتم تركيبها في غرفة لجمع البلغم. لا تخضع المواد التي يتم جمعها بهذه الطريقة للحفظ ويجب فحصها في يوم الجمع. لتجنب "إعدام" لها في المختبر في الاتجاه يجب أن تجعل علامة خاصة.

إذا لم يتم إجراء الدراسات الميكروبيولوجية في هذا المرفق ، يجب أن يتم تسليم المواد التشخيصية المجمعة مركزيا للمختبر ، بشرط أن يتم حفظ المادة في الفترات الفاصلة بين الولادات في الثلاجة أو مع استخدام المواد الحافظة. تسليم المواد إلى المختبر في صناديق النقل ، والتي يمكن تطهيرها بسهولة. يجب أن يتم تزويد كل عينة بالتسمية المناسبة ، ويجب ملء الجزء بالكامل بنموذج مصاحب.

[29], [30], [31],

طرق وتكرار فحص المرضى

في المرحلة الأولية ، ما يسمى التشخيص ، فحص المريض لمرض السل ، من الضروري فحص ما لا يقل عن 3 أجزاء من البلغم لمدة يومين أو ثلاثة أيام. جمعها تحت إشراف العاملين في المجال الطبي ، مما يزيد من فعالية الفحص المجهري.

ينبغي إجراء الفحص الأولي لمرض السل من قبل جميع المؤسسات التشخيصية الطبية لنظام الرعاية الصحية. في الآونة الأخيرة ، تم تنظيم ما يسمى مراكز الفحص المجهري ، مجهزة بالمجهرات الحديثة والمعدات للسلامة الوبائية ، على أساس المختبرات التشخيصية السريرية لتحسين كفاءة الفحص الأولي.

في مرافق مكافحة السل ، يتم استخدام اختبار فحص يشمل فحص البلغم أو مواد تشخيصية أخرى لمدة 3 أضعاف على الأقل لمدة 3 أيام. خلال العلاج ، يتم إجراء الدراسات الميكروبيولوجية بانتظام مرة واحدة على الأقل شهريًا خلال مرحلة العلاج الكيميائي المكثف. عند الانتقال إلى مرحلة العلاج ، يتم إجراء الدراسات بشكل أقل - مع فترة تتراوح بين 2-3 أشهر ، في حين يتم تقليل تواتر الدراسة إلى اثنين.

ملامح مجموعة من المواد التشخيصية لمرض السل خارج الرئة

إن خصوصية المادة المرضية في الأشكال خارج الرئة من السل هو التركيز المنخفض من السل المتفطرات فيه ، والذي يتطلب أساليب أكثر حساسية للفحص الميكروبيولوجي ، أولا وقبل كل شيء ، طرق البذر على وسط المغذيات.

مع السل من الجهاز البولي التناسلي ، البول هو المادة الدراسية الأكثر سهولة. يجب أن يتم جمع البول من قبل ممرضة مدربة بشكل خاص.

يتم غسل الأعضاء التناسلية الخارجية بالماء بالصابون أو محلول ضعيف من برمنجنات البوتاسيوم. يتم علاج الفتحة الخارجية للإحليل بعناية. في قنينة معقمة ، يتم جمع جزء متوسط من البول صباح: في الرجال ، بطبيعة الحال ، في النساء ، وذلك باستخدام القسطرة. يتم جمع البول من الحوض الكلوي في أنابيب معقمة مع قسطرة واحدة أو كليتين ، في الحالة الأخيرة - بالضرورة بشكل منفصل عن كل كلية. يتم طرد كمية صغيرة من هذا البول ، ويتم فحص الرواسب.

في الرجال ، الحيوانات المنوية ، الخصية الموضعية ، يخضع سر البروستات للطرد المركزي للحصول على راسب. مع أي توطين لعملية محددة في منطقة الأعضاء التناسلية لدى الرجال ، يمكن أن يعزز تدليك البروستاتا إفراز الإفرازات التي تحتوي على المتفطرة السلية.

يتم جمع دم الحيض في النساء عن طريق امتصاص أو استخدام غطاء كافكا. يتم تحرير المواد التي تم الحصول عليها من خلايا الدم الحمراء ، وغسلها بالماء المقطر تليها الطرد المركزي. يتم فحص الراسب.

يتم جمع المخصصات من قناة عنق الرحم في بعض قشور كافكا أو سقفها ، أي أنه من المرغوب فيه تراكم 1-2 مل من المواد المرضية.

المواد التي تم الحصول عليها من التدخلات الجراحية على الكلى والأعضاء التناسلية. مع الخزعات ، كشط من بطانة الرحم ، تجانس. للقيام بذلك ، يتم وضعها في هاون عقيمة وسحقت تماما مع مقص العقيمة. لهذا الطين والرمل النهري وأضاف العقيمة في مبلغ يساوي وزنه، ثم تصدرت مع 0،5-1.0 مل متساوي التوتر محلول كلوريد الصوديوم، والمسحوقة كل شيء حتى كتلة فطيرة مع إضافة محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر (4-5 مل). ثم يتم السماح للكتلة لتستقر 1-1،5 دقائق ، يتم فحص طاف.

مرض السل في العظام والمفاصل. يتم وضع الثقب (صديدات الدمامل) التي يتم الحصول عليها باستخدام حقنة معقمة في أطباق معقمة وتسليمها على الفور إلى المختبر. ماصة معقمة ، مبللة سابقا مع محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر العقيمة ، تأخذ 2-5 مل من القيح ، ونقلها إلى زجاجة من الخرز وإضافة 2-3 مل أخرى من محلول كلوريد الصوديوم متساوي التوتر. يتم إغلاق الزجاجة مع الفلين وتهتز في جهاز مهرج لمدة 8-10 دقائق. يتم فحص تعليق المتجانسة.

في الأشكال العاصفة من مرض السل العلوي المفصلي ، يتم أخذ القيح من الناسور. يتم جمع التصريف الغزير مباشرة في أنبوب اختبار. في حالات الإفراز الهزيل للقيح ، يتم غسل الناسور بمحلول كلوريد الصوديوم المتساوي التوتر ، ويتم إرسال مياه الغسيل التي يتم جمعها في أنبوب اختبار أو قطعة من حشوة مشربة بالقيح إلى الدراسة.

المواد الجراحية التي تم الحصول عليها خلال عملية جراحية في العظام والمفاصل قد تتكون من الجماهير، قيحية نخرية، التحبيب، ندبة، النسيج العظمي غشاء زلالي وركائز أخرى. يتم تنفيذ العلاج ، كما هو الحال في مرض السل في الكلى.

يتم إجراء دراسة ميكروبيولوجية للسائل الزليلي في محلول سيترات الصوديوم بنسبة 3٪ (نسبة 1: 1) لمنع تجلط الدم بعد البزل مباشرة.

السل للغدد الليمفاوية. كما يتم فحص القيح المستخرج خلال ثقب العقد الليمفاوية. كما صديد من الخراجات. يتم فحص أنسجة العقد اللمفاوية التي تم الحصول عليها خلال التدخلات الجراحية ، الخزعات ، كما هو الحال مع أشكال أخرى من مرض السل.

تعتبر دراسة كتل البراز على داء المتفطرة نادرة للغاية ، وذلك بسبب النقص التام تقريبا في النتائج الإيجابية.

[32], [33], [34], [35], [36],

الفحص الميكوباكتري

المجهر البلغم هو وسيلة سريعة نسبيا وبسيطة وغير مكلفة التي ينبغي استخدامها في جميع الحالات المشتبه في مرض السل. بالإضافة إلى ذلك ، أجريت هذه الدراسة لتقييم فعالية العلاج الكيميائي والتأكد من استعادة أو فشل العلاج إذا لم يكن هناك اختبار ثقافة.

يتم استخدام طريقتين للفحص المجهري:

• طريقة الفحص المجهري المباشر ، عندما يتم تحضير اللطاخة مباشرة من المواد التشخيصية ؛
• طريقة الفحص المجهري للرواسب المحضرة من المواد المعالجة بالمطهرات للثقافة.

تستخدم الطريقة الأولى في تلك المختبرات حيث يتم إجراء الدراسات المجهرية فقط (المختبرات السريرية والتشخيصية للشبكة الطبية العامة).

يتم الحصول على أفضل نتائج الفحص المجهري من خلال تركيز المواد التشخيصية (على سبيل المثال ، عن طريق الطرد المركزي).

للكشف عن المتفطرة السلية مع احتمال 50 ٪ عند إجراء الفحص المجهري ، يجب أن تحتوي 1 مل من البلغم على أكثر من 5000 خلية ميكروبية. يحتوي عادةً على المرضى الذين يعانون من أشكال رئوية من السل كمية كبيرة من البكتيريا سريعة الحمض ، والتي تسمح لهم بالكشف عنهم بشكل موثوق من خلال تنظير البكتريا. يمكن تحسين الحساسية التشخيصية لهذه الطريقة من خلال فحص عدة عينات من البلغم من مريض واحد. لا تستبعد نتيجة سلبية لفحص البكتيريا تشخيص داء السل ، لأن البلغم لدى بعض المرضى يحتوي على كمية أقل من الميكوباكتيريا مما يمكن اكتشافه بالمجهر. يمكن أن يؤدي أيضًا سوء إعداد لطاخة البلغم إلى نتيجة سلبية لفحص البكتيريا.

الطريقة الأكثر شيوعا للكشف عن المتفطرات السريعة الحمضية في اللطاخة هي اللون وفقا ل Tsiol-Nelsen. تعتمد الطريقة على تغلغل fuchsin carbolic في خلية جرثومية من خلال غشاء يتضمن طبقة شحمية شمعية ، مع تسخين و عمل تنميش قوي من الفينول. يؤدي تغير لون اللطخة لاحقًا بمحلول 25٪ من حامض الكبريتيك أو حمض الهيدروكلوريك بنسبة 3٪ إلى تغير لون جميع التراكيب غير الحمضية. ملطخة عناصر اللطخة مع حل 0.3 ٪ من الأزرق الميثيلين. لا تتفقد المتفطرة الأصبغة الأنيلين المعتادة ، ونتيجة لذلك تكون الملطخة السريعة الحمضية ذات لون قرمزي أحمر ، وغيرها من الميكروبات والعناصر الخلوية - باللون الأزرق.

لدراسة المسحات الملطخة من قبل Tsilyu-Nelsen ، استخدم مجهر الضوء ثنائي العينين مع هدف الغمر (تكبير 90 أو 100 ضعف) وعدسة مع تكبير 7 أو 10 أضعاف. استكشاف 100 حقل من الرؤية ، وهو ما يكفي لتحديد المتفطرة الواحدة في اللطاخة. في حال كانت نتيجة هذه الدراسة سلبية ، للتأكيد فمن المستحسن أن ترى 200 مجال رؤية أخرى. سجل النتائج ، مشيرا إلى عدد العصيات سريعة الكشف عن الحمض (KUM).

بالإضافة إلى هذه التقنية ، يتم استخدام fluorochromes اللون للفحص المجهري الإنارة ، والذي يسمح بتحقيق أفضل النتائج. يزيد استخدام هذه الطريقة من كفاءة الفحص المجهري بنسبة 10-15٪. عند معالجة المتفطرة مع الأصباغ الانارة (auramine، rhodamine، الخ)، ترتبط هذه المواد أيضا بالبنى الشبيهة بالشمع في الخلية الميكروبية. عند إشعاع الخلايا الملونة بمصدر ضوء مثير (مجموعة معينة من الأشعة فوق البنفسجية) ، فإنها تبدأ في التوهج بالضوء البرتقالي أو الأحمر الفاتح على خلفية خضراء أو سوداء داكنة. بسبب السطوع العالي والتباين للصورة المرئية ، يمكن تقليل التكبير الكلي للمجهر 4-10 مرات ، يوسع مجال الرؤية ويقل زمن مشاهدة التحضير. جنبا إلى جنب مع هذا ، ونظرا لعمق أكبر بكثير من الميدان ، يمكنك زيادة راحة الدراسة.

عندما يتم استخدام الفحص المجهري الفلورسنت لعرض نفس المنطقة ، يمدد اللطخة وقت أقل بكثير من المجهر الضوئي لتلطيخ تسيل-نيلسن. إذا كان الميكروسكوب ليوم عمل يدرس ما بين 20 و 25 عينة من هذا القبيل ، فإنه بمساعدة الفحص المجهري الفلوري ، يمكنه فحص أكثر من 60-80 عينة في نفس الوقت. يعرف المجهرون ذوو الخبرة أن تلوين الخلايا بمزيج من auramine و rhodamine محدد بطريقة معينة للعصيات السريعة الحمضية ، والتي تبدو في هذه الحالة مثل العصي الذهبية. رسمت الرخويات باللون الأخضر.

ميزة أخرى هامة من طريقة المجهر الفلورسنت - القدرة على اكتشاف بكتيريا المتغيرة، فقد تحت تأثير العوامل السلبية، بما في ذلك العلاج الكيميائي المكثف والممتلكات kislotousotoychivosti ولم يتم الكشف في هذا الصدد مع تلوين تسيل-Nelsenu.

مساوئ طريقة المجهر مضان تشمل التكلفة العالية نسبيا من المجهر وتشغيله. ومع ذلك ، في المختبرات المركزية أو غيرها من المختبرات الكبيرة ، حيث تتجاوز الحمولة معيار 3 فنيي المختبرات الذين يعملون مع ثلاثة مجاهر تقليدية ، يكون استخدام مجهر فلوري واحد بدلاً من ذلك أرخص.

طرق البكتريا المجهرية لها خصوصية عالية إلى حد ما (89-100٪). يتم تأكيد حوالي 97 ٪ من النتائج الإيجابية التي تم الحصول عليها عن طريق أي طريقة من الفحص المجهري من نتائج البذر.

وتجدر الإشارة إلى أنه عند الفحص المجهري لطخة المواد المرضية ، فإنه من المستحيل تحديد الأنواع التي تنتمي إلى المتفطرات المعروفة بسرعة الحمض. طريقة المجهر يسمح لإبداء الرأي فقط على وجود أو عدم وجود حمض في إعداد الكائنات الحية الدقيقة، والتي يمكن تفسيرها من خلال وجود في الطبيعة من عدد كبير من تشبه شكليا لحمض nontubercular الكائنات المجهرية المقاومة معقدة المتفطرات السلية.

يتم تقييم نتائج الفحص المجهري في وحدات نصف كميّة.

من أجل أن تكون قادرة على مقارنة نتائج أساليب المجهر المختلفة ، يتم إدخال المعاملات التجريبية. على سبيل المثال، لمقارنة نتائج مسحات ملطخة الأصباغ الفلورية، وعلى ضوء الأبحاث بيانات المجهر (1000 مرات التكبير)، فمن الضروري تقسيم عدد من عصيات حمض سريعة الكشف عنها بواسطة المجهر مضان، ومعامل المقابلة في التكبير 250 أضعاف - إلى 10، 450 ضعفا - إلى 4 ، مع 630 أضعاف - إلى 2.

ملامح المجهر لمرض السل خارج الرئة

يتم إجراء الفحص المجهري المباشر ، وكذلك الفحص المجهري لطاخات أعدت بعد التخصيب ، تليها تلطيخ Tsiol-Nelsen أو الأصباغ الانارة. الفحص المجهري المباشر للمسحات غير فعال بسبب انخفاض تركيز المتفطرات في المادة ، وبالتالي يكون أكثر عقلانية في استخدام طرق الإثراء. الأكثر فعالية هو الطرد المركزي. وإذا كانت المادة البيولوجية هي لزجة، يتم تطبيق الطرد المركزي مع تسييل وقت واحد والتجانس من المواد، والتي يتم تنفيذها باستخدام عالية السرعة أجهزة الطرد المركزي مع قوة الطرد المركزي من 3000 غرام وهيبوكلوريت الحلول. لا يتم حالياً استخدام طرق أخرى للإثراء ، مثل التعويم الدقيق ، بسبب تكوين رذاذ ضار بيولوجيًا.

[37], [38],

الطريقة الثقافية لتشخيص مرض السل

طريقة الزراعة ، أو طريقة الزراعة ، أكثر حساسية من الفحص المجهري للتشهير ، ولها عدد من المزايا على هذه الأخيرة. إنه يسمح باكتشاف عدة عشرات من المتفطرات الحيوية في مواد الاختبار ولها قيمة تشخيصية كبيرة. هذا مهم بشكل خاص عند فحص المواد من المرضى المشخصين حديثًا أو المعالجين الذين يطلقون كمية صغيرة من المتفطرات.

مقارنة مع الفحص المجهري ، تسمح أبحاث الثقافة بزيادة عدد مرضى السل الذين تم تشخيصهم بأكثر من 15-25٪ ، بالإضافة إلى التحقق من داء السل في المراحل المبكرة ، عندما يكون المرض قابلاً للعلاج. من المزايا الهامة جدا لاختبار الثقافة هو إمكانية الحصول على ثقافة المثير التي يمكن تحديدها ودراستها فيما يتعلق بحساسية الدواء ، الفوعة وخصائص بيولوجية أخرى.

تشمل عيوب أساليب الزراعة مدتها (مدة انتظار المواد تصل إلى 10 أسابيع). تكلفة أعلى ، تعقيد معالجة المواد التشخيصية.

مبادئ المعالجة المسبقة للمواد التشخيصية

لا يمكن استخدام الطرق الميكروبيولوجية التقليدية في إجراء دراسات حول مرض السل. هذا يرجع إلى الحقيقة. أن السل المتفطرة ينمو ببطء شديد ، ومعظم العينات السريرية تحتوي على كائنات حية سريعة النمو سريعة التحلل وفاكهة حيوانية ، فطريات. النمو السريع في وسط غذائي غني يعيق تطوير المتفطرات ولا يسمح لتخصيص العامل المسبب لمرض السل، وذلك قبل زراعة المواد التشخيصية بالضرورة هو تعامل مسبقا. بالإضافة إلى ذلك ، عادة ما تُحاط الميكوباكتيريا المنبعثة من الشعب الهوائية للمريض بكمية كبيرة من المخاط ، مما يجعل من الصعب التركيز عليها. في هذا الصدد ، قبل زرع البلغم وغيرها من المواد المماثلة ، تسييلها ، وإزالة التلوث أمر ضروري.

جميع المنظفات و decontamins لها تأثير سمي أكثر أو أقل وضوحا على المتفطرة. نتيجة للمعالجة ، يمكن أن تصل إلى 90٪ من المتفطرة. للحفاظ على ما يكفي من السكان الفطرية، يجنب الحاجة إلى استخدام تقنيات المعالجة التي تسمح، من جهة، لمكافحة البكتيريا القيحية تنمو بسرعة وتفوح منها روائح كريهة ومن ناحية أخرى - للحفاظ على سلامة المتفطرات الحالية في هذه المادة.

اعتمادا على المواد، ودرجة من التجانس والتلوث لمرحلة ما قبل المعالجة باستخدام المطهر مختلف: البلغم - 4٪ هيدروكسيد الصوديوم حل، حلول trohzameschonnogo فوسفات الصوديوم 10٪، وكلوريد البنزالكونيوم، فوسفات ثلاثي الصوديوم، NALC-هيدروكسيد الصوديوم (N-أسيتيل-L-السيستين هيدروكسيد الصوديوم) بتركيز نهائي من 1٪ هيدروكسيد الصوديوم، في البول والمواد السائلة الأخرى - محلول حمض الكبريتيك 3٪، لعينات الملوثة، المواد التي تحتوي على الدهون - محلول حمض الأكساليك إلى 5٪. بالإضافة إلى ذلك ، في بعض الحالات ، يتم استخدام الإنزيمات ، السطحي (المنظفات). ويرافق استخدام Tween وبعض المنظفات الأخرى وفاة أصغر من الخلايا الفطرية (40-50 ٪ على قيد الحياة). ومع ذلك ، يمكن استخدامها فقط للمواد السائلة. أكبر توزيع في العالم كان NALC-NaOH. أنتجت في مجموعات. هذا الأسلوب يسمح لتخصيص أكثر من 85 ٪ من السكان من الخلايا الفطرية. إزالة التلوث tkanesoderzhaschih المواد الصلبة من الصعب تخمين لأن درجة تشتت المواد خلال التجانس صعوبة. على سبيل المثال، غالبا ما يترافق الخزعات علاج الغدد الليمفاوية عن طريق زيادة وتيرة التلوث مع النباتات الدخيلة. في هذه الحالة ، يمكن استخدام 1 ٪ من etonium.

يتم تجانس المواد غير متجانسة مع حبات الزجاج في وجود المطهرات. يتم فصل المواد السائلة بالطرد المركزي فقط ويتم التعامل مع راسب فقط.

تقنيات البذر والحضانة

بعد المعالجة المسبقة ، يتم طرد المادة بالطرد المركزي ، وبالتالي ترسب البكتيريا وزيادة محتواها في الرواسب ("تخصيب الحمأة"). يتم تحييد المترسب الناتج وتلقيح (يتم التلقيح) باستخدام وسائط أو أنابيب مغذية كثيفة مع وسائط سائلة (شبه سائلة). من بقية الرواسب ، يتم تحضير مسحات للفحص المجهري. يجب أن تمنع تقنية البذر عبر التلوث من المواد التشخيصية.

للحصول على تفسير سريري موثوق به لنتائج دراسة ميكروبيولوجية ، يجب ملاحظة القاعدة التالية: يجب إجراء الدراسات المجهرية والثقافات بشكل متوازي من نفس العينة من المادة التشخيصية.

توضع الأنابيب الملقاة في ترموستات عند 37 ^درجة مئوية لمدة يومين في وضع أفقي. وهذا يضمن امتصاص أكثر للمادة في وسط المزرعة. بعد يومين ، يتم نقل الأنابيب إلى وضع عمودي ويتم إغلاقها بإحكام باستخدام سدادات مطاطية أو سيليكون لمنع تجفيف الوسائط المزروعة.

يتم تحضين المحاصيل في 37 ^حول مئوية لمدة 10-12 أسابيع مع مشاهدة أسبوعية منتظمة. لكل معاينة ، يتم تسجيل المعلمات التالية:

• الفترة الملاحظة بصريا من يوم نمو الزراعة ؛
• معدل النمو (عدد CFUs) ؛
• تلوث المحصول عن طريق النباتات أو الفطريات الميكروبية الدخيلة (يتم إزالة هذه الأنابيب) ؛
• عدم وجود نمو واضح. تركت الأنابيب في الثرموستات حتى المشاهدة التالية.

وسائل الاعلام المغذيات

تستخدم وسائل غذائية متنوعة لزراعة المتفطرات. كثيفة ، شبه سائلة ، سائلة. ومع ذلك ، فإن أيا من وسائل الإعلام المغذية المعروفة لديه خصائص تضمن نمو جميع الخلايا الفطرية. فيما يتعلق بهذا ، يوصى باستخدام 2-3 مواد مغذية من تركيبة مختلفة في وقت واحد لزيادة الفعالية.

توصي منظمة الصحة العالمية ببيئة ليفنشتاين-جنسن كوسيلة قياسية للعزل الأساسي للعامل المسبب لمرض السل ولتحديد حساسيته للمخدرات. هذه بيئة بيض كثيفة يتم فيها الحصول على نمو المتفطرات في اليوم العشرين والعاشر والعشرين بعد زرع مادة إيجابية بكتيرية. تتطلب محاليل المواد السرطانية التي تسبب البكتيريا فترة حضانة أطول (حتى 10-12 أسبوعًا).

في بلدنا ، اقترح E.R. فين بيضة البيئة الفنلندي الثاني. وهو يختلف في ذلك ، بدلا من L-asparagine ، فإنه يستخدم غلوتامات الصوديوم ، والذي يطلق طرق أخرى لتوليف الأحماض الأمينية من المتفطرات. يظهر النمو في هذه الوسيلة في وقت سابق نوعا ما ، وتواتر تخصيص المتفطرات أعلى بنسبة 6-8 ٪ منه في وسط لوينشتاين - جنسن.

لتحسين فعالية التشخيص البكتريولوجي لمرض السل خارج الرحم ، فمن المستحسن أن تشمل وسائل الإعلام الفنلندي المعدلة في مجمع وسائل الإعلام المغذيات. لتسريع النمو ، إضافة إلى ثيوغلياكود الصوديوم 0.05 ٪ ، مما يقلل من تركيز الأكسجين ، إضافة إلى وسط المغذيات الفنلندي الثاني. لحماية أنظمة إنزيم من البكتيريا من المنتجات السامة من بيروكسيد الدهون في وسط المغذيات الفنلندي الثاني ، يضاف أسيتات α-tocopherol المضادة للأكسدة بتركيز 0.001 ميكروغرام / مل. يتم إجراء عملية زرع المواد التشخيصية وفقًا لإجراء قياسي.

في مختبرات مكافحة السل في روسيا ، تُستخدم أيضًا تعديلات أخرى لوسائل الإعلام المغذية الكثيفة ؛ اقترح G.G. Mordovian المغذيات المتوسطة "جديد" ، التي وضعتها V.A. وسائل الإعلام المغذيات النحاسية A-6 و A-9 ، إلخ.

يرجع ذلك إلى حقيقة أنه في عملية العلاج الكيميائي ضرر لمختلف أنظمة التمثيل الغذائي للخلايا الجرثومية، وبعض السكان الفطرية يفقد القدرة على تطوير عادة في وسائل الإعلام التقليدية والمواد الغذائية يتطلب توازنا osmotically سائل الإعلام والثقافة (أو شبه سائلة).

تقييم وتسجيل نتائج البذر من المواد التشخيصية

بعض السلالات والأنواع من الفطريات تنمو ببطء ، ويمكن أن يظهر النمو حتى في اليوم التسعين. عدد هذه المحاصيل صغير ، ولكن هذا يجعل من الممكن مقاومة المحاصيل في ترموستات لمدة 2.5-3 أشهر.

تنمو الثقافات الفيروسية من المتفطرة السلية في بيئات البيضة الكثيفة في شكل مستعمرات من النمط R من مختلف الأحجام والأنواع. المستعمرات الجافة ، والتجاعيد ، والعاج ، مصطبغة قليلا. في وسائل الإعلام الأخرى ، قد تكون مستعمرة السل المتفطرة أكثر رطوبة. بعد دورة العلاج الكيميائي أو أثناء العلاج ، يمكن تخصيص مستعمرات سلسة مع نمو رطب (نماذج S).

عند عزل المحاصيل ، يتم استخدام مجموعة من الدراسات الخاصة للتمييز بين السل المتفطرات من المتفطرات غير السل والالتهاب الرملي المقاوم للأحماض.

يتم إعطاء استجابة إيجابية بعد الفحص المجهري الإلزامي لطخة Tsiol-Nelsen الملطخة من المستعمرات المزروعة. في حالة نمو المتفطرات في المسحات ، تم العثور على عصي حمراء زاهية تكمن بشكل فردي أو في مجموعات تشكل مجموعات في شكل شعر أو ضفائر. في ثقافات الشباب، وخاصة معزولة عن علاج طويل الأمد للمرضى الذين يعانون من العلاج الكيميائي، المتفطرات تختلف تعدد الأشكال التي أعرب عنها، حتى وجود قضيب على شكل، جنبا إلى جنب مع الإصدارات قصيرة، تقريبا مكوراتي أو مستطيلة تشبه أفطورة.

يشار إلى معدل نمو البكتيريا من خلال المخطط التالي: (+) - 1-20 CFU في المختبر (إفراز الجرثومي ضئيل) ؛ (++) - 20-100 كفو في المختبر (إفراز البكتيرية المعتدلة) ؛ (+++) -> 100 CFU في المختبر (إفراز بكتيري وفيرة). في التشخيص المختبري لمرض السل ، لا يكفي الإجابة على ما إذا كان يتم الكشف عن المتفطرة عن طريق طريقة واحدة أو أخرى. لديهم فهم مفصّل لمدى وطبيعة تسمم الميكوبكتريا وتكوينه وخصائصه. هذه البيانات هي التي تسمح لنا بتفسير حالة العملية بشكل صحيح ، وتخطيط الخطط ، وتصحيح المعالجة في الوقت المناسب.

في السنوات الأخيرة ، لتسريع نمو المتفطرات ، تم اقتراح وسائل غذائية على أساس أجار بمختلف إضافات النمو واستخدام مزيج خاص من الغاز. للحصول على نمو المتفطرة على هذه الوسائط ، خلال الزراعة ، يتم إنشاء جو يحتوي على نسبة عالية من ثاني أكسيد الكربون (4-7 ٪). لهذا الغرض، استخدم الخاصة CO ₂ الحاضنة. ومع ذلك ، فإن الأنظمة الآلية الأكثر تطورا لزراعة المتفطرات: MGIT-BACTEC-960 و MB / Bact.

واحد مثل هذا النظام - نظام MGIT (نمو المتفطرات أنبوب مبينا)، والذي يشير إلى تطوير تكنولوجيا عالية ويقصد لتشخيص البكتريولوجي السريع لمرض السل المتفطرة والتعرض لأدوية الخط الأول، وبعض أدوية الخط الثاني. تركز MGIT على استخدامه كجزء من جهاز VASTES-960. تزرع الكائنات الدقيقة في أنابيب خاصة مع وسيط مغذ سائل يعتمد على الوسط المعدل في Middlebrook-7H9. لتحفيز نمو المتفطرات وقمع نمو البكتيريا الدخيلة ، يتم استخدام مكمل النمو MGIT وخليط من الأدوية المضادة للبكتريا.

يتم تسجيل نمو الكائنات الدقيقة بصريا. ويستند على الفلورة ، والذي يحدث عندما يتم استهلاك الأكسجين من قبل المتفطرات أثناء النمو. تم العثور على صبغ الفلوروكرومي تعتمد على الأوكسجين في الجزء السفلي من أنبوب اختبار خاص ومغطاة بطبقة من السيليكون. استنساخ المتفطرات يؤدي إلى نقص في كمية الأوكسجين في أنبوب والحد من التركيز الذي يسبب زيادة في مضان، التي تصبح مرئية تحت أشعة بواسطة أنابيب ضوء الأشعة فوق البنفسجية وphotosensor مسجلة تلقائيا مدمجة في الأجهزة VASTES-960. يتم تسجيل كثافة اللمعان بوحدات النمو (وحدات النمو GU). يتم تسجيل بيانات النمو في الكمبيوتر ، حيث يمكن حفظها تلقائيًا. تحليل الكمبيوتر من منحنيات النمو يمكن أن توفر معلومات عن وجود مجموعة متنوعة من حمامات الفطرية، بما في ذلك nontubercular، ويساعد أيضا على تقييم خصائص نمو المتفطرات.

ونتيجة لإدخال مثل هذه الأنظمة ، انخفض وقت نمو المتفطرات بشكل ملحوظ ، حيث بلغ متوسطها 11 يومًا على VASTES-960 و 19 يومًا على MB / Bact مقابل 33 يومًا على وسيط مغذي كثيف معياري. وتجدر الإشارة إلى أن هذه الأنظمة تتطلب موظفين مؤهلين تأهيلا عاليا. إن زرع المواد على وسائل الإعلام السائلة يرافق بالضرورة البذر على وسط ليفينشتاين-جنسن ، الذي يلعب دور الناسخ في الحالات التي لا تسبب فيها المتفطرة السلية نموًا في وسائل الإعلام الأخرى.

[39], [40], [41], [42], [43], [44],

تحديد حساسية الدواء من المتفطرة

إن تحديد الطيف ودرجة حساسية البكتيريا إلى الأدوية المضادة للسل له أهمية سريرية كبيرة ، فضلاً عن التقييم الوبائي لانتشار السل بمقاومة الأدوية. وبالإضافة إلى ذلك ، فإن رصد مقاومة الأدوية يجعل من الممكن تقييم فعالية برنامج السل ككل ، كمؤشر متكامل لأداء جميع مكونات أنشطة مكافحة السل.

تعدد وتوقيت حساسية الدواء:

• قبل بدء العلاج مرة واحدة لتحديد استراتيجية وتكتيكات العلاج:
• عندما يتم عزلها من الثقافات المريضة من مختلف المواد (البلغم ، سائل BAL ، البول ، الإفرازات ، الخمور ، الخ) ، يتم فحص جميع السلالات المعزولة:
• في نهاية المرحلة المكثفة من العلاج في غياب الديناميكيات الإكلينيكية والإشعاعية:
• إذا كان من الضروري تغيير نظام العلاج في الحالات التالية:
  • غياب لطاخة البلغم ؛
  • إعادة عزل الثقافة بعد اللطاخة سلبية اللطاخة ؛
  • زيادة كبيرة في عدد CMU في المسحة بعد الانخفاض الأولي. ومن المعروف جيدا أن سلالات من المتفطرة السلية ، والتي هي غير متجانسة من حيث حساسية الدواء ، يتم عزلها من المواد من مريض مصاب بالسل. قد تختلف حساسية السلالات للأدوية المضادة للسل في طيف المخدرات ، ودرجة وتواتر ومعدل حدوث المقاومة.

يتم تحديد درجة مقاومة الأدوية من السل المتفطرة وفقا للمعايير المعمول بها التي يتم توجيهها نحو الأهمية السريرية للمقاومة وتعتمد على النشاط antituberculous من المخدرات ، والدوائية ، وتركيزها في تركيز الآفة. الحد الأقصى للجرعة العلاجية وهلم جرا.

يتم حاليًا تحديد حساسية البكتيريا من الأدوية عن طريق الطرق الميكروبيولوجية:

• التركيزات المطلقة (طريقة التخفيف على وسائط المغذيات الكثيفة أو السائلة) ،
• النسب،
• معامل المقاومة.

عادة ، تتجلى المقاومة في شكل النمو المرئي الملحوظ لمستعمرات السل المتفطرة ، ولكن هناك طرق تحفز النمو في المراحل المبكرة من الانقسام الخلوي للميكوباكتيريا على شكل تفاعلات لونية. هذه الطرق تقصير وقت الاختبار من 3-4 أسابيع.

كما موحدة في روسيا وقد تم تمديد، الذي أوصت به لجنة منظمة الصحة العالمية طريقة العلاج الكيميائي تركيزات المطلقة، التي هي من الناحية المنهجية، هو الأكثر بسيطة، ولكنه يتطلب دقة عالية وتوحيد الإجراءات المخبرية. يتكون اختبار قابلية الدواء من مجموعة من أنابيب الاختبار ذات وسط غذائي معدّل بأدوية مضادة للسل. وتتألف هذه المجموعة من 2-3 الأنابيب مع تركيزات مختلفة من كل من الأدوية المستخدمة، وأنابيب عنصر تحكم واحد دون المخدرات على البيئة وأنبوب واحد تحتوي على 1000 ميكروغرام / مل من الصوديوم سالي tsilovokislogo أو 500 ميكروغرام / مل paranitrobenzoynoy nontubercular حامض للكشف عن نمو المتفطرات.

لتحضير مجموعة من الوسائط مع المستحضرات ، يتم استخدام وسيطة ليفنشتاين-جنسن المعدلة (بدون النشا) ، والتي يتم صبها في قوارير. في كل من هذه القوارير ، يضاف حجم معين من التخفيف الملائم للتحضير المضاد للحرارة. يتم خلط محتويات القوارير بدقة ، وصبها في أنابيب ومطوية في وضع مائل لمدة 40 دقيقة عند درجة حرارة 85 درجة مئوية. يوصى لفائف الوسيط في آلة لف مع تحكم أوتوماتيكي في درجة الحرارة. الأربعاء مع الأدوية المضادة للسل

يمكن تخزين السلسلة الأولى في الثلاجة عند 2-4 درجة مئوية لمدة شهر واحد ، مع الاستعدادات للصف الثاني - لا يزيد عن أسبوعين. تخزين الوسائط مع الاستعدادات في درجة حرارة الغرفة أمر غير مقبول. عند إعداد حلول الأدوية المضادة للسل ، يؤخذ نشاطها في الاعتبار ، ويحسب التركيز المعدل للوزن الجزيئي للجزء غير المحدد من التحضير ، والنقاء ، إلخ. لتحديد حساسية الدواء ، يتم استخدام المواد النقية كيميائيا فقط.

مبدأ الطريقة هو تحديد تركيز دواء مضاد للتجارب التي تمنع نمو جزء كبير من السكان المتفطرات. إذا تم القيام به بشكل صحيح ، فإن هذه الطريقة تتمتع بموثوقية جيدة.

قبل الاختبار ، من الضروري التأكد من أن الثقافة المعزولة لمرض السل البكتيري لا تحتوي على ميكروفلورا غريبة. من ثقافة الفطرية في 0.9 ٪ محلول كلوريد الصوديوم ، يتم إعداد تعليق متجانس يحتوي على 500 مليون جسم جرثومي لكل مل (معيار تعكر بصري من 5 وحدات). يتم تخفيف الملاط الناتج بنسبة 0.9٪ من محلول كلوريد الصوديوم (1:10) ويضاف 0.2 مل من الملاط إلى كل أنبوب من مجموعة وسائط التربية. توضع الأنابيب المصنفة في ترموستات عند 37 درجة مئوية ويتم الاحتفاظ بها في وضع أفقي لمدة 2-3 أيام بحيث يتم تطعيم السطح المنحدر من وسط المزرعة بشكل موحد مع تعليق السل المتفطرات. ثم يتم نقل الأنابيب إلى وضع عمودي وحضنت لمدة 3-4 أسابيع. يتم تسجيل النتائج بعد 3-4 أسابيع.

بما أن توقيت الإفرازات الطرحية من المادة السريرية على الوسائط الغذائية هو على الأقل 1-1.5 شهر ، يمكن الحصول على نتائج تحديد حساسية الدواء بهذه الطريقة في وقت لا يتجاوز 2-2.5 أشهر بعد زرع المادة. هذا هو أحد العوائق الرئيسية للطريقة.

تفسير نتائج تحديد حساسية الدواء من المتفطرات على أساس معايير معينة. على وسائل الإعلام الكثيفة ، تعتبر الثقافة حساسة لتركيز الدواء الموجود في الوسط إذا كان عدد مستعمرات الفطريات التي تنمو على هذا الأنبوب مع العقار لا يتجاوز 20 ، مع نمو وفير في أنبوب تحكم بدون أدوية. فقط في وجود أكثر من 20 مستعمرة تعتبر الثقافة مقاومة لهذا التركيز. في الواقع ، عند الحصول على نتائج النمو في أنابيب اختبار قريبة من 20 CFU. من الضروري إخطار الوحدة السريرية بأن الحساسية أو المقاومة في هذه الحالة هي خط الحدود ، لأنه في بعض الأحيان يمكن أن يفسر ديناميكيات المؤشرات السريّة.

بالنسبة للعديد من العقاقير ، يتم إنشاء تركيز معين ، يتم فيه ملاحظة تكاثر النسبة الحرجة من السلالات الفطرية. تسمى هذه التركيزات "بالغة الأهمية". كمعيار للاستقرار ، يتم استخدام نمو السكان من المتفطرات على وسط غذائي مع إعداد في تركيز حرج.

في ممارسة السل المحلية ، عند تحديد مقاومة الدواء ، فإنها لا تقتصر على تحديد التركيزات الحرجة فقط. هذا يرجع إلى الحقيقة. أن مستوى التعريف الموسع للمقاومة المخدرات يسمح الطبيب لموقف أكثر دقة العلاج الكيميائي تكتيكات استخدام المعرفة بالتالي يؤدي إلى عمل تركيبات المخدرات، تتقاطع المقاومة المتوقعة أو لتطبيق مجموعة الأدوية أكثر فعالية استخدام الأدوية المضادة للسل.

طريقة التركيز المطلقة هي أبسط ، ولكنها أيضا الأكثر حساسية للأخطاء التي تم إجراؤها عند تنفيذها. أكثر موثوقية ، وخاصة في تحديد الحساسية للأدوية الخط الثاني ، والشائعة خارج روسيا هي طريقة النسب. وهو يأخذ في الحسبان أوجه القصور في طريقة التركيز المطلق ، ولكنه في التنفيذ أكثر شاقة.

الطريقة مشابهة جدا لطريقة التركيز المطلقة. يتم تحضير أنابيب الاختبار بالأدوية بالطريقة نفسها. كما هو الحال في طريقة التركيز المطلق. ومع ذلك ، يتم تخفيض جرعة البذور من تعليق من المتفطرة السلية بعامل قدره 10. الذي يلغي تواتر المقاومة التلقائية لبعض سلالات السل المتفطرة لمثل هذه الأدوية مثل Etambutol ، protionamide ، capreomycin. كما يتم التحكم ، 2 أو 3 أنابيب مع جرعة البذور متساوية في أنابيب الاختبار ، تضعف على التوالي 10 و 100 مرة ، وتستخدم. معيار الاستقرار هو نسبة النمو الملحوظ المرئي من المتفطرة السلية. بالنسبة لعقاقير السلسلة الأولى ، فإن معيار الاستقرار هو الزيادة في نمو 1 ٪ من السكان الأولي ، بالنسبة لعقاقير الصف الثاني - أي بزيادة قدرها 1 أو أكثر من 10 ٪ من الأولي ، تبعا للتركيز النقدي المختار.

في عام 1997، قامت مجموعة عمل من منظمة الصحة العالمية والاتحاد الدولي لتحديد السل TB جيدة مقاومة المخدرات تعديلات على هذه المعايير، وتقدم يعتبر المتفطرات المقاومة، التي تنمو على وسائل الإعلام البيض الصلبة وفينشتاين جنسن في التركيزات التالية:

• داي هيدروستربتوميسين - 4 ميكروغرام / مل.
• isoniazid 0.2 ميكروغرام / مل:
• ريفامبيسين 40 ميكروغرام / مل:
• Ethambutol - 2 ميكروغرام / مل.

في عام 2001 ، تم اقتراح تراكيز حرجة لعقاقير الخط الثاني التالية (لنسبة حرجة من 1 ٪):

• capreomycin - 40 mcg / ml؛
• بروتوناميد - 40 ميكروغرام / مل.
• كاناميسين - 30 ميكروغرام / مل.
• فيوميسين - 30 ميكروغرام / مل.
• السيكلوسيرين 40 ميكروغرام / مل.
• حمض أمينيوساليسيليك - 0.5 ميكروغرام / مل.
• أوفلوكساسين - 2 ميكروغرام / مل.

يتم تقييم نتائج النمو بعد 4 أسابيع كإجراء أولي وبعد 6 أسابيع من الزراعة - كالنتيجة النهائية.

لتحديد حساسية الدواء لبيرازيناميد ، والذي يستخدم على نطاق واسع في العلاج الكيميائي الحديث لمرض السل ، فإن التركيز النقدي الموصى به هو 200 ميكروغرام / مل. ومع ذلك ، لا توجد حتى الآن طريقة مقبولة بشكل عام لتحديد مقاومة الدواء لهذا الدواء على وسائط المغذيات الصلبة ، لأن نشاطه المضاد للبكتيريا لا يتجلى إلا في الوسط الحمضي (الرقم الهيدروجيني <6) ، وهو ما يصعب من الناحية الفنية الحفاظ عليه. بالإضافة إلى ذلك ، العديد من الثقافات السريرية من السل المتفطرة على مضض تنمو على بيئات البيض مع بيئة حمضية.

لتقييم جودة نتائج تحديد حساسية الدواء من المتفطرات ، من المستحسن أن تتم مراقبة كل دفعة جديدة من وسط Levenstein-Jensen عن طريق تحديد موازٍ لحساسية سلالة H37Rv القياسية. بالإضافة إلى ذلك ، هناك بعض المعايير الميكروبيولوجية التي يجب الحفاظ عليها حتى تعطي التقنيات نتيجة جيدة استنساخها وتفسيرها بشكل صحيح. وتشمل هذه القدرة على بقاء ثقافة السل المتفطرة ، والقواعد الخاصة بالحصول على تعليق متجانس وتعليق ، وقواعد اختيار ثقافات المتفطرة السلية ، وتمثيل الكتلة البكتيرية المختارة. يقلل من موثوقية تحديد مقاومة الدواء مع إطلاق جرثومي نادرة للغاية.

في الآونة الأخيرة ، تم اعتبار طريقة لتحديد حساسية الدواء باستخدام الأنظمة الآلية واعدة. الأكثر مثالية في هذا المجال هي التطورات القائمة على VASTES MGIT-960. في هذه الحالة ، يتم تحديد حساسية الدواء من المتفطرة السلية على أساس طريقة معدلة للنسب. في عملية تحديد ، تتم مقارنة معدل نمو السل المتفطرة في أنبوب التحكم وفي أنابيب الاختبار مع المخدرات. لتحديد حساسية الستربتوميسين ، أيزونيازيد ، ريفامب-بيسين وإيثامبوتول ، يتم استخدام مكملات الإثراء والمضادات الحيوية المدرجة في مجموعة SIRE. لتحديد حساسية pyrazinamide ، استخدم مجموعة PZA. في سياق تعليق اختبار المتفطرة السلية تلقيح أنابيب اختبار مع المخدرات، فضلا عن أنابيب السيطرة مع تعليق أعيد 100 مرة لجميع العقاقير باستثناء بيرازيناميد، حيث وقف هو التخفيف من 10 مرات. معيار الاستقرار هو مؤشر النمو من المتفطرة من 100 GU عندما يتحقق النمو في أنبوب التحكم 400 GU (انظر "أساليب الثقافة لعزل المتفطرة"). يتم إجراء المحاسبة وتفسير النتائج تلقائيًا ويتم تعيينها من خلال المدخلات أو البرامج المحددة.

كما تركيزات حاسمة ، يتم استخدام تركيزات النهائية في أنبوب اختبار مع وسيط مغذ سائل. في الوقت الحاضر ، تم تطوير تركيزات حرجة لكل من أدوية الخط الأول والثاني. تجدر الإشارة إلى أن حساسية السل المتفطرة إلى السيكلوسيرين وحمض aminoalicylic يحدد فقط على وسائل الإعلام المغذيات البيض.

تفصيلا بروتوكول عمل النظام المذكور يسمح لدراسة حساسية العقاقير مثل الثقافة مخصص (كثافة متوسطة المواد الغذائية)، واستخدام المتفطرة MGIT النمو الأساسي في المختبر. الخيار الأخير يقلل بشكل كبير من الوقت للثقافة، مما يسمح لك للحصول على النتائج الكاملة للثقافة المتفطرة السلية (بما في ذلك معلومات عن حساسية العقاقير) بعد 3 أسابيع من تاريخ مجموعة من المواد، في حين أن الطريقة التقليدية من الممكن الحصول فقط الشهر 3RD. بمرور الوقت ، يمكن أن تكون النتائج التي يتم الحصول عليها ، عندما يكون المريض في مرحلة مكثفة من العلاج ، تعوض التكلفة المرتفعة نسبيا للأبحاث.

[45], [46], [47], [48], [49], [50], [51],

التمايز من المتفطرة

مع الأخذ في الاعتبار أن المواد الغذائية المستخدمة ليست انتقائية بدقة. يتم التعرف على التمايز اللاحق للمتفطرات المعزولة باعتبارها إلزامية. الحاجة إلى التفريق بين المتفطرات ويرجع ذلك إلى عدد من الميزات من العمليات المرضية الناجمة عن جنس: مسار مختلف ونتائج السل وداء المتفطرات، فإن وجود مقاومة الأدوية الطبيعية لبعض الأدوية المضادة للسل.

ومن المسلم به أن تحديد الأساسي من المتفطرة السلية مجمع M. Nontubercular من المتفطرات يتم تنفيذ بالخصائص التالية: معدل النمو على وسائل الاعلام الصلبة المواد الغذائية، وتصبغ، مورفولوجيا مستعمرة، فإن وجود مقاومة الأحماض ودرجة الحرارة نمو الأمثل.

للأسف، لا توجد طريقة مختبر واحد للتمييز موثوق السل م المتفطرات معقدة من أخرى عصيات حمض السرعة، مع ذلك مزيج من الميزات المذكورة أعلاه مع النتائج الواردة أدناه عدد من الاختبارات البيوكيميائية يسمح بتحديد مجمع المتفطرة السلية مع M. عرضة لل 95٪.

لتمايز المتفطرة معقدة M. السل (الدرن M.، M. البقرية، M. BovisBCG، M. الإفريقي، M. العكبرية، M. Canettii وغيرها) من المتفطرات بطيئة النمو المستخدمة nontubercular الاختبارات الكيميائية الحيوية الأساسية التي تكشف عن وجود الأعراض التالية:

• القدرة على إنتاج حمض النيكوتينيك (اختبار النياسين):
• nitrate reductase activity؛
• كاتلاز للحرارة
• نمو في المتوسط مع ساليسيلات الصوديوم (1 ملغ / مل).

كما اختبارات إضافية ، ويمكن أيضا أن تستخدم النمو على المتوسطة التي تحتوي على 500 ميكروغرام / مل من حمض paranitrobenzoic أو 5 ٪ كلوريد الصوديوم.

العديد من المختبرات البكتريولوجية تحدد هذه الكائنات الدقيقة فقط على مستوى المجمع ، والذي يرجع إلى القدرات المحدودة للمختبرات والقدرات المنهجية للمتخصصين.

في معظم الحالات، ومع ذلك، في الممارسة العملية للتمييز بين M. السل وM. البقرية غير كافية الاختبارات التالية: النياسين، لوجود نترات، وتسجيل حضور والنمو pirazinamidazy في المتوسط تحتوي على 2 ميكروغرام / مل هيدرازيد من حمض ثيوفين 2-متيل. يؤخذ في الاعتبار أن المتفطرة السلية لمرض السل تتميز بمجموعة الأحرف التالية:

• النمو البطيء (أكثر من 3 أسابيع) ؛
• درجة حرارة النمو في نطاق 35-37 ^درجة مئوية ؛
• غياب التصبغ (العاج) ؛
• علامة حمضية سريعة اللون ؛
• اختبار النياسين الإيجابي ؛
• اختبار إيجابي نترات اختزال ؛
• غياب الكاتلاز الحراري (68 ^درجة مئوية).
• عدم وجود نمو على وسيط Levenstein-Jensen يحتوي على:
  • 1000 ميكروغرام / مل ساليسيلات الصوديوم ،
  • 500 ميكروغرام / مل من حمض paranitrobenzoic ،
  • 5 ٪ كلوريد الصوديوم:
• نمو في وجود 1-5 ميكروغرام / مل thiophene-2-carboxylic acid.

وستزداد أهمية التمايز بين الفطريات المعزولة زيادة ملحوظة مع زيادة وتيرة تسجيل حالات الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية / الإيدز المرتبطة بالسل أو فطريات الميكوباكتريوس. في الوقت الحاضر ، لا يوجد يقين مطلق من استعداد المختبرات الإقليمية العملية لإجراء هذا الحجم من العمل بشكل صحيح.

[52], [53], [54], [55], [56], [57], [58], [59]

التشخيص المناعي لمرض السل

هناك عدد من الظواهر العالمية والمخدرات والاختبارات المناعية التي وجدت في الأصل على وجه التحديد مع مرض السل أو على نموذج الاستجابة المناعية للمتفطرات. وتشمل هذه العوامل BCG و tuberculin ، وهي ظاهرة مثل GZT الجلدي (اختبارات tuberculin - تفاعلات بيرك ومانتو) ، رد فعل على الحقن تحت الجلد من tuberculin إلى حيوان متحسس (ظاهرة Koch). تم الكشف أيضا واحدة من الأجسام المضادة الأولى في الأمراض المعدية في مرض السل. وبطبيعة الحال ، كلما كان فهم آليات المناعة المضادة للحرّية ومراقبتها الجينية أكثر عمقًا ، قد يكون الاستخدام الأوسع نطاقاً للطرق المناعية والعقاقير التي تؤثر على المناعة من أجل حل المشاكل العملية في علم الأمراض.

تعتبر المشكلة العملية الأكثر أهمية وصعوبة في الوقت الحالي هي الكشف عن مرض السل في عملية الفحص الشامل للسكان. ومع ذلك ، على الرغم من التقارير العديدة عن "النجاحات" (على مواد محدودة) ، لا توجد طريقة مناعية مناسبة (قابلة لإعادة إنتاج "أي سلاح") وعقار مناسب لهذا الغرض.

الطرق المناعية ، ولا سيما الدراسات المصلية (تحديد المستضدات ، الأجسام المضادة) والاختبارات التي تستخدم في تحفيز التوبكولين تستخدم على نطاق واسع في الممارسة السريرية.

في المقام الأول بين الدراسات المناعية المستخدمة في التشخيص التفريقي ، هناك طرق مصلية - تحديد المستضدات والأجسام المضادة في بيئات مختلفة من الجسم.

تعتمد خصوصية الأجسام المضادة على المتفطرة السلية على المستضدات المستخدمة في المقايسة المناعية. تم اقتراح كمية كبيرة من المستضدات ، وأولها هو Tuberculin PPD:

• PAP والمستحضرات الأخرى المعقدة من سائل الثقافة ؛
• تفكك بالموجات فوق الصوتية
• خلاصة Triton والمستحضرات المعقدة الأخرى لجدران الخلايا ؛
• 5 مستضد (دانيال) ؛
• 60-antigen (Coccito)؛
• lipoarabinomannan.
• عامل الحبل السري (trehalose-6،6-di-mycollate) ؛
• الفينولية وغيرها من الجليكوليبيدات.
• lipopolysaccharide في.
• مستضد ارتباط الفبرونكتين ؛
• البروتينات (في الغالب إعادة تجميعها) ؛ 81.65،38،34،30،19،18،16،15.12 CDA، etc.

نتيجة لسنوات عديدة من الأبحاث التي أجراها العلماء الروس والأجانب ، تم الكشف عن الأنماط الرئيسية لتشكيل الأجسام المضادة وفعالية التشخيص السلّي لمرض السل: فكلما كان المستضد أكثر تعقيدًا ، كلما زادت حساسية الاختبارات ونقصها. خصوصية في بلدان مختلفة بالاعتماد على سكان M. عدوى السل والمتفطرات nontubercular من القيام قاح BCG وغيرها. في الأطفال، ومحتوى المعلومات من تشخيص مصلي هو أقل منه عند البالغين. في مرض السل الأساسي (الأطفال في أغلب الأحيان) ، يكون تعريف IgM أكثر إفادة. مع IgG الثانوي. في المرضى المصابين بفيروس نقص المناعة البشرية ، يتم تقليل القيمة الإعلامية من serodiagnosis في تحديد الأجسام المضادة. تقرير كفاءة الأجسام المضادة يعتمد على عدد من "الجوانب السريرية": نشاط عملية (وجود أو عدم وجود "العزلة" المتفطرات اضمحلال تسوس الأسنان، ودرجة تسلل)، وانتشار عملية، ومدة تدفقها.

حساسية طريقة المقايسة المناعية (ELISA) حوالي 70 ٪. يعزى عدم كفاية فعالية الدراسة إلى خصوصية منخفضة. سابقا ، تم النظر في إمكانية استخدام الفحص المصلية في المجموعات المعرضة للخطر ، ولا سيما بين الأشخاص الذين يعانون من تغيرات ما بعد السل في الرئتين.

لتعزيز خصوصية ELISA مواصلة البحث عن مستضدات أكثر تحديدا، بما في ذلك تلك التي تنتجها الهندسة الوراثية: (انظر أعلاه) ESAT-6، وغيرها .. استخدام مستضدات محددة بدقة (38 كيلو دالتون ، ESAT) يزيد من الخصوصية. ولكن يقلل بشكل كبير من حساسية التحليل. جنبا إلى جنب مع IFA (نظم الفحص المخبري التجريبي. على سبيل المثال Pathozyme ELISA عدة) كما تقدم مجموعات مع الترشيح الجانبي المناعي (Mycodot)، فضلا عن اختبارات أخرى مماثلة (الدوت التحليل على الغشاء) مع تقييم بصري لنتيجة الاختبار. خلال هذه الاختبارات ، يتم إجراء التحليل لمدة 10-30 دقيقة ؛ لا تتطلب معدات خاصة ، بل تتطلب تقييماً مرئياً للنتائج ، وهو ما يرتبط ببعض الذاتية. هذه الأساليب لها نفس خصائص الحساسية والخصوصية (70 ٪ و 90-93 ٪ ، على التوالي) كما ELISA التقليدية.

إن استخدام طرق التحليل المناعي له قيمة محددة كقيمة إضافية ، تؤخذ بعين الاعتبار في مجموعة الطرق المستخدمة ، في التشخيص التفريقي لمرض السل ، خاصة في تشخيص أشكاله خارج الرئة. الطريقة الأكثر فعالية ELISA هي في تشخيص التهاب السحايا السل في دراسة السائل النخاعي. في هذه الحالة ، تكون حساسية التحليل 80-85٪ ، وخصوصية 97-98٪. هناك بيانات عن فعالية الكشف عن الأجسام المضادة لمرض السل المتفطرة في السائل المسيل للدموع في تشخيص التهاب القز السلي.

تحريض غاما interferon التوليف في المختبر

جاما إنترفيرون (IFN-γ) هو عامل دفاع مناعي محدد يتحقق من خلال تنشيط أنظمة إنزيم البلعوم. تحريض تخليق IFN-γ بواسطة الخلايا اللمفاوية التائية يسبب تفاعلها مع المستضدات من المتفطرات.

كما المستضدات المستخدمة باسم PPT توبركولين. ومستضدات معينة، الحصول عليها عن طريق الهندسة الوراثية، في مستضدات معينة ESAT-6 (يفرز في وقت مبكر مستضد وجود الوزن الجزيئي 6 كيلو دالتون) وCFP 10 (ثقافة البروتين الراشح 10 كيلو دالتون). تغيب الهندسة الوراثية أو المستضدات المؤتلفة في خلايا لقاح BCG وغيرها من المتفطرات. عند استخدام نتائج اختبار السلين IFN-γ تحريض غير قابلة للمقارنة مع نتائج اختبار الجلد السلين (علاقة طردية). عند استخدام المستضدات المهندسة وراثيا ، تكون نتائج الاختبار أكثر تحديدًا ولا تعتمد على التطعيم السابق لـ BCG. عند اختبار الأشخاص الذين تم تطعيمهم الذين لم يكن لديهم اتصال مع عدوى السل ، فإن خصوصية الاختبار تبلغ 99٪. تختلف حساسية الاختبار بين مرضى السل من 81 إلى 89٪.

وقد وضعت اختبارات وأدوات التشخيص على أساس زراعة على المدى القصير من الخلايا أو خلايا الدم وحيدات النوى كله معزولة من الدم مع مستضدات من المتفطرة السلية في المختبر مع قرار لاحق من تركيز IFN-γ أو عن طريق حساب عدد الخلايا اللمفاوية التائية التي توليف IFN-γ. يتم تحديد تركيز الإنترفيرون المركب في أنبوب اختبار بواسطة ELISA باستخدام الأجسام المضادة أحادية النسيلة ملزمة IFN-γ. ثم ، من خلال معايرة معيار IFN-γ ، يتم تحديد تركيزه في أنبوب الاختبار أو آبار اللوحة.

عند إجراء اختبار Elispot ، فإن عدد الخلايا اللمفاوية T-synthesizing IFN-γ. يتم حسابها على سطح صفيحة مغطاة بأجسام مضادة لـ IFN-γ.

يقول مطورو التشخيص على أساس تحريض IFN-γ في المختبر ، الذي وافقت عليه الوكالة الأمريكية للأدوية والمنتجات ، إنه من المستحيل التمييز بين الإصابة بالسل الكامن من السل النشط بمساعدة الاختبار. لذلك ، في المناطق ذات مستوى عالٍ من العدوى ، لا يكون الاختبار تشخيصيًا بشكل مباشر. ومع ذلك ، في بلدنا يمكن استخدامه للتمييز بين الإصابة بالسل لدى الأطفال من حساسية ما بعد التطعيم ، وتقييم مستوى المناعة المحددة في عملية المعالجة.

في الوقت الحاضر ، تجري دراسة نظام الاختبار المحلي لتحديد تحريض توليف IFN-by بواسطة مستضدات محددة لمرض السل في المختبر.

حالة المناعة ودورة السل ، التصحيح المناعي

في عملية علاج مرض السل في البشر ، هناك تغييرات في مستضد antigenemia وحالة جهاز المناعة.

البيانات حول التغيرات في الإفرازات والأنسجة متناقضة إلى حد كبير. الشيء الوحيد الذي يمكن ملاحظته مع سبب وجيه هو أنه في الأورام الحبيبية السلية ، وكقاعدة عامة ، يتم الكشف عن عدد كبير من الخلايا التائية اللمفاوية المنشطة.

من المنطقي أن أتطرق إلى حكمين آخرين ضروريين لفهم دور الآليات المناعية في علاج مرض السل في البشر:

• يعاني مرضى الإيدز من ارتفاع شديد في مقاومة العقاقير المتعددة ؛
• مع مقاومة متعددة للأدوية (وفي غياب العدوى بفيروس نقص المناعة البشرية) ، فإن اضطرابات المناعة (خاصةً ارتباط الخلايا T) ذات أهمية خاصة.

عندما السل تطبق على نطاق واسع أساليب مختلفة من المناعة: هو في المقام الأول الأدوية المؤثرة في المقام الأول على مناعة T-الخلية ونظام البالعات وحيدات النوى (الهرمونات التوتة، isophorone، likopid، polioksidony وآخرون). فضلا عن المتكتلة الكاملة (الموهنة) ومكوناتها.

التشخيص الجزيئي والبيولوجي لمرض السل

للحصول على طرق البيولوجيا الجزيئية في تشخيص الأمراض المعدية تشمل، بشكل رئيسي، وأساليب تقوم على التلاعب مع المواد الجينية من مسببات الأمراض البكتيرية والفيروسية لتحديد الصفات الوراثية المحددة - شرائح DNA وجود تسلسل النوكليوتيدات محددة لنوع معين أو الممرض سلالات لتحليل محددة تسلسل الحمض النووي في الجينات التي تحدد حساسية الممرض لبعض المواد الطبية ، وكذلك للتحليل الوظيفي نشاط جينات معينة من الممرض. كانت التقنيات البيولوجية الجزيئية على نطاق واسع في مجال البحث العلمي والتطبيق العملي في تشخيص ورصد مختلف الالتهابات البكتيرية والفيروسية بعد فتح في عام 1985، كاري Myullisom (الحائز على جائزة نوبل 1989) تفاعل البلمرة المتسلسل.

مبادئ وإمكانيات طريقة تفاعل البوليميراز المتسلسل

يسمح PCR لتضخيم (تكاثر) في المختبر تسلسل nucleotide (جزء الحمض النووي للممرض) لعدة ساعات في ملايين المرات. يحدد التفاعل في وجود سلاسل الحمض النووي الأحادية حساسية عالية للغاية للمقايسة.

يحدد تسلسل النوكليوتيدات لمناطق معينة في سلسلة الحمض النووي الهوية الجينية للكائنات الحية الدقيقة ، والتي تشرح خصوصية PCR العالية.

قيمة هذه التقنية للكشف والتحقيق في الخصائص الناجمة عن الخصائص البيولوجية المتفطرة السلية من الكائنات الحية الدقيقة وجود نمو بطيء للغاية: مضاعفة وقت المتفطرة السلية DNA عند زراعة هي 12-24 ساعة.

مبدأ طريقة PCR يتكون في التضخيم - متعددة ، ملايين المرات. مضاعفة أجزاء تسلسل DNA محدد في ميكروفولومي أنبوبي خلال تكرار دوري لمراحل التفاعل الثلاث التالية ، كل منها يمر في نظام درجات حرارة مختلفة:

• المرحلة الأولى - تمسخ الحمض النووي المزدوج الشريطة عند التسخين مع اختلاف سلاسله ؛
• المرحلة الثانية - الربط التكميلي (التهجين) للبرايمرات (قليلات النيوكليوتيد) مع المقاطع الطرفية من سلاسل محددة بدقة ، والتي تم اختيارها لتكاثر شظية الدنا ؛
• المرحلة الثالثة - إتمام سلسلة شظية الحمض النووي باستخدام بوليميراز الحمض النووي للحرارة.

لتضخيم في المختبر ، يجب أن يكون هناك جزيئات من الحمض النووي مصفوفة. أربعة أنواع من ثلاثي الفوسفات deoxynucleoside (النوكليوتيدات) التي تحتوي على القواعد النيتروجينية المقابلة: الأدينين (A) ، الثايمين (T) ، الجوانين (D) ، السيتوزين (C) ؛ مركبات أولونجوكليوتيد متكوِّنة اصطناعيا (بادئات) تتكون من 18-20 زوج قاعدي ؛ بالحرارة DNA بوليميريز انزيم جود الأمثل درجة حرارة 68-72 ^على C، وأيونات المغنيسيوم.

خصوصية PCR يعتمد على اختيار جزء الحمض النووي. وفقا لهذا ، يتم توليف oligonucleotides بذلة الجناح. ويرجع الفضل في خصوصية التهجين وإنجاز سلسلة الحمض النووي إلى مبدأ التكامل بين أزواج القواعد الآزوتية التالية: الأدينين ، الثايمين ، الجوانين ، السيتوزين.

لتحديد الجيني السلي المتفطرات مجمع الأكثر كفاءة التضخيم الهدف في معظم النظم اختبار اختيار جزء DNA من IS6110، والتي في معظم سلالات من جينوم المتفطرة السلية لديها عدد كبير (10-20) من التكرار، الذي يوفر، جنبا إلى جنب مع خصوصية وحساسية عالية للفحص. في نفس الوقت يتم وصف سلالات من المتفطرة السلية مع عدد قليل من تكرار أو عدم وجود جزء IS6110.

عزل جزيئات الدنا من عينة بيولوجية

لتنفيذ PCR ، يجب عزل جزيئات الحمض النووي للممرض من المادة البيولوجية في حجم صغير ، مع الحد الأدنى من الدنا غير محدد ومثبطات مختلفة من polymerase الانزيم.

يجب أن يتم تحضير العينات تحت الظروف التي تمنع تلوث العينات عن طريق جزيئات DNA المعزولة. للقيام بذلك ، فإن المعالجة المسبقة للغرفة بالأشعة فوق البنفسجية والأرضيات وأسطح العمل من المكاتب والأجهزة ضرورية مع الحلول المحتوية على الكلور. أيضا استخدام الإلزامي من القفازات النظيفة ، وأنابيب اختبار القابل للتصرف ونصائح على الماصات الآلية.

لعزل الحمض النووي المتفطرة السلية من العينات السريرية (السائل المخي الشوكي، وغسل القصبي) لا تحتوي على عدد كبير من الخلايا، والحطام الخلوي، أو الأملاح منها، كافية لأجهزة الطرد المركزي العينة في 3-4000. دورة في الدقيقة، إضافة إلى حمأة 20-30 ماي من 2٪ محلول تريتون X-100 وتحسنت بنسبة 90 ^حول مئوية لمدة 30 دقيقة.

لإعداد عينات البلغم يجب أن يكون تسييل كفاءة، والذي يستخدم عادة للتوصل إلى حل 4٪ من هيدروكسيد الصوديوم وN-أسيتيل-L-السيستين (NALC) بمبلغ 50-80 ملغ لكل عينة - اعتمادا على اللزوجة عينة. يجب تحضير محلول NALC على فترات مؤقتة أو يمكن إضافة مسحوق NALC الجاف إلى العينة مباشرة. بعد التسييل ، ينبغي الطرد المركزي للعينات لمدة 15 دقيقة عند 3.5-4000 دورة في الدقيقة (3000 جم) في قوارير سعة 50 مل مع قبعات ملولبة ، ط. تحت نفس الظروف الموصى بها لإعداد البلغم.

لاستخراج الحمض النووي من طريقة بيليه يستخدم في معظم الأحيان على أساس استخدام حل 5-6 الرحى من غوانيدين ثيوسيانات تحلل كاشف كما الجسيمات الصغيرة التي يسهل اختراقها وأكسيد السيليكون ( "الأرض دياتومي") sorbing جزيء DNA. تم استخدام مواد غير محددة، بما في ذلك مثبطات المحتملة، ثم غسلها في حل 2،5 الرحى من ثيوسيانات guanidinium وحل الإيثانول، وبعد ذلك يتم المستوعبة جزيء الحمض النووي في الماء، وهذه العينات لإجراء PCR. لتبسيط تقنية استخراج الحمض النووي ، غالباً ما يتم استبدال "تراب الدياتومي" بالجسيمات المغناطيسية الدقيقة المغلفة بأكسيد السليكون. في هذه الحالة ، يتم استخدام حامل مغناطيسي خاص للميكروتوب بدلاً من الطرد المركزي لترسيب الجسيمات.

في روسيا ، تم تطوير طريقة أصلية للفصل المناعي للمتفطرات ، تليها استخراج الحمض النووي للممْرِض. لالمتفطرة السلية الفصل immunomagnetic باستخدام ferroparticles حجم 3-5 ميكرون، المغلفة مع السيليكا، والتي يتم تركيبها من قبل بولكلونل الروابط الكيميائية (أرنب) الأجسام المضادة لمرض السل المتفطرة. يتم تحييد عينات من البلغم بعد التحلل القلوي مع محلول حمض الهيدروكلوريك الحامضي وحضنت مع مادة ماصة مغناطيسية. ثم يتم جمع الجسيمات المناعية بقضيب مغناطيسي مع طرف قابل للاستبدال ، يتم نقله إلى ميكروتوب ، وترسب. أضف 20-30 ميكرولتر من محلول تريتون X-100 بنسبة 2٪ ودافئ لمدة 30 دقيقة عند 90 ^درجة مئوية. يستخدم هذا المستحضر كقالب DNA لتحليل PCR.

مشكلة صعبة هي عزل الحمض النووي السل المتفطرة من عينات الخزعة. لخزعة الإنزيم ، يتم استخدام إنزيم بروتين K عند تركيز نهائي من 200-500 ملغم / لتر عند درجة حرارة 56 ^درجة مئوية خلال الليل. علاوة على ذلك ، يتم استخدام واحدة من الطرق المعروفة. الحمض النووي غير النوعي الزائد في تحليل PCR للخزع الثديية غالبا ما يسبب تثبيط التفاعل ، والذي يتطلب استخراج الحمض النووي بشكل متكرر.

طرق للكشف عن النتائج

بعد الانتهاء من التفاعل ، يتم تحديد شظايا الحمض النووي من تضخم الممرض بطرق مختلفة.

طريقة الرحلان الكهربائي معروفة جيداً. يتم تحديد جزء الحمض النووي الناتج عن طريق تحكم موجب يحتوي على جزء DNA المحدد المطلوب ، أو وفقًا لحجم معروف (عدد أزواج النوكليوتيدات) للجزء ، والذي يتم تحديده باستخدام علامة جزيئية قياسية.

في وجود صبغة محددة ، يتم تضمين بروميد الإيثيديوم في الحمض النووي المزدوج تقطعت بهم السبل. يتم الكشف عن جزء الحمض النووي توليفها باعتبارها الفرقة مضيئة في إطار عمل الأشعة فوق البنفسجية.

يجب أن يتوافق حجم شظية الدنا ، التي يحددها الرحلان الكهربائي من المسافة من البداية ، إلى علامة الوزن الجزيئي المعروفة أو التحكم الإيجابي.

طرق أخرى لتحديد النتائج PCR على أساس التهجين من سلسلة واحدة من المنتجات PCR مع قليل النوكليوتيد مكملة بذلك - DNA التحقيق المسمى مع البيوتين، تليها كشف عن طريق التفاعلات الأنزيمية، على سبيل المثال عن طريق الارتباط الفوسفاتيز القلوية-streptavidin البيوتين.

بناء على هذا النوع من الكشف ، تم إنشاء تحليل PCR الذي يتم فيه الكشف عن نتائج PCR تلقائيًا نتيجة لقراءة الكثافة البصرية في العينات بعد ظهور التفاعل الأنزيمي.

مساوئ هذه الأساليب هي احتمالات التلوث داخل المكتب بواسطة أجزاء صغيرة من جزيئات الدنا. عندما تدخل الجزيئات عينات جديدة ، فإنها تصبح مصفوفة ل PCR وتؤدي إلى نتائج إيجابية كاذبة.

في هذا الصدد ، لمنع النتائج الإيجابية الكاذبة ، يتم إدخال قواعد صارمة لفصل وعزل المباني: لاستخراج الحمض النووي من العينات البيولوجية ؛ أماكن للكشف عن النتائج (الكهربي) من المنطقة النظيفة. هذه المباني هي منطقة من التلوث المحتمل. منطقة معزولة أخرى هي غرفة نظيفة لإدخال عينات الحمض النووي ليتم اختبارها في أنابيب مع خليط التفاعل ل PCR. وأخيرًا ، من المفترض أن الجهاز الرئيسي - مضخم الدنا - يجب أن يوضع في غرفة منفصلة ، وربما مكتبية.

لمنع تلوث المنتجات من ردود الفعل السابقة - بعض اختبار النظام Likon أمبير PCR بدلا dezoksinukleozidtimidina احتواء dezoksinukleoziduridin التي، في حين المختبر دائرة التوليف أدرجت بدلا من ذلك في الموقف الصحيح، أي، يتم استبدال القاعدة النيتروجينية للثايمين الموجود في الحمض النووي الأصلي باليوراسيل. يضاف اليوراسيل DNA glycosylase إلى خليط التفاعل لتحليلها، ويدمر أجزاء تلويث فقط deoxyuridine، ولكن تحليل لا أصلي DNA. Lt؛ / RTI & gt؛ التسخين اللاحق عند 94 ^درجة مئوية يعطل هذا الإنزيم ولا يتداخل مع التضخيم في PCR.

هناك نظام اختبار يعتمد على التضخيم المتساوي للـ rRNA ، والذي يتم من خلاله إجراء النسخ العكسي والتوليف لجزيئات الحمض النووي أولاً. والتي بدورها مصفوفة للتوليف اللاحق لجزيئات الرنا. تم الكشف عن amplicons الحمض النووي الريبي باستخدام مسبار الحمض النووي الملون أكريدين عندما تهجين في حل أنبوب التفاعل. تتميز هذه الطريقة ، بالإضافة إلى الحساسية العالية ، بميزة التحليل في أنبوب واحد ، والذي يمنع التلوث. وفقا للمؤلفين ، تصل حساسية هذه الطريقة في عينات الجهاز التنفسي إلى 90 ٪ مع خصوصية 99-100 ٪.

يتم تنفيذ طرق الكشف الجديدة في PCR في الوقت الحقيقي. تختلف هذه الطرق في المقام الأول في أن PCR والكشف عن نتائجها تتم في وقت واحد في أنبوب واحد مغلق. هذا ليس فقط من الناحية التكنولوجية يبسط تقنية التحليل ، ولكن أيضا يمنع تلوث غرف المختبر وعينات الاختبار مع منتجات PCR السابقة.

في الوقت الحقيقي نتائج الكشف PCR ويرجع ذلك إلى مضان التي تحدث خلال الفلورة تهجين الحمض النووي التحقيق مع amplifitsi روي-PCR خلال جزء DNA محددة. هيكل تحقيقات DNA الفلورة شيدت بحيث يتم تحرير علامة فلوري نتيجة رد فعل الأنزيمية أو نأى من جزيء مضان فاكهه تقضي إلا في ظل التهجين محددة مع جزيء DNA المراد تضخيمه خلال PCR. ولما كان عدد من الجزيئات التحقيق تهجين مع زيادة في مضان يتناسب مع مستوى الكشف عن عدد جزيئات المنتج تضخيمها. منذ في كل عدد من دورة PCR جزيء DNA جزء يتم ضرب بمقدار النصف، وعدد دورة التي يتم تحديد مضان ويزيد يتناسب عكسيا مع عدد من جزيئات DNA في عينة أولية. إذا كان رد الفعل هو تقديم مثل تدريج عدة تركيزات المعروفة مختلفة من جزيئات DNA جزء من المتفطرة السلية المقابلة، وذلك باستخدام برنامج كمبيوتر يمكن حساب وكمية الحمض النووي الجيني في مادة الاختبار.

يتم تكرار كل عينة قياسية. المعيار الكمي هو الحد الأدنى لعدد دورات PCR اللازمة لبداية وتطور الفلورة المحددة. على abscissa - عدد الدورات. الاحداث هي قيمة مضان. تتناسب تركيزات الحمض النووي بشكل عكسي مع عدد الدورات المطلوبة لظهور الفلورة. في العمود الأيمن (21-32) ، يتم وضع علامة على أرقام الدورات للتركيزات المقابلة. الاختلافات بين 10 أضعاف تركيزات شظايا الحمض النووي 10 ² -10 ⁶ مل - 3.2-3.4 دورات. لتركتين ، كانت تركيزات شظايا IS6110 حوالي 10 ³ / مل و 10 ⁴ / مل. مع الأخذ في الاعتبار عدد التكرار (6-20) من الشظايا التي تم تحليلها في جينوم المتفطرة السلية ، فإن عدد بكتيريا myco في العينات السريرية حوالي 100 و 1000 خلية ، على التوالي.

استخدام PCR في تشخيص مرض السل

طريقة PCR هي الأكثر استخدامًا للتشخيص السريع لمرض السل - كشف المتفطرة السلية في العينات السريرية: البلغم. احمرار الشعب الهوائية ، الإفرازات البِلّورية ، البول ، السائل النخاعي ، انحلال العظم ، خلات الأعضاء التناسلية الأنثوية وعينات الخزعة المختلفة. عند دراسة حوالي 500 عينة من البلغم والهبوط القصبي من 340 مريض مع تشخيص مرض السل الرئوي المؤكد في هولندا ، تمت دراسة حساسية مقارنة تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) والثقافة والمجهر. كانت حساسية التحليل 92.6.88.9 و 52.4 ٪ على التوالي. كانت خصوصية جميع الطرق حوالي 99 ٪.

تم مقارنة فعالية الكشف عن المتفطرة السلية عن طريق الفحص المجهري ، البذر على وسط ليفنشتاين-جنسن ، نظام اختبار VASTES وتحليل PCR. أظهر PCR حساسية من 74.4 ٪ ، المجهر - 33.8 ٪ ، والبذر على وسط كثيف - 48.9 ٪ و VASTES - 55.8 ٪. متوسط وقت الكشف عن البذر على وسيط Levenstein-Jensen هو 24 يومًا. VASTES - 13 يومًا ، PCR - يوم واحد.

وتناقش أيضا إمكانيات استخدام PCR كوسيلة حساسة وسريعة لرصد فعالية علاج السل.

الكشف عن الحمض النووي المتفطرة السلية بواسطة PCR مع العلاج الكيميائي فعال تحدد مدى فترة زمنية أطول - في المتوسط 1.7 أشهر مقارنة مع مسحة محددة تحت المجهر الفلورسنت، وبنسبة 2.5 أشهر مقارنة مع الفحص البكتريولوجي.

تشخيص الأشكال خارج الرئة من مرض السل

إن أهمية تفاعل البوليميراز التسلسلي (PCR) كطريقة حساسة كبيرة بشكل خاص بالنسبة للأشكال خارج الرئة ، حيث أنه مع هذه الأشكال تكون الطرق الإشعاعية السريرية والأساليب البكتريولوجية التقليدية لتحديد المتفطرات من السل في المواد التشخيصية غير فعالة.

في دراسة عينات البول ، كانت نتائج تحليل PCR إيجابية في 16 من 17 مريض مع السل النشط للجهاز البولي والسلبية في 4 مرضى السل الكلوي غير نشط و 39 المرضى الذين يعانون من الأمراض غير السلية من الجهاز البولي.

أثبتت فعالية تحليل PCR في دراسة نضح نخاع العظام في المرضى الذين يعانون من حمى مجهولة المنشأ في حالات يشتبه في مرض السل. لتشخيص التهاب العقد اللمفاوية السلية ، تم دراسة 102 يرسب الشروخ وعينة خزعة من 67 الأطفال مع يشتبه العقد اللمفية السلية عند الأطفال. تم الحصول على نتائج إيجابية: 71.6 ٪ PCR في الوقت الحقيقي. المجهر مضان - 46.3 ٪. بحوث الثقافة - 41،8 ٪. في دراسة 50 عينة من الغدد اللمفاوية في مرضى "خدش القط" ، كانت جميع النتائج سلبية. وهكذا ، تم توضيح خصوصية 100 ٪ من تحليل PCR. في نفس العمل ، مع خزعة من العقد الليمفاوية ، تم الكشف عن إمكانية الكشف عن M. Avium.

يعتبر تشخيص داء العقم عند النساء التناسلية ، كما هو معروف ، من أصعب مشاكل التشخيص. في دراسة PCR لخزعة بطانة الرحم ، رشاشات الرحم وعينات السوائل من مساحة دوغلاس ، تلقى 14 (56 ٪) من 25 مريضا فحص بالمنظار مع مرض السل المشكوك فيه نتائج إيجابية. باستخدام المجهري والثقافة تشويه ، تم الحصول على 1 و 2 نتائج ، على التوالي. كانت هذه الحالات أيضًا إيجابية تفاعل البلمرة التسلسلي. كانت معظم النتائج الإيجابية لـ PCR مرتبطة بالحالات ذات العلامات المميزة لمرض السل وفقاً للدراسة النسيجية ؛ عدد أقل - مع الاشتباه في مرض السل وفقا لبيانات تنظير البطن. تم الحصول على نتيجة إيجابية واحدة فقط لتحليل تفاعل البوليميراز المتسلسل في غياب البيانات التنظيرية لمرض السل.

عند تشخيص أشكال السل خارج الرئة ، غالباً ما يطرح الأطباء سؤالاً حول إمكانية الكشف عن العامل الممرض عند اختبار عينات الدم باستخدام طريقة PCR. تشير البيانات الأدبية إلى أن اكتشاف الحمض النووي من المتفطرة السلية من عينات الدم ممكن مع أشكال بعيدة المدى من الإصابة بفيروس نقص المناعة البشرية. تم الكشف عن الحمض النووي من السل المتفطرة فقط مع السل المعمم من مختلف الأجهزة في المرضى الذين يعانون من الكلى ومناعة الكلى المزروعة.

[60], [61], [62], [63], [64], [65]

تحديد الأنواع من المتفطرة

طريقة PCR يمكن أن تكون فعالة جدا لتحديد السريع من المتفطرات مجمع السل وبعض الأنواع من nontubercular المتفطرات بعد تلقي نموها الأولي. في هذه الحالة ، يمكن استخدام PCR حفظ 7-10 أيام ، ضروري لتحديد ثقافي لاحق نتيجة إيجابية. اختبار PCR بسيط للغاية من الناحية الفنية ، لأنه لا يتطلب إعداد عينة معقدة من المواد السريرية لتحقيق حساسية عالية. في هذه الدراسة 80 الإيجابية في هذا النظام اختبار (شركة MB فاستو. أورغانون) وكانت جميع الثقافات الإيجابية للPCR محددة بدقة وعقدت لمدة 1 يوم. للتعرف على الأنواع الأخرى من المتفطرات في إعداد الحمض النووي للثقافة الممرض تهجين مع تحقيقات DNA محددة المسمى مع أكريدين وسلالات الكشف عنها بواسطة مظهر التوهج عبر chemiluminometer أو النيتروسليلوز قطاع غزة مع تقييم بصري بعد التهجين. بمساعدة هذه المجموعة ، تم تحديد عدد محدود من الأنواع: مركب السل المتفطرات. M. Avium، M. Avium complex، M. Kansasii and M. Gordonae.

A.Telenti et al. كما وضعت طريقة بسيطة نسبيا وغير مكلفة لتحديد الأنواع من الأنواع الهامة سريريا من المتفطرات بواسطة PCR ومعالجة لاحقة مع اثنين من الانزيمات تقييد (الإنزيمات وجود قطع خصائص جزيء DNA في نقاط محددة). يتم تضخيم جزء الحمض النووي. ترميز بروتين الصدمة الحرارية (65 كيلو دالتون)، وبعد ذلك تعامل في الناتج جزء PCR DNA من 439 أزواج النوكليوتيدات بشكل منفصل اثنين من الانزيمات - Bste II و III هاي. ثم تحليلها باستخدام الاغاروز الكهربائي للهلام الحصول على اثنين من المنتجات، وتحديد حجمها (عدد الأزواج الأساسية) باستخدام مجموعة قياسية من شظايا الحمض النووي (DNA الجزيئية-علامات) في الطول 100-1000 أزواج قاعدة. في كل واحد من أنواع معينة (M. السل، M. الطيرية، M. الجوانية، M. الكنزاسية، M.fortuitum) كشف اثنين أو ثلاثة من شظايا الحمض النووي من أحجام مختلفة لكل انزيم التقييد. ويسمح الجمع بين أحجام مختلفة من الدنا التي تم الحصول عليها بتمييز هذه الأنواع فيما بينها.

ويجري تطوير التكنولوجيا الخاصة بالحصى الدقيق للحمض النووي. مما يساعد على تحديد أكثر من 100 نوع من البكتيريا في دراسة واحدة.

ويمكن أيضا تحديد هوية الأنواع بواسطة تضخيم PCR لمنطقة 16S rRNA المتغيرة متبوعة بتسلسل amplicon عند مقارنته بالبنية الأولية المقابلة ، والتي تسمح بتحديد أكثر من 40 نوع من البكتيريا.

بمساعدة تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) ، يمكن أيضًا إجراء تحديد محدد داخل مركب السل المتفطّرة ، بما في ذلك التمايز بين M. Bovis و M. Bovis BCG. للقيام بذلك ، يتم تحليل وجود أو عدم وجود بعض الجينات في مناطق الجينوم RD1. RD9 و RD10. لا يوجد RD1 في M. Bovis BCG ، ولكنه موجود في الأنواع الخبيثة ، بما في ذلك M. Bovis.

تحديد حساسية الدواء من المتفطرة السلية بواسطة PCR

أهداف الأساليب الوراثية الجزيئية لقابلية المخدرات أو مقاومة السل المتفطرة تقلل إلى تحديد الطفرات في تسلسل النوكليوتيدات محددة من الجينات المعروفة. وتستند الأساليب الأساسية إما على prochityvanii مباشرة (التسلسل) من هذه المتتاليات بعد التضخيم أو التهجين من شظايا الحمض النووي المسمى البيوتين تضخيم خلال تحقيقات PCR DNA. كلا الخيارين تنطوي على تحديد بدائل النوكليوتيدات في تسلسل أن استخدام اختبار الحمض النووي DNA تؤدي إلى غياب أو التهجين غير كاملة إلى غشاء النيتروسليلوز باستخدام المترافقة انزيم (streptavidin القلوية الفوسفاتيز) - طريقة LIPA-الريف-TB.

طريقة لقياس مضان في ثابت محليا على microsections DNA تحقيقات تكميلية لالطفرات المعروفة في مناطق الجينات PCR تضخيم المسؤولة عن المقاومة أو حساسية المخدرات، ودعا mikrobiochipov الأسلوب. الخوارزمية الرئيسية لتنفيذ هذا البحث هي على النحو التالي. بعد عزل DNA من عينة سريرية أو ثقافة المتفطرات هو ضروري لإجراء PCR التضخيم من شظايا ذات الصلة من الجينات rpoB مسؤولا عن حساسية العقاقير لالريفامبيسين أو الجينات katG وinhA ترميز البروتينات من المتفطرة هي المسؤولة عن الحساسية لأيزونيازيد. يتم تقييم نتائج PCR بواسطة الكهربائي الكهربائي للهلام agarose ، حيث يتم تأكيد شظايا الحمض النووي المطابقة بالطول المطلوب. بعد ذلك ، يتم إجراء جولة ثانية من تفاعل البوليميراز المتسلسل لإدخال ملصق فلوري في الحمض النووي. تم تأكيد نتائج PCR مرة أخرى عن طريق الرحلان الكهربائي بالهلام. بعد ذلك، تم إجراء التهجين من (الحضانة بين عشية وضحاها)، تليها غسل المادية المترتبة على بيوشيب، وهو عدد كبير الثابتة في لوحة زجاجية صغيرة جدائل الحمض النووي قصيرة (تحقيقات) التي هي مكملة لالنوكليوتيدات تسلسل نوع المتفطرة السلية الحساس للأدوية عند نقاط الطفرات المحتملة. فضلا عن تسلسل متحولة مسؤولة عن مقاومة الأدوية. موقع تحقيقات DNA على لوحة - حددت بدقة، ومستوى مضان لوحظ على التهجين لتحديد النتيجة باستخدام جهاز قراءة خاص تم تثبيته. في هذا الصدد ، يتم تحديد نتائج التحليل عن طريق برنامج كمبيوتر خاص.

في السنوات الأخيرة ، تم تطوير طرق بديلة لتحديد حساسية الدواء من المتفطرة السلية على أساس تكنولوجيا تفاعل البلمرة المتسلسل في الوقت الحقيقي ، مما يجعل من الممكن إجراء هذه الدراسات في اختبار أنبوب مغلق.

في الشكل. 13-13 يعرض نتيجة تحليل الثقافات السريرية للمتفطرة السلية في تحديد مقاومة الدواء للريفامبيسين بواسطة PCR في الوقت الفعلي: 218 - عينة تحكم (حساسة للريفامبيسين) ؛ 93 - التحكم الإيجابي لتحول Ser-Trp TCG-TGG ؛ 4482 - التحكم الإيجابي لتحول Ser-Leu TCG-TTG ؛ 162-322 - عينات تجريبية. نتيجة حساب المنحنيات الحركية للتضخيم على 4 قنوات: القناة 1: 393 - التحكم الإيجابي لطفرة Ser-Trp TCG-TGG ؛ القناة 2: 4482 - التحكم الإيجابي لتحول Ser-Leu TCG-TTG ؛ 162 ، 163 ، 172 ، 295 - عينات تجريبية ؛ القناة 4: منحنيات حركية لتضخيم جميع العينات المشاركة في التجربة. السيطرة الإيجابية على تفاعل التضخيم. الاستنتاجات: استنادا إلى نتائج التحليل ، تم تحديد الطفرات التالية التي تحدد مقاومة ريفامبيسين: في العينات 162161717295-Ser-Leu TCG-TTG. تم استخدام نفس المبدأ لتحديد مقاومة الدواء للأيزونيازيد للجينات katG و inhA ، والتي تحدد الطفرات الأكثر شيوعا.

[66], [67], [68], [69], [70], [71],

تحديد سلالة من المتفطرة السلية

الأسلوب الأكثر دراسة وافية لتحديد هوية سلالات السل المتفطرة هو تقنية تسمى تعدد أطوال جزء الحصر (RFLP RFLP. أو في النسخة الإنجليزية) والذي يقوم على أساس fragmentirovanin (تقييد) انزيم المتفطرة السلية DNA Pvu II وشظايا الحصول على التهجين لاحق مع بعض متواليات محددة على DNA العنصر المتكرر IS6110. يتم تحقيق التباين بين الأنواع بسبب عدد التكرارات المختلفة لـ IS6110 وموقعها على DNA. فضلا عن مجموعة متنوعة من المسافات بين بعض نقاط انزيم انزيم تقييد تقييد (مواقع تقييد) وعنصر IS6110. هذه التكنولوجيا معقدة للغاية وتستغرق وقتا طويلا. بعد العلاج مع الحمض النووي المستخرج من ثقافة المتفطرة السلية، يتم تنفيذ الكهربائي للهلام مع انزيم التقييد، ثم نقل شظايا الحمض النووي من أطوال مختلفة على غشاء النيتروسليلوز، تم تنفيذ التهجين خارجا مع أجزاء من IS6110 عنصر والكشف عن طريق التفاعلات الأنزيمية. النمط المحدد الناتج من العصابات يميز الحمض النووي لسلالة معينة من السل المتفطرة. بمساعدة تحليل الكمبيوتر ، يتم الكشف عن هوية أو ارتباط السلالات. على الرغم من حقيقة أن طريقة RFLP هي الأكثر تمييزًا ، أي يحدد أكبر عدد من الاختلافات في سلالات تحليلها، فمن غير فعالة لعدد صغير (أقل من 5) IS6110-يكرر لوحظ في بعض السلالات. في الشكل. 13-14 يبين نتائج RFLP- الكتابة من السلالات.

قد يكون البديل هو طريقة التنميط المبتكر - تحليل تعدد الأشكال لتسلسلات دنا الفاصل - وهو وسيط بين التكرارات المباشرة لمنطقة DR. عند تنفيذ السلالات المتقطعة من السلالات ، يتم إجراء تفاعل البلمرة المتسلسل (PCR) باستخدام البادئات التي تربط المنطقة DR ، وبعد ذلك يتم تشكيل أجزاء ذات أطوال مختلفة تهجين مع المناطق المتغيرة المتوسطة من الحمض النووي. يتم تقديم تحليل لتسلسلات الفاصل لمنطقة DR. وفقا للباحثين ، أكثر بسيطة ومنتجة ومناسبة للفحص الابتدائي من سلالات والتحليل الوبائي الأولي ، فضلا عن المواد البحثية السريرية مباشرة.

من الواضح أن الطريقة الأكثر فعالية والتي يمكن الوصول إليها من الناحية التكنولوجية هي VNTR (اختصار الكلمات الإنجليزية) ، أو طريقة لتحديد العدد المتغير للتكرار الترادفي الدقيق في الحمض النووي لمرض السل المتفطرة. تعتمد هذه الطريقة فقط على استخدام PCR ولا تتطلب تلاعبًا إضافيًا. وبما أن عدد التكرارات المترادفة في سلالات مختلفة وفي مواقع مختلفة يختلف ، يتم تحديد شظايا الأحجام المختلفة وتحليلها على المخطط الكهربائي الناتج لمنتجات PCR. وفقا للباحثين ، فإن استخدام VNTR يحقق درجة أكبر من التمييز في الإجهاد مقارنة مع طريقة RFLP.

وقد تم إيلاء الكثير من الاهتمام في السنوات الأخيرة لتوزيع سلالات المتفطرة السلية لعائلة W-Beijing (التي تسمى أحيانًا سلالة بكين) ، والتي تعتبر مقاومة للأدوية إلى حد كبير.

المتطلبات الأساسية لجودة البحوث البيولوجية الجزيئية

[72], [73], [74], [75],

الوثائق التنظيمية الأساسية ل PCR

أوامر وزارة الصحة الروسية: №45 من 2000/7/2 ز .. عدد 109 من 2003/3/21 ز .. عدد 64 من 2000/2/21، والمبادئ التوجيهية: 1.3.1888-04 "تنظيم العمل في الدراسات التي تستخدم المواد PCR المصابين الممرضة البيولوجية وكلاء الجماعات من الثالث إلى الرابع من الإمراضية "؛ 1.3.1794-03 "تنظيم العمل في دراسة مادة تفاعل البلمرة المتسلسل ، المصابة بالميكروبات في مجموعات الإمراضية II-II". 2003؛ 3.5.5.1034-01 "إزالة التلوث من المواد، وإصابة البكتيريا المرضية مجموعة I-IV عند استخدام PCR،" 2001 الملحق 11 للتعليمات موحدة لطرق الفحص الميكروبيولوجية في تحديد وتشخيص وعلاج مرض السل.

[76], [77], [78]

الموظفين

تنفيذ الأبحاث البيولوجية الجزيئية قد عقد الأطباء من التشخيص السريري المختبرات والأطباء البكتيريا والفيروسات، والأطباء، وعلماء الأحياء، مختبر التشخيص السريري، وكذلك المتخصصين من ذوي التعليم الطبي الثانوي، مرت التخصص والتدريب المتقدم على الوجه المبين.

ترتيب مباني المختبر

غرف المختبر التالية مطلوبة:

• منطقة معالجة العينات هي مختبر تم تكييفه للعمل مع العوامل المعدية للمجموعات المسببة للأمراض III-IV ، وفقًا للتعليمات المنهجية 13.1888-04.
• منطقة لإعداد مخاليط التفاعل PCR - غرفة المختبر ، والتي توفر الحماية من التلوث المختبري الداخلي - منطقة "نظيفة".
• • إذا تم استخدام الكهربي أو التهجين لتحليل منتجات PCR. غرفة المختبر الذي يتم استخراج شظايا من الحمض النووي المكاثرة من الأنابيب والتضخيم، على التوالي، قد تحصل في البيئة، وفقا لمتطلبات المختبرات PCR (1.3.1794-03 المبادئ التوجيهية التوجيه 1.3.1888-04) يجب أن يكون كاملا يتم عزله من المباني المشار إليها في الفقرات السابقة. يجب استبعاده من منطقة الحركة إلى منطقة الكهربائي للتعامل مع عينة ومنطقة "نظيفة" في أي الأفراد والمعدات، أي المواد والأشياء، فضلا عن نقل الهواء من خلال نظام التهوية، أو نتيجة لالمسودات. هذه المنطقة غير مطلوبة من أجل الكشف الفلوري عن منتجات PCR.
• تم تجهيز غرفة للتوثيق ومعالجة النتائج مع أجهزة الكمبيوتر والمعدات المكتبية اللازمة. قد تحتوي هذه الغرفة على معدات توفر الكشف عن منتجات PCR دون فتح الأنبوبة. - كاشفات PCR الفلورية والناقلات الحرارية ل PCR في الوقت الحقيقي.

تتشابه المتطلبات الصحية والوبائية للمعالجة الأولية للبلغم مع المتطلبات الميكروبيولوجية القياسية للعمل مع المتفطرة السلية.

[79], [80], [81], [82],

الانتهاء من المعدات المختبرية لتشخيص PCR

يشمل المختبر معدات للغرف التالية.

• غرفة لإعداد العينة ، يحتوي على المعدات التالية: laminar من الدرجة الثانية من الحماية "SP-1.2": ترموستات الحالة الصلبة مع غطاء التدفئة لأنابيب الاختبار من نوع "إيبندورف" ؛ microcentrifuge بسرعة 13000 دورة في الدقيقة ؛ جهاز طرد مركزي (Vortex) ؛ الثلاجة مع درجة حرارة تتراوح من -20 ^о إلى +10 ^о С؛ ماصات من حجم متغير من سلسلة "Rroline". مضخة مع دورق فخ OM-1 ؛ حامل ثلاثي القوائم للممصات ؛ ترايبود workstation 200x0.5 مل؛ ترايبود محطة العمل 50x1.5 مل؛ وتقف لتخزين أنابيب الاختبار 80x1.5 مل ؛
• غرفة تحضير خليط التفاعل: غرفة الحماية PCR-box ("Laminar-C. 110 سم) ؛ جهاز طرد مركزي - دوامة؛ ماصات حجم متغير من سلسلة البرولين. حامل ثلاثي القوائم للممصات ؛ ترايبود محطة العمل 200x0.2 مل. وتقف لتخزين أنابيب الاختبار 80x1.5 مل ؛ الثلاجة مع درجة حرارة تتراوح من -20 ^о إلى + 10 ^о С؛
• غرفة للالكهربائي: كاميرا للرحلان الكهربائي الأفقي. امدادات الطاقة نقل transilluminator.
• مضخمات الدنا أو محلل الحمض النووي (PCR في الوقت الحقيقي) مع جهاز الكمبيوتر والبرمجيات. يمكن وضعها في أي غرفة الغيار. إذا تم استخدام تقنية PCR في الوقت الحقيقي. غرفة للطلاء الكهربائي غير مطلوبة.

[83], [84], [85], [86]

مراقبة الجودة الخارجية

لتكون واثقاً في الحصول على نتائج موثوقة موضوعياً ، يجب أن تشارك المختبرات في نظام التقييم الخارجي لجودة الأبحاث المخبرية.

يتلقى المشاركون في نظام مراقبة الجودة ؛ 12 قارورة من الايقاف الخلية البكتيرية تجميد المجفف، وهما من التي تحتوي على E. القولونية E. جوز الهند، 3 قوارير مع المتفطرة السلية (سلالة الفوعة) في 10 ² / مل. 3 قوارير من نفس سلالة من الخلايا بتركيز 10 ⁴ / مل. 2 أمبولات nontubercular المتفطرة الطيرية M.-الجوانية وM. الكنزاسية في تركيز 10 ⁵ / مل.

يتم اختبار الاختبارات الموزعة لتقييم الجودة الخارجية في مختبرين مستقلين يتمتعان بخبرة واسعة في هذا المجال.

[87], [88]