عمل تجريبي على زرع الخلايا الكيراتينية الخيفية على ندوب مصطنعة من الفئران البيضاء

أدت الرغبة في استخدام الإمكانات الخلوية والحاجة إلى البحث عن طرق فعالة جديدة لتحسين المظهر الجمالي للندوب إلى فكرة محاولة دراسة إمكانية زرع الخلايا الكيراتينية إلى أسطح تندب.

من أجل إثبات إمكانية استخدام الخلايا الكيراتينية ثقافة لتحسين مظهر الندبات وقد تم ذلك العمل التجريبي على فئران التجارب البيضاء، التي تم إنشاؤها سطح ندبة. تم الحصول على نموذج الكرش من الجرذان نتيجة لشفاء الجروح المصطنعة في الظهر ، على طول العمود الفقري. قطعت الفئران القطع من نفس الجلد، وحجم 2X3 سم بعد 2.5 أشهر بعد العملية الفئران "محاكاة تندب" أجريت جراحة جلدي (إزالة الطبقات العليا عبر الكرش عملية بالمكواة) والخلايا الكيراتينية الصنعية المزروعة، معزولة من جلد الفئران الشابة 2-4 أيام بعد الولادة.

وقد تم عزل ونمو خلايا البشرة الفئران في المختبر للتكنولوجيات الخلوية لمعهد علم الخلايا RAS للتكنولوجيا التالية.

تم غسل الجلد في محلول Hanks المالح المحتوي على 200 جرام / مل من جنتاميسين ، مقطوعة إلى قطع صغيرة بمساحة 0.2-0.5 سم ². تم تحضين مكعبات الجلد في محلول 0.5 ٪ من disaspase في محلول متوازن فوسفات محلول ملحي عند 37 درجة مئوية لمدة ساعة. ثم نُقلت القطع إلى محلول ملحي من الفوسفات Dulbecco وتم فصل البشرة عن الأدمة. وقد حضنت البشرة في 0.125٪ محلول التربسين لمدة 10-15 دقيقة مع التحريك بسرعة 50 لفة / دقيقة، وبعد ذلك تم إيقاف إنزيم بإضافة 5٪ الجنين المصل البقري. كان يستخدم ثلث تعليق الخلية الناتجة احدة في شكل نقي واحد من الخيارات لزرع الندوب، الثلث الثاني نمت على طلاء الفيلم حيويا المحلي "Polipor"، والثالثة - على طبق بتري دون الركيزة. تم تنفيذ عملية إزالة جلدي من الندبات التي تم الحصول عليها في الفئران مع زرع لاحقة من خلايا البشرة والفئران عليها تحت التخدير الأثير باستخدام الكي الحراري.

سارعت المجموعة الأولى من الفئران بعد جلدي على مصقول، وغسلها بمحلول ملحي وسطح المجففة الكرش معقمة فرضه قطعة من العشب، الذي أودع الطين الفئران خيفي epidermotsitov بتركيز 1.5 مليون خلية لكل 1 مل (وفقا لمعهد علم الخلية). تناسب قطع باتيستوفيا على الندبة المصقولة بحيث تكمن الخلايا على سطح الندبة. ضمادة على رأس من عدة طبقات من القماش القطني، والذي هو مخيط على حواف ندبة.

جزء من تعليق خلية الناتج كان مطلي في أطباق بتري على أفلام Polypore العقيمة مقطعة في شكل أكواب ، والجزء الآخر على أطباق بتري بدون فيلم. وقد أجريت الزراعة في وسط FAD تتكون من خليط من DMEM و F12 في نسبة 3: 1. مع إضافة 10 ٪ مصل بقري جنيني ، 5 ميكروغرام / مل الأنسولين (Sigma) ، 0.5 ميكروغرام / مل hemisuccinate hydrocortisone (Sigma). 10 ميكروغرام / مل عامل نمو البشرة EGF (معهد علم الخلايا RAS ، سانت بطرسبورغ). تم تشغيل المجموعتين الثانية والثالثة من الفئران مع 7 أفراد بعد 6 أيام من الأول. وبحلول هذا الوقت ، تكونت الطبقات متعددة الطبقات من تعليق الخلايا الكيراتينية المزروعة في أطباق بتري ، والتي تم زرعها للفئران. المجموعة الثانية تم زرعها مع الخلايا الشحمية على الفيلم ، المجموعة الثالثة - مع طبقة متعددة الطبقات دون ركيزة. بعد 7 أيام ، تم زرع الطبقات المتعددة الطبقات من الخلايا الكيراتينية (MPALK) ، المزروعة على أفلام Polypore ، عن طريق الثقافة مباشرة على سطح الجرح. أعلاه ، تم إصلاح الفيلم ، من أجل تجنب تمزيقه ، مع ضماد شاش متعدد الطبقات ومخيط على جلد الفئران.

قبل زرع الخلايا الكيراتينية المجموعة الثالثة من الفئران، ونمت دون الركيزة، مما ينتج عنه فصل PAC من الجزء السفلي من بيتري العلاج طبق dispase، لديها القدرة على كسر انتقائي الاتصالات البشروي الادمي. في إطار العمل من dispase خزان متعدد الطبقات يدمر اتصال من طبقة الخلايا القاعدية إلى الجزء السفلي من طبق بيتري، وإلى حد أقل بكثير، فإنه يؤثر على الاتصالات بين الخلايا، مما يجعل من الممكن "إزالة" طبقة بأكملها. تم تنفيذ انفصال طبقة الخلايا متعددة الطبقات حسب التصرف على النحو التالي. من أطباق بتري المخلوطة المتوسطة والنقل، وكانت تغسل أوراق الخلية ثلاث مرات مع المتوسط تحتوي على المضادات الحيوية، وعلى وجه الخصوص - جنتاميسين (0.2 ملغ / مل). تم سكب طبقات متعددة الطبقات 0125 حل dispase٪ ( «سيجما») ووضعها في حاضنة حيث تم المحتضنة في تي = 37 درجة مئوية لمدة 20-30 دقيقة. ظهور كورولا بيضاء، تقشير حول محيط الخزان - مؤشرا على بداية عملية فصلها عن حواف والجزء السفلي من طبق بيتري. وبعد دقائق من بدء عملية الفصل، تم تفريغ حل dispase 2-3 مرات تم غسلها طبقات الظهارية مع المتوسط. على تم تطبيق سطح طبقة البشرة، وقطع لحجم كوب قطعة الجرح العقيمة خلع الملابس "ليث اللون، الذي هو المشقوق فصل dispase تشكيل، المزيد من التبطين من الجزء السفلي من الكوب مع ملعقة. باستخدام الملقط العيون طبقة جنبا إلى جنب مع طلاء من منديل" ليث الألوان "(الروسية ) انفصلت عن الجزء السفلي من طبق بتري وبعناية نقلها إلى سطح استعداد للندبة. المناديل "ليتا لونا" يحتوي في تركيبته وeksolin جنتاميسين (الكولاجين استخراج)، والتي عندما الرطب بيئة لا تزال تنبت في المستقبل سام محلول ملحي تضخم وأصبح طلاء الجرح الحديثة التي توفر حماية جيدة من العدوى الخارجية والشفاء السريع بسبب الرطوبة بدايته مع هيكل.

كانت طبقات البولي بروبيل والمناديل اللطيفة ذات طبقات مع ضمادات شاش مخيط على جلد الفئران لتثبيت أكثر دواما. تم زرع كل جرذ في قفص منفصل ، لخلق الظروف المثلى لصيانتها و engraftment من الخلايا الكيراتينية المزروعة. الضمادات الفئران التي زرعها تعليق ومتعدد الطبقات خزان epidermotsitov النار dispase، كل يوم عدة مرات في اليوم، مبلل بمحلول ملحي معقم لخلق أفضل الظروف الخلايا لمدة engraftment. وبالنظر إلى أن فيلم "Polypor" كان غير نافذ للماء ، فإن فئران المجموعة الثانية لم تقم بترطيب الضمادات ، التي كانت إحدى المزايا قبل زراعة الأعضاء بدون أفلام. بعد 10 أيام ، تمت إزالة الضمادات. اختلفت الصورة السريرية للندوب بعد زرع الخلايا قليلاً عن الندوب بدون زراعة ، باستثناء التلوين الأكثر لوناً وردياً (بسبب جلود الجلد) وتقشير أكبر. هذه الحقيقة تشير إلى ذلك. أنه على الفور بعد اختفاء تغطية الجرح مع IPC ، لم تحدث أي تغييرات في الكرش.

أخذ مادة الخزعة في الفئران.

بعد 1 و 2 و 5 و 9 أشهر بعد زرع الخلايا الكيراتينية على الفئران allogichnyh ندوب الأرض الفئران البيضاء، مع الأخذ في المواد المنتجة للالنسيجية والدراسة المجهرية cytomorphological والإلكترون. كما تم أخذ عينات من السيطرة على الجرذ الجلد العادي والندبة دون زرع الخلايا. تم إجراء التخدير في الفئران مع التخدير الأثير.

بعد التخدير ، من المناطق ملحوظ ، والتي تم زرعها في الخلايا الكيراتينية ، وقطب خزعة مع قطر 2 ملم. تم أخذ أجزاء من النسيج الندبي ووضعها في محلول غلوتارالدهيد 2.5٪ لتحضير المادة للمجهر الإلكتروني. وضعت قطعة من النسيج تؤخذ للفحص النسيجي في 10٪ من محلول الفورمالين محايد، تليها من خلال الكحول الأسلاك وشغل في البارافين، تليها قطع من أقسام سامسونج وعرضها في ضوء المجهر الضوئية.

السيطرة I. الجلد الفئران العادي.

من أجل رؤية الفرق بين الصورة المجهرية للجلد والجروح المعدلة بالندوب الطبيعية في أوقات معينة بعد زرع IPC ، يتم توضيح الصور الفوتوغرافية والأوصاف الخاصة بها في جميع مراحل هذه الدراسة.

تتكون البشرة من الجلد الطبيعي من 7-9 طبقات من الخلايا. طبقة قرنية من سمك معتدل. في الأماكن التي تتكون من 6-8 طبقات من مقاييس قرنية. وتمثل الطبقة القاعدية خلايا ذات شكل أسطواني مع ضوء كبير ونوى منتظمة وعدة نويات. يتم التعبير بوضوح عن الوصلات الديسموسومية بين الخلايا والغشاء القاعدي. تحت الغشاء القاعدي واضحة المعالم التي لها نتوءات الجميلة في طبقة تحت البشرة كذبة موازية للحزم لطيف من ألياف الكولاجين والإيلاستين، بما في ذلك الخلايا الليفية ممدود، والسفن الصغيرة. في طبقات أعمق ، تكمن حزم الكولاجين والإيلاستين في اتجاهات مختلفة. من بينها هناك العديد من الأوعية ذات الجدران الرفيعة من نفس العيار ، العناصر الخلوية (الخلايا الليفية ، الخلايا البدينة ، الكريات البيض). في عدد كبير من بصيلات الشعر والغدد الدهنية.

السيطرة 2. ندبة من الفئران 2 أشهر من العمر.

الصورة السريرية. الندبات شاحبة وردية اللون ، مع تقشير ، في أماكن تبقى القشور. وانخفض منطقتهم بسبب تقلص ألياف الكولاجين وتصبح حوالي 3،0-3،5 سم ^:. المرفقات الجلد غائبة.

صورة مجهرية. تتكون البشرة من 3-5 طبقات من الخلايا ، مطوية ، ممثلة بالخلايا القاعدية للشكل المستدير ، صف واحد من الفروع ، 1-2 صف من الحبيبات مع حبيبات keratogialin في الطبقة العليا ، هناك أقسام من الوذمة داخل الخلايا. يتم تغيير طبقة القرنية بشكل غير متجانس من رقيق جدًا إلى سميك. هناك للطي من الكرش بسبب (تقلص) من الأنسجة الندبية. تخترق الطيات إلى الطبقة الحليمية وتعطي انطباعًا عن الحليمات. الحدود بين البشرة والأدمة هي خط مستقيم. لا يمكن تتبع الغشاء القاعدي في كل مكان. في الجزء السفلي من الطبقات تحت السطحية والطبقة العميقة - الأوعية ذات الجدار السميك والمرتفع ، كثيرون مهجورون وظواهر الرواسب. حول السفن - مجموعة من البلاعم ، الخلايا الليفية. وتحيط البلعوميات بكريات الدم الحمراء الخارجة من الشعيرات الدموية وتلتهمها. في الطبقات الأكثر سطحية - الشعيرات الدموية الصغيرة. تحت البشرة ، تكون ألياف الكولاجين فضفاضة. في الطبقة العميقة من الكرش - حزم الخشنة من ألياف الكولاجين التي يوجد بها العديد من الخلايا الليفية.

تندب جرذ بعد شهر من زرع الخلايا الكيراتينية للفئران MPAl الفئران.

الصورة السريرية. ندبات الوردي ، انخفضت مساحتها ، وخاصة في القطر ومتوسطها 2.5-3 سم ². الشعر والغدد الدهنية غائبة.

هذه الفحص المجهري للمواد تم الحصول عليها من الفئران مع MPAlK نقل MPAlK على الفيلم والركيزة دون متطابقة إلى حد كبير. ومع ذلك، من الناحية الفنية، والعمل مع MPAlK معتمد أكثر صعوبة وشاقة مما كانت عليه عندما نمت MPAlK على الركيزة، وبالتالي فإن دراسة أخرى للقضية على زرع kertainotsitov ندوب نحن استخدامها كأساس لزراعة ( "الركيزة") في حديقة الطبقات.

صورة مجهرية. هناك سماكة من البشرة إلى طبقات 15-20 ، تقريبا إلى منتصف منها الخلايا الكيراتينية لها شكل عمودي ضيق ، ممدود ، وترتيب مدمج. يتم ترتيب الخلايا القاعدية في خط غير مستوي. تكون نواتها خفيفة وكبيرة ومستديرة الشكل مع نواة واحدة أو اثنتين ، مما يشير إلى نشاطها الاصطناعي والتكاثري المرتفع. الحدود بين البشرة والأدمة هي خط مستقيم. الطبقة الشوكية متطورة بشكل جيد ، وتتألف من 3-5 طبقات من الخلايا ذات الشكل المستدير ، وهناك 2 خلية نيوكلي.

مباشرة تحت الغشاء القاعدي - الحزم الرقيقة الكثيفة الموجودة في ألياف الكولاجين ، وبالتوازي مع عدد كبير من الأوعية الفارغة ، تكون ألياف الكولاجين الأعمق أكثر خشونة ، وتجمع في حزم كثيفة. العديد من الخلايا الليفية الكبيرة ، والخلايا البدينة (2-3 في مجال الرؤية) ، والبلاعم ، والكريات البيضاء والأوعية الفارغة ، والجدران التي يتم تخفيفها ، من حولها هي ألياف الكولاجين الفضفاضة. في بعض السفن - الركود ، و diapedesis من عناصر موحدة. حول الأوعية - الأرومات الليفية ، اللمفاويات واحدة. المرفقات الجلد غائبة.

عندما يتم زرع معلق كيراتينية إلى ندبة مصقولة ، تختلف الصورة المجهرية عن الصورة السابقة. في معظم الحيوانات - البشرة رقيقة ، تتكون من 5-6 طبقات من الخلايا. تتكون الطبقة السفلى من خلايا غير منتظمة ، وشكل مضلع مع نوى مستديرة غير منتظمة الشكل. تشبه حالة الطبقة تحت الجلدية تلك الموجودة في مجموعة الحيوانات دون زراعة.

في هذه الحالة ، يمكن للمرء أن يتكلم إما عن التأخير في العمليات المصاحبة لزرع الخلايا ، أو فقدان كبير للخلايا المزروعة في شكل تعليق. ومن ثم ، فقد تم التوصل إلى نتيجة مفادها أن تصحيح الندوب عن طريق زرع الخلايا الكيراتينية في شكل تعليق غير مناسب.

تندب من الفئران 2 أشهر بعد زرع الخلايا الكيراتينية الفئران MPAl الجرذ.

الصورة السريرية. الندبة تبدو رقيقة ، رقيقة. في الأماكن هناك تحلل ، جداول.

الصور المجهرية. يتم تكثيف الطبقة القرنية ، في الأماكن - فرط التقرن. تكون البشرة سميكة ، تتكون من 12-20 صف من الخلايا. الحدود بين البشرة والأدمة هي خط مستقيم. ألياف الكولاجين الحساسة تحت البشرة تكمن بإحكام شديد. في الطبقات العميقة من الكرش يتم جمعها في حزم كبيرة خشن. في الطبقة تحت الفصيلة ، يظهر اتساع الأوعية الدموية. في الطبقات السفلى من النسيج الندبي - العديد من الأوعية الفارغة ، تقع موازية لسطح البشرة. يتم توزيع الخلايا الليفية الكبيرة بالتساوي في سمك الكرش ، وهناك العملاق ، multifaceted ، والعديد من البلاعم.

تندب من الفئران بعد 5 أشهر من زرع النائب من الحيوانات المنوية الفئران.

الصورة السريرية. ندبة يبدو على نحو سلس، على نحو سلس، دون تقشير، وهناك شعرة واحدة من أكبر كثافتها على هامش ندبة، مما يدل على حافة بصيلات الشعر نام في الكرش والأورام من بصيلات الشعر. منطقة الندوب تستمر في الانخفاض.

صورة مجهرية. البشرة لا تزال سميكة (15-20 طبقة ، وأحيانا تصل إلى 30) في الطبقات العليا مملوءة بحبوب keratogialin. الغشاء القاعدي واضح للعيان. تحت أليافها الكولاجينية تكمن فضفاضة. في الطبقات السفلى - الكولاجين هو أقوى وأكثر معبأة بإحكام. بين الحزم من الكولاجين هناك العديد من الشعيرات الدموية. في الطبقات العليا انخفض عدد الأوعية الفارغة. تكون البشرة والأدمة مموجة قليلاً. هناك نتوءات البشرة العميقة في نسيج الندبة. بين ألياف الكولاجين مرئية الأوعية شكلت حديثا. تظهر بصيلات الشعر واحد والغدد الدهنية.

تندب من الفئران 9 أشهر بعد زرع IPid الخلايا الجرذان الفئران.

الصورة السريرية. وأصبحت الندوب أصغر بكثير بالمقارنة مع المصطلحات السابقة ، ومتوسطها في المنطقة حوالي 1.5-2.0 سم ². الندوب مغطاة بشكل غير متساو بالشعر الرفيع ، خاصة حول المحيط. يتم الاحتفاظ بالقياس الصغير للصفيحة الصغيرة.

صورة مجهرية.

أصبحت البشرة أرق ، ممثلة من 6-8 صفوف من الخلايا ، تذكرنا ببنية البشرة الطبيعية للجرذان ، فقط كثافة الخلايا بمقدار 1 ملم. أعلى وهم أصغر. تتكون الطبقة القاعدية من خلايا صغيرة ذات شكل دائري أسطواني. يتم تعريف الغشاء القاعدي بشكل جيد ، و hemidesmosomes واضحة للعيان. لوحظ وجود فروق البشرة في الطبقة تحت الفسي. يتم التعبير عن الطبقة الحليمية على طول طول الندبة. هذه الحقائق تشير إلى أنه في هذه الفترة من الزمن أصبح التصاق الخلايا الكيراتينية المزروعة أكثر قوة مع الأنسجة الكامنة في الكرش. وبالتالي ، فإن العناية بالندوب للأشخاص الذين لديهم زراعة MALC بعد 9 أشهر من زرع IPC يمكن أن تكون تقليدية. تحت الجلد هي ألياف الكولاجين الحساسة أكثر من الطبقات العميقة. كان هناك العديد من السفن ، خاصةً في موقعها السطحي. في الأوعية الكبيرة ، الجدران سميكة. بصيلات الشعر والغدد الدهنية بكميات كبيرة. يشبه النمط المجهري أنسجة الجلد.

نتائج الأعمال التجريبية ومناقشتها.

خلال هذا العمل على ندوب اصطناعية جلد الفئران بعد جلدي العملية، الكيراتينية المزروعة في مختلف formah- على الأسطح الجروح، كما وقف في الكمبري وتشكيل الطبقات دون الركيزة. وقد تم إنجاز العمل للحصول على بيانات مورفولوجية عن تأثير الخلايا الكيراتينية المسببة للعدوى المزروعة على الندوب ، وكذلك تحديد المتغيرات المثلى لعملية الزرع.

وقد وجد أن جميع طرق الزرع الثلاثة حقيقية ، ولكن زرع IPAA دون ركيزة هو إجراء شاق للغاية ، يمكن خلالها إصابة IPAC ، مما يؤثر على نتائج الزرع. وعلاوة على ذلك ، فإن طريقة الزراعة هذه لا تشمل العمل على الأسطح الكبيرة.

زرع القرنية التعليق - وإلى حد كبير طريقة أكثر اقتصادا لا يحتاج الى خلايا زراعة طويلة وبسيطة في تجسيد الحالي، والاتصال باستخدام التشكيل الكمبري العقيمة، والأبعاد التي تتوافق مع قيمة تندب. تراكم تأثير علاجي عند زرع تعليق خلية لمدة شهر تقريبا، مقارنة مع IPC على خلع الملابس الجرح - وليس لحظة هامة عندما مدة كميات العلاج لعدة أشهر. ومن المعروف أنه خلال زرع IPC لحرق المرضى ، حدث التحول في حالة بنية الجلد بالتدريج ولعدة سنوات. زرع ثقافة الكيراتينية على أغطية الجرح هو الطريقة الأكثر ملاءمة واعدة ، ومع ذلك ، فإنه أيضا أكثر تكلفة. بالإضافة إلى ذلك ، تتطلب اليوم البحث عن طلاءات أكثر تطوراً يجب أن تكون بلاستيكية ، استرطابية ، لها خصائص جراثيمية أو جراثيم وتكون محايدة من الناحية البيولوجية للخلايا. فيلم "Polipor" - نسخة الوسيط لتغطية فيلم الجرح المحلية، على الرغم من بعض أوجه القصور، وقد سمح لنا لدراسة الفئران زرع القرنية تجريبيا على الندوب واستخلاص استنتاجات حول فعالية هذا تندب الاتجاه الجذب.

الكتاب الذي أجرى عملية زرع على الجروح IPC أحرقت، وأشار إلى أنه خلال الأسبوع الأول بعد زرع الخلايا الكيراتينية خزان متعدد الطبقات في الجرح مطهرة، والبشرة يثخن والطبقية. تم تعريف جميع طبقات البشرة بشكل جيد. من المثير للاهتمام أن عدد الخلايا في زرع هو أكبر بنسبة 10-30 ٪ من عينات خزعة الجلد. وأشار المؤلفون إلى ظهور حبيبات كيراتوهيالينية في اليوم 5TH بعد MEC زرع، الغشاء القاعدي وpoludesmosom - بالفعل على 3rd يوم.

J.Rives et al (L994)، Paramonov BA (1996)؛ NM كوزنيتسوف وآخرون (1998) وجدت أنه خلال فترات مبكرة بعد زرع المرضى BMD مع عيوب البشرة polnosloynymi بعد الحروق، والتواصل بين الأدمة والبشرة ضعيفة جدا و هو خط مستقيم، طبقة حليمي غائبة. في نهاية الشهر الثاني ، يبدأ تشكيل الحليمات الضحلة وملحقاتها من الجلد ، يصبح الارتباط بين الأدمة والبشرة أكثر دواما. تتحدث البيانات الأدبية عن زرع الخلايا الكيراتينية المسببة للجلد على جروح المرضى المحرومين ، كطريقة واعدة. على الرغم من حقيقة أن رفض الخلايا الكيراتينية خيفي يحدث المقدمة من مختلف المؤلفين في الفترة من 10 أيام إلى 3 أشهر، إلا أنها لها دور في الشفاء من سطح الجرح، والإفراج عن عوامل النمو وإغلاق ميكانيكيا الخلل. ويعتقد أن MPALK لديها نشاط مستضد مخفض ، حيث أنه أثناء الزراعة في المختبر ، تفقد خلايا Langerhans ، مما يسمح لها بالوجود لفترة طويلة في الكائن المتلقي. بالإضافة إلى ذلك ، فإن الثقافة اللوجينية التي يتم الحصول عليها من جلد الشباب الأصحاء لديها إمكانات بيولوجية أكبر بشكل لا مثيل له من الثقافة الذاتية للمرضى بعد الصدمة.

كان الهدف الرئيسي من دراستنا هو معرفة ما إذا كانت الخلايا الكيراتينية اللوجينية ستظل قائمة على الندوب وما هي التغيرات في النسيج الندبي تحت تأثير "طلاء الجرح" النشط بيولوجيًا. في حالة وجود نتيجة إيجابية ، قم بعمل أكثر التقنيات فاعلية وأقل كثافة في العمل في هذا المجال من طب إعادة التأهيل.

تبين أن البيانات التي حصلنا عليها في العديد من النواحي كانت مشابهة لبيانات الأدبيات المتعلقة بالتغييرات المورفولوجية التي تحدث في البشرة البشرية بعد نقل الخلايا الكيراتينية المسببة للجلد لحرق الجروح. ولكن هناك اختلافات كبيرة ، سواء من حيث الركيزة المورفولوجية ، والتي يتم زرعها ، ومن حيث التكنولوجيا. هكذا. تشكيل السندات غشاء جلدي وابيديرمي epidermal القاعدية (poludesmosom، حليمات) يحدث في وقت لاحق بالمقارنة مع نقل الخلايا الكيراتينية في السطوح الجرح بدون تندب. ويبدو أن هذا يرجع إلى سوء تغذية أنسجة الكرش بالمقارنة مع الأدمة أو اللفافة العضلية. الندبة ، خصوصًا القديمة ، عبارة عن نسيج ضام كثيف مع عدد قليل جدًا من الأوعية ، وأسفل جرح الحرق عبارة عن نسيج حبيبي غني بالأوعية الدموية. وهكذا ، من الواضح أن الظروف التي تحدث في ظلها زرع و engraftment من الخلايا الكيراتينية تحدث مختلفة تماما. وكلما زاد توسع الخلايا في زرع الخلايا ، أصبح من الأسهل معالجتها. من هذا المسلم هناك استنتاج حول تفضيل العمل مع الندوب الصغيرة ، التي لا يزال النسيج الضام فيها فضفاضًا بما فيه الكفاية وغنيًا بالأوعية الدموية.

نتيجة لهذا العمل التجريبي ، ثبت أن:

1. زرع MALK للندبات ممكن. 
2. الطريقة المثلى لعملية الزرع هي زرع الخلايا الكيراتينية على غلاف الجرح.
3. يجب أن يتم طحن سطح الندبة باستخدام جلدي جلدي باستخدام ليزر Schumann أو قطع.
4. تحت تأثير MPALK ، يحدث التظهير السريع للسطح الأرضي من الكرش.
5. الأنسجة الندري vascularized أفضل ، وهذا هو ، الندبة الأصغر سنا ، كلما كان ذلك أفضل نتائج زرع الخلايا الكيراتينية.
6. يتحول النسيج الندبي تحت تأثير الخلايا الكيراتينية المزروعة بشكل تدريجي ويتحول إلى جلد شبيه بالجلد (المزيد من الأنسجة الندريّة الأكثر هشاشة مع زوائد الجلد).
7. يبدأ التخفيف التدريجي لنسيج الندوب بالطبقة تحت السطحية. يحسن الأوعية الدموية ، وحزم من ألياف الكولاجين في الأجزاء العليا والسفلى من الكرش تأخذ موقع أكثر هشاشة من الأنسجة الندوية دون زرع الخلايا. هناك بصيلات الشعر والغدد الدهنية. البشرة في هيكلها ، بعد اجتياز مرحلة التضخّم ، تقترب من البشرة الطبيعية.
8. ترتبط التغيرات الملاحظة إلى الخلايا الكيراتينية يفرز عوامل النمو، السيتوكينات أن تحسين اغتذاء ندبا تسهم في تحولها من أنسجة ليفية قوية في اكثر مرونة، الأمر الذي يؤدي إلى تحسين ندبة.

وهكذا ، استنادا إلى هذه الدراسة ، يمكن الاستنتاج أن التأثير النافع للخلايا الكيراتينية المزروعة على نسيج الندبة ، والتي قد تكون ذات أهمية عملية لإعادة تأهيل المرضى الذين يعانون من أنواع مختلفة من الندوب.

هذا العمل على الفئران سمح أيضا لصياغة المتطلبات. إلى أغطية الجرح ، التي تزرع فيها الخلايا الكيراتينية.

يجب أن تكون أغطية الجروح:

• متوافقة حيويا مع الخلايا ،
• تنفس،
• لديهم قاعدة مرنة لبناء النماذج ،
• كن محبة للماء ،
• كما تحتوي الإضافات الطبية على الأدوية المضادة للبكتيريا ومضادات الأكسدة ليست سامة للخلايا المزروعة.

النتائج السريرية للعلاج البيوتكنولوجي للندوب.

في وقت سابق ، N. كارفر وآخرون. (1993) وجدت أن الضمادات الإطباقية هي الأفضل للتعلق بجرح وبقاء الخلايا الكيراتينية ، ولكن لا تسمح بتكوين طبقة طبقية (ناضجة). لتشكيل طبقة طبقية ، تكون البيئة الجوية ضرورية. لذلك ، بعد إرفاق الطبقة المتعددة الطبقات ، تم اقتراح تغطية الجرح بعد 7-10 لإزالة وإجراء الجروح تحت الضمادات الجافة أو المراهم القابلة للذوبان في الماء. يمكننا أن نقول أن نوعية وخصائص "الركيزة" التي تزرع الخلايا لها أهمية كبيرة لفعالية زرع المواد الخلوية ، وبالتالي لنتائج عمل الأطباء. ولكن لا يوجد جرح مثالي يغطي اليوم ، على الرغم من وفرة الخيارات المقترحة (الجلود الاصطناعية ، والنسيج غير المنسوج من carboxymethylcellulose ، والطلاء الفيبرين ، وأفلام البولي يوريثين نصف قابلة للتحويل). ليست لحظة غير مهمة في هذه المسألة هي تكلفة "الركائز" (طلاء خاص للجروح) ، لأن تكلفتها المرتفعة تزيد من التكلفة الإجمالية للعلاج التكنولوجي الأحيائي.

لقد أثبتت فعالية التكنولوجيات الخلوية حتى الآن ، ولكن للأسف هذه التقنيات باهظة التكلفة ، خاصة في البلدان التي لا يوجد فيها الإنتاج الصناعي للتركيبات الخلوية. ومع ذلك ، فإن دولًا مثل الولايات المتحدة قد أقامت منذ فترة طويلة صناعة لإنتاج المواد الخلوية لزراعة المحترق. على وجه الخصوص، فإن الشركة BioSurface تقنية المؤتمر الوطني العراقي، منذ عام 1989، أثار 37،000 طبقات مغلفة من الخلايا القرنية، التي استخدمت لعلاج 240 مريضا في 79 بلدا في جميع أنحاء العالم (R.Odessey، 1992) مع 1 سم ² خلية ثقافة تكاليف حوالي 7-8 دولار أمريكي.

هناك العديد من الاختلافات في تكنولوجيا علاج الأمراض المختلفة ومشاكل الجلد ، ولكن في قلب أي علاج بالخلايا هو إنتاج مواد خلوية عالية الجودة وزرعها.

تتكون هذه العملية من الخطوات التالية:

• اختيار الجلد من المتضررين (أو من المتبرعين) ،
• نقل اللوحات الجلدية إلى مركز التكنولوجيا الحيوية ،
• عزل خلايا الطبقة القاعدية وتكاثرها ،
• تراكم طبقات متعددة الطبقات من الخلايا الكيراتينية (IPC).
• زرع مزارع الخلايا.

المشكلة الرئيسية في العلاج مع زرع الطبقات الكيراتينية متعددة الطبقات هي الحاجة لخلايا قابلة للحياة في جميع مراحل زرع الخلايا. يجب أن تكون قطع الجلد لعزل الخلايا الذاتية أو الخيفية رقيقة قدر الإمكان ، حيث أنه في هذه الحالة يكون فصلها أسهل باستخدام الطرق الميكانيكية والإنزيمية والحصول على تعليق الخلايا الحية للنمو. يمكن الحصول عليها عن طريق إزالة الجلد أو استخدام جلد الجفون ، القلفة ، السطح الداخلي للكتف. بالنظر إلى أن الخلايا حساسة للهالوجين (الكلور واليود) وبيروكسيد الهيدروجين ، لا يمكن استخدامها في علاج الجلد في وقت أخذ المادة.

كما يعتمد العائد الكمي والنوعي للخلايا من الطعوم الجلدية وفعالية زراعةها على الحالة الصحية وعمر المتبرع. بالإضافة إلى ذلك ، يجب تسليم عينات خزعة الجلد إلى المختبر في أقرب وقت ممكن وفي الظروف الملائمة (البيئة ودرجة الحرارة) التي يتم تسليمها إلى مختبر معتمد ومعتمد.

النسر متوسطة أو متوسطة 199 مع إضافة مصل البقري 10 ٪ ، يمكن استخدام المتوسطة DMEM تستكمل مع 5 ٪ مصل بقري جنيني ومضادات حيوية لتخزين ونقل اللوحات الجلد.

في المختبر الخلوي ، تنقسم الخزعة الجلدية أولاً ميكانيكياً إلى قطع صغيرة ، ثم تتم معالجة شظايا الجلد بمساعدة الإنزيمات: التربسين ، كولاجيناز ، ديسباس ، إلخ.

تحت تأثير الإنزيمات ، يحدث التدمير بواسطة الديسموسيومات ويتم إطلاق الخلايا الكيراتينية في الوسط كخلايا أو مجاميع منفصلة تتكون من أعداد مختلفة من الخلايا. للثقافة ، تستخدم الخلايا الكيراتينية القاعدية فقط والتي تزرع في وسائل خاصة في الحاضنات التي تحتوي على 5 ٪ CO ، في أطباق بتري أو في قوارير عند t = 37 درجة مئوية. في غضون 48 ساعة ، لوحظ تشكيل مستعمرات الخلايا الكيراتينية ، التي تتلاقى تدريجيا إلى أحادي الطبقة. بعد الحصول على عدد كاف من الخلايا ، ينتشر التعليق الناتج على أغطية الجرح المعدّة لهذا الغرض ويوضع في أطباق بتري. من التعليق ، يتم تشكيل أول طبقة أحادية الطبقة ومن ثم طبقة متعددة الطبقات من الخلايا الكيراتينية. من الناحية الشكلية ، تظهر مراحل عملية زراعة الخلايا الكيراتينية في الشكل. 12 (33.43.54.65).

عادة ما يستغرق تشكيل تكوين الخلايا الكيراتينية متعدد الطبقات المناسبة للزراعة 7-10 أيام. في بعض الأحيان تكون هذه الفترة أطول ، وهذا يعتمد على جودة المادة المصدر (العمر ، صحة المتبرع ، صحة المواد ، جودة الوسائط المستخدمة ، إلخ). إذا كانت الطبقات المتعددة تتغذى ، فعلى سطحها قد تكون هناك خلايا ذات ظواهر إستماتة غير مناسبة للزراعة. يتم تسليم أطباق بتري ، مع نمت عليها على أغطية الجرح بواسطة طبقات متعددة الطبقات من الخلايا الكيراتينية (IPC) ، إلى العيادة في حاويات خاصة عند درجة حرارة لا تقل عن + 15 درجة مئوية.

طريقة Green المعدلة لتنمية IPC

في عملنا كطلاء الجرح ، استخدمنا متخفي متعدد الطبقات ، والتخلي عن أفلام polypore التي بدأنا العمل في تجربة مع الفئران. وهكذا ، نمت لنا طبقات الكيراتينية متعددة الطبقات من قبلنا على باتيست prefat ومعقمة ، على الرغم من أنها ليست أيضا تغطية الجرح الأمثل.

أجريت دراسات سريرية على المتطوعين مع مراعاة المعايير الأخلاقية الضرورية: توقيع معاهدة وموافقة مستنيرة.

1. تم تطبيق ثقافة ذاتية (الذاتية) وأخذت من الخلايا المصرفية (allogenic) keratinocytes.
2. تم الحصول على الخلايا الكيراتينية الخاصة من قطعة من الجلد قطع من داخل الكتف من المرضى.
3. تم تنفيذ عملية إزالة جلدي من الندوب مع مساعدة من thermocoupling والأقراص الدوارة والليزر erbium.
4. تم أخذ مجموعات من المرضى الذين يعانون من الندبات المعيارية ، نقص التغذيه ونقص التصنع.

تتألف العملية التكنولوجية لتطبيق التكنولوجيا الخلوية لتحسين نوع الندوب الجلدية من المراحل التالية:

1. اختيار المرضى.
2. شرح جوهر العلاج ، وتوقيت الحصول على النتائج المتوقعة ، والتوقيع على معاهدة وموافقة مستنيرة.
3. تعيين المرضى لمدة 2-3 أسابيع قبل الجراحة selmevit بواسطة 1T. 3 مرات في اليوم ، زينكتيونال على 1T. 3 مرات في اليوم.
4. أخذ قطعة من الجلد طولها 2.0 سم وعرضها 0.7-1.0 سم من السطح الداخلي للكتف ، مرتفعة ، تقريبًا في الجزء السفلي من المنطقة الإبطية ، للحصول على الخلايا الكيراتينية الذاتية.
5. في حالة رفض المرضى لعزل الخلايا الكيراتينية الخاصة بهم بسبب إمكانية الحصول على ندبة خطية على السطح الداخلي للكتف ، تم أخذ المادة الخلوية من بنك الخلية (الخلايا القرنية المسببة للتلوث).
6. تم عزل الخلايا الكيراتينية ونموا في ظروف مختبر معتمد لهذا النوع من العمل.
7. بعد حصوله على شهادة IPC كافية للزرع ، تم إجراء يوم جراحي للندوب في العيادة ، حيث تم جلب المواد في حاويات خاصة في أطباق بتري.
8. أداء عملية جلدي الكرش وجرفت سطح الأرض الارقاء بمحلول ملحي معقم والمجففة، وعندها أنه زرع في العقيمة الكمبري IPC "خلايا القاعدة". أي أن الخلايا التي كانت أعلى في MIC كانت أقل ، مجاورة للسطح المصقول.
9. تم تركيب فيلم معقم على القمة ، تم تثبيته على الجلد بضمادة مرنة أو شريط مطاطي أومنيفيكس. بدلاً من الفيلم ، يمكن استخدام طلاءات الجرح غير المكتملة التي تحتوي على السيليكون ، على سبيل المثال ألواح Mepitel ، Mepiform ، هلام السيليكون.

بعد 5-7 أيام ، تتم إزالة الفيلم أو طلاء السيليكون. بحلول هذا الوقت ، يجب على جميع الخلايا الكيراتينية الزحف على الندبة المصقولة والالتصاق بسطحها.

10. البيئة الرطبة التي تم إنشاؤها في إطار الفيلم وطلاء السيليكون يساهم بنشاط في هذا. يمكن أن يظل المعمدان المتبقي على الندبة من هذه النقطة مشبعًا بجبن كوريوز أو شيتوزان. نتيجة لذلك ، في اليوم الثاني ، يتم إنشاء قشرة كثيفة ، من أجل راحة المريض ، من الأفضل إصلاحها باستخدام جص مرن قابل للنفاذ للهواء ، على سبيل المثال Omnifix. تسمح القشرة القابلة للتنفس للبشرة المتكونة حديثًا بالتفريق وتتحول إلى طبقة ناضجة.

اعتمادا على نوع الندبة وعمق الطحن ، يتم رفض الضماد بعد 8-10 أيام. لدى البشرة في هذا الوقت طبقات خلوية أكثر من 30-40٪ منها في الجلد الطبيعي. لا يتكون الغشاء القاعدي. تفرز الخلايا الكيراتينية في البشرة السميكة كتلة من الجزيئات النشطة بيولوجيًا في النسيج الندبي.

يعتمد نجاح المعالجة بالبيوتكنولوجيا للندب بشكل كبير على طريقة العناية بها في فترة ما بعد الجراحة. ثقافات الخلية هي نوع من "الجرح" من الجرح ، وفي الفترات المبكرة بعد الزرع ، يمكن فصل الـ BMD بسهولة عن الأنسجة الكامنة. لذلك ، ينصح المرضى بالعناية بالندبة بعد الجراحة. لمدة 8-9 أشهر ، لا تفرك و تعمل بسهولة مع الماء المغلي البارد لتجنب تمزيق البشرة الرقيقة التي تم إنشاؤها حديثا والتي لا تحتوي على قبضة محكمة مع الأنسجة الكامنة.

ملاحظة.

قبل الجراحة وأثناء الاستخدام جلدي للتأكسد الهالوجينية والمواد الحافظة (yodopiron، sulyodopiron، iodinol، yodinat، الكلورهيكسيدين، بيروكسيد الهيدروجين) يجوز قبل زرع kletok- بطلان تماما بسبب آثارها السامة للخلايا. السمية للخلايا هي أيضا الميثيلين الأزرق. الأخضر اللامع.

لتجنب العدوى ، خاصة عند التعامل مع الندوب الضخاميّة ، من الممكن معالجة حقل التشغيل بكبريتات النيومايسين أو البوليميكسين أو الجنتاميسين. أنها لا تمارس تأثير السامة للخلايا الكيراتينية.

نتيجة لهذا العلاج ، يتم تحقيق تأثير ثلاثي.

1. محاذاة سطح الكرش.
2. خلق طبقة فوقها من بشرة جديدة ، وسمك طبيعي.
3. تحويل ندبا في dermopodobnuyu بفعل السيتوكينات وعوامل النمو وغيرها من الجزيئات النشطة بيولوجيا يفرز من قبل خلايا والخلايا الكيراتينية زرع حفز بها، الخلايا الليفية الضامة و.

تصبح الندبة أقل ملحوظة ، وأكثر مرونة ، وتظهر المسام في ذلك ، ويمكن استعادة التصبغ الشعر ، وتصبغ بسبب وجود الخلايا الصباغية في لجنة السياسة النقدية.

ومع ذلك ، فإن كل هذه اللحظات الإيجابية في cicatrix لا تأتي على الفور. في هذا الصدد ، من الضروري تحذير المرضى. أن عملية تحول نسيج الندبة إلى الأدمة بطيئة ويمكن توقع النتيجة المثلى لمثل هذا العلاج في موعد لا يتجاوز 10-14 شهرًا. بعد أن يتم رفض الضماد مباشرة ، تكون الأسطح المصقولة متعددة الألوان واضحة ، كلما كانت عملية الطحن أكثر إشراقا. أقل ضرر على الجلد يحدث عند طحن ندبات normotrophic مع ليزر erbium. تم استعادة لون الندوب والجلد المحيط في الفترة من 3 إلى 8 أسابيع. على الرغم من هذه الاحتياطات ، في بعض الأحيان هناك فرط تصبغ ما بعد الجراحة ، والتي يمكن أن تستمر بشكل مستقل لعدة أشهر.

[1], [2], [3], [4], [5], [6], [7], [8], [9], [10], [11], [12], [13], [14], [15], [16]